張 莉， 尚楚翔， 孫 成＊

（1.江蘇省食品藥品檢驗(yàn)所，江蘇 南京210008；2.南京大學(xué)，江蘇 南京210093）

鄰苯二甲酸酯類化合物（phthalate esters，PAE）是來源于石油化工的塑化劑，常用于日常塑膠用品，其中也包括藥品包裝材料。鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)進(jìn)入人體后會導(dǎo)致人體內(nèi)分泌失調(diào)，引發(fā)惡性腫瘤并容易造成畸形兒等嚴(yán)重危害［1］。目前，常用的PAE有十幾種，已有6種PAE被美國環(huán)保局列為重點(diǎn)控制污染物，其中3種已列入我國環(huán)境優(yōu)先控制污染物，為鄰苯二甲酸二甲酯（DMP）、鄰苯二甲酸二丁酯（DBP）與鄰苯二甲酸（2－乙基）己酯（DNOP）［2］。

生脈飲是2012年國家抽樣性檢查品種，由紅參、麥冬和五味子等組成，具有益氣復(fù)脈、養(yǎng)陰生津之功效，用于氣陰兩虧、心悸氣短、脈微自汗的治療［3］。生脈飲為口服液制劑，包裝一般為鈉鈣玻璃管制口服液體瓶配塑膠密封墊或聚氯乙烯／低密度聚乙烯口服液體藥用復(fù)合膜硬片，這兩種包裝材料均有可能在制備過程中使用PAE。PAE可通過包裝材料與生脈飲直接接觸而遷移至藥液中，從而使生脈飲存在用藥安全隱患。

目前，PAEs的檢測方法有紫外分光光度法［4］、熒光定量PCR 法［5］、高效液相色譜法［6，7］、高效液相色譜－質(zhì)譜法（HPLC－MS）［8，9］、氣相色譜法［10］、氣相色譜－質(zhì)譜法（GC－MS）［11－14］，其中 GC－MS多采用選擇離子檢測（SIM）模式。本文建立了氣相色譜－三重四極桿質(zhì)譜（GC－QQQ MS）同時(shí)測定生脈飲中17種PAE殘留量的方法，應(yīng)用三重四極桿質(zhì)譜儀以多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）模式進(jìn)行監(jiān)測，這種模式采用母離子→子離子的離子對形式，可以消除雜質(zhì)的干擾，且靈敏度高，可準(zhǔn)確有效地測定生脈飲中PAE的殘留量，提高用藥安全。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Agilent 7890A GC／7000BQQQ氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用儀，配自動(dòng)進(jìn)樣器、HP－5MS毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.25 mm×0.25μm）（美國Agilent公司）。

17種鄰苯二甲酸酯類化合物（見表1）標(biāo)準(zhǔn)品：DMP（純度99.5%）、鄰苯二甲酸二乙酯（DEP，純度99.5%）、鄰苯二甲酸二烯丙酯（DAP，純度98.0%）、鄰苯二甲酸二異丁酯（DIBP，純度99.0%）、DBP（純度99.0%）、鄰苯二甲酸二（2－甲氧基）乙酯（DMEP，純度 98.0%）、鄰苯二甲酸二 （4－甲基－2－戊基）酯（BMPP，純度99.0%）、鄰苯二甲酸二（2－乙氧基）乙酯（DEEP，純度99.5%）、鄰苯二甲酸二戊酯（DPP，純度99.2%）、鄰苯二甲酸丁基芐基酯（BBP，純度98.4%）、鄰苯二甲酸二己酯（DHXP，純度98.0%）、鄰 苯 二 甲 酸 二 （2－丁 氧 基 ）乙 酯 （DBEP，純 度99.5%）、鄰 苯 二 甲 酸 二 環(huán) 己 酯 （DCHP，純 度99.5%）、鄰苯二甲酸二庚酯（DHP，純度97.0%）、鄰苯二甲酸二苯酯（DPHP，純度98.5%）、鄰苯二甲酸二（2－乙基）己酯（DEHP，純度98.5%）、鄰苯二甲酸二正辛酯（DNOP，純度99.5%），Dr.Ehrenstorfer公司；正己烷（分析純，南京化學(xué)試劑有限公司）。

表1 17種PAE的MRM模式下優(yōu)化的質(zhì)譜條件Table 1 Optimal conditions of MS for the 17 PAEs in MRM mode

1.2 樣品

市售的3個(gè)生產(chǎn)廠家的5批生脈飲（廠家Ⅰ，批號代號A、B、C，包裝材料均為鈉鈣玻璃管制口服液體瓶配塑膠密封墊。廠家Ⅱ，批號代號D；廠家Ⅲ，批號代號E；包裝材料均為聚氯乙烯／低密度聚乙烯口服液體藥用復(fù)合膜硬片），規(guī)格均為10 mL／支。

1.3 GC－MS條件

載氣：高純（純度大于99.999%）氦氣，流速1.0 mL／min。進(jìn)樣口溫度：250℃。程序升溫：初始溫度為60℃，保持1 min；以10℃／min升至220℃，保持5 min；以2℃／min升至230℃，保持10 min；以2℃／min升至240℃，再以20℃／min升至280℃，保持5 min。進(jìn)樣方式：分流進(jìn)樣，分流比10∶1，進(jìn)樣量1μL。

質(zhì)譜條件：電子轟擊離子源（EI），電子能量70 eV，離子源溫度230℃；連接管溫度250℃；溶劑延遲5 min；掃描范圍m／z 40～450；其他優(yōu)化后的MRM條件見表1。

1.4 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

分別精密稱取PAE對照品適量（精確至0.001 mg），用正己烷配制成約為1 g／L 的單標(biāo)準(zhǔn)儲備液，再用各單標(biāo)準(zhǔn)儲備液配制成約為20 mg／L 的混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液。

1.5 供試品溶液的制備

精密吸取供試品25 mL，加入10 mL正己烷振搖提取，提取2次；合并正己烷液，揮發(fā)至近干，殘?jiān)屑尤胝和槿芙獠⒍ㄈ葜? mL。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜及質(zhì)譜條件的優(yōu)化

色譜條件：PAE為低揮發(fā)性的化合物，根據(jù)色譜柱的溫度范圍及化合物的沸點(diǎn)，選用弱極性柱HP－5MS作為色譜柱。在色譜分離過程中，在優(yōu)化的程序升溫條件下大部分組分能完全分離且峰形對稱，但其中DHXP和BBP沒分開，DHP、DPHP和DEHP沒有完全分開?？紤]到分析時(shí)間，這兩組組分將借助合適的質(zhì)譜條件進(jìn)行分離。

質(zhì)譜條件：通過Scan模式在m／z 40～450范圍內(nèi)進(jìn)行全掃描，選出合適的母離子；通過MS／MS模式選出母離子相應(yīng)的子離子；通過MRM模式考察了5～50 eV的碰撞能量，選擇最佳碰撞能量；最終以離子對及相應(yīng)的最佳碰撞能量在MRM模式下測定。以MRM模式檢測能消除其他成分的干擾，提高結(jié)果的準(zhǔn)確性。17種PAE的GC－MS的MRM離子流圖見圖1。

圖1 17種PAE混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的MRM離子流色譜圖Fig.1 Total ion chromatogram of the mixture of the 17 PAEs in MRM modePeaks：1.DMP；2.DEP；3.DAP；4.DIBP；5.DBP；6.DMEP；7.BMPP；8.DEEP；9.DPP；10.BBP；11.DHXP；12.DBEP；13.DCHP；14.DHP；15.DPHP；16.DEHP；17.DNOP.

2.2 線性關(guān)系及檢出限

精密吸取質(zhì)量濃度約為20 mg／L的混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、5.0、10.0 mL，分別加正己烷稀釋并定容至10 mL，得到質(zhì)量濃度范圍約為0.5～20 mg／L的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。按1.3節(jié)條件進(jìn)行GC－MS分析，以PAE質(zhì)量濃度（mg／L）的對數(shù)為橫坐標(biāo)，峰面積的對數(shù)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見表2。

表2 17種PAE的線性方程、相關(guān)系數(shù)、線性范圍及檢出限Table 2 Linear equations，correlation coefficients（r），linear ranges and LODs of the 17 PAEs

取系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液中最低濃度點(diǎn)的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液逐級稀釋，進(jìn)樣分析，以信噪比為3（S／N＝3）確定17種PAE的檢出限，結(jié)果見表2。

2.3 基質(zhì)效應(yīng)試驗(yàn)

精密吸取供試品溶液1 mL，精密加入系列標(biāo)準(zhǔn)溶液中第4個(gè)濃度點(diǎn)（PAE的質(zhì)量濃度范圍為3.76～4.40 mg／L）的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液1 mL，混勻，按1.3節(jié)的條件進(jìn)行GC－MS分析，測定得到的濃度值與第3個(gè)濃度點(diǎn)（PAE質(zhì)量濃度范圍為1.88～2.20 mg／L）的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液比較，結(jié)果無顯著差異。

2.4 精密度試驗(yàn)

取標(biāo)準(zhǔn)曲線第1個(gè)濃度點(diǎn)（PAE的質(zhì)量濃度范圍為0.47～0.55 mg／L）的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按1.3節(jié)的條件進(jìn)行GC－MS分析，連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果顯示17種PAE峰面積的RSD在0.7%～4.3%之間，表明精密度良好。

2.5 加標(biāo)回收率試驗(yàn)

精密量取生脈飲陰性樣品（經(jīng)檢測未測出PAE的生脈飲樣品）25 mL，加入一定濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，平行6份樣品，按1.5節(jié)方法制備樣品和1.3節(jié)的條件進(jìn)行GC－MS分析，計(jì)算樣品的加樣回收率，結(jié)果見表3。

表3 生脈飲中17種PAE的加標(biāo)回收率Table 3 Recoveries of the 17 PAEs spiked in Shengmaiyin

2.6 樣品分析

取市售的3個(gè)生產(chǎn)廠家的5批生脈飲，按1.5節(jié)方法制備樣品和1.3節(jié)的色譜條件進(jìn)行GC－MS分析。結(jié)果表明樣品A、B、C均未檢出PAE；而包裝材料為聚氯乙烯／低密度聚乙烯口服液體藥用復(fù)合膜硬片的樣品D和E均檢出了5種PAE（DMP含量分別為0.07和0.04μg／支，DEP為0.02和0.03μg／支，DIBP為0.73和1.31μg／支，DBP為0.61 和1.16μg／支，DEHP 為1.00和1.52μg／支），說明后者在制備過程中使用了PAE，并在貯存期間遷移至生脈飲藥液中。由此可見生脈飲使用鈉鈣玻璃管制口服液體瓶作為包裝材料更為安全。其中3批樣品的GC－MS的MRM離子流圖見圖2。

圖2 3批生脈飲樣品的GC－MS的MRM離子流色譜圖Fig.2 MRM ion chromatograms of three Shengmaiyin samples by GC－MSThe peak identifications are the same as in Fig.1.

3 結(jié)論

本文采用正己烷振搖提取作為前處理方法，操作簡便、重現(xiàn)性好、試劑消耗量較少。應(yīng)用GCQQQ MS同時(shí)測定生脈飲中17種鄰苯二甲酸酯類化合物的殘留量，可消除雜質(zhì)對目標(biāo)組分的干擾，測定結(jié)果準(zhǔn)確性好，靈敏度高。對市售生脈飲樣品的檢測結(jié)果進(jìn)行分析，建議中藥口服液制劑的包裝材料不宜使用聚氯乙烯／低密度聚乙烯口服液體藥用復(fù)合膜硬片，以消除潛在的用藥安全隱患。中藥口服液中鄰苯二甲酸酯類的殘留量的測定可以借鑒本研究建立的方法。

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