李紅專，高 潔，韓冰冰，趙海軍，王世軍

(1山東中醫(yī)藥大學(xué)，濟南250355;2濟南市第四人民醫(yī)院)

梔子是茜草科植物梔子的干燥成熟果實，性味苦寒，入心、肺、三焦經(jīng)，具有瀉火除煩、清熱利濕、涼血解毒的功效，臨床常用于治療熱病心煩、濕熱黃疸、血淋澀痛、血熱吐衄、目赤腫痛、火毒瘡瘍等證。《本草綱目》記載梔子具有解五種黃病、利五淋、通小便、解消渴及明目的功效［1］。近年研究發(fā)現(xiàn)，梔子提取物有降低血糖的作用［2］。但其作為藥食同源中藥長時間應(yīng)用對胰島的影響鮮見報道。2012年5月～2013年5月，我們觀察了長時間應(yīng)用梔子對大鼠血糖、胰島功能及結(jié)構(gòu)的影響。現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 健康Wistar大鼠30只，雌雄各半，體質(zhì)量(200±20)g，購自魯抗醫(yī)藥集團股份有限公司實驗動物中心(許可證編號:SCXK20080002);大鼠糖化血紅蛋白(HbA1C)酶聯(lián)免疫檢測試劑盒(批號:BPE 10723R)、大鼠胰島素(INS)酶聯(lián)免疫檢測試劑盒(批號:BPE 10143R)、大鼠α-淀粉酶(AMY)酶聯(lián)免疫檢測試劑盒(批號:BPE 10280)、大鼠C肽(CP)酶聯(lián)免疫檢測試劑盒(批號:BPE 10552R)購自北京博奧森生物科技有限公司;血糖儀購自德國羅氏(Accu-chek Active型);血糖試紙購自德國羅氏(批號:23464621);AO切片機為美國光學(xué)儀器公司產(chǎn)品;梔子購自濟南市建聯(lián)中藥店，經(jīng)山東中醫(yī)藥大學(xué)王世軍教授鑒定為藥典規(guī)定藥材。

1.2 實驗方法

1.2.1 梔子水煎劑制備 按《中華人民共和國藥典》(2010年版)記載梔子臨床用量的最高劑量(10 g)10倍換算成大鼠給藥劑量。梔子水煎液制備，按傳統(tǒng)臨床用藥方法對梔子進行處理，水煎濃縮，生藥濃縮濃度為0.9 g/mL，4℃貯存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 動物分組及干預(yù) 30只大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d，按體質(zhì)量隨機分為對照組、梔子組、模型組，每組各10只。模型組禁食12 h后，按65 mg/kg體質(zhì)量一次性腹腔注射1%鏈脲佐菌素(STZ)溶液制作糖尿病模型。梔子組為正常大鼠，按10 mL/(kg·d)體質(zhì)量給予梔子藥液連續(xù)灌胃40 d。對照組與模型組給予10 mL/(kg·d)生理鹽水灌胃，連續(xù)給藥40 d。

1.2.3 標本取材 41 d后處死大鼠，腹主靜脈取血，分離血清。每組于末次給藥后禁食12 h，4%水合氯醛麻醉(0.1 mL/kg)，下腔靜脈取血，手術(shù)取出胰腺。血液于L-20A型全自動高速冷凍離心機離心，4 ℃，3 500 r/min，15 min，取上清液，分裝后于－20℃冰箱保存。將胰腺固定于10%多聚甲醛中，經(jīng)脫水、石蠟包埋等步驟后，切片，行HE染色。

1.2.4 觀察指標 ①血糖及胰島功能指標:取血清，按照ELISA試劑盒方法步驟，采用全自動酶標儀法(RT-2100C型，深圳雷杜 Rayto公司)檢測HbA1C、INS、AMY及C-P水平。采用血糖檢測儀檢測下腔靜脈血血糖水平。②胰腺組織病理變化:采用HE染色，觀察胰腺組織病理變化。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS17.0軟件，計量數(shù)據(jù)以±s表示，采用單因素方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血糖及胰島功能指標 與對照組相比，梔子組HbA1C、INS、C-P、血糖均降低(P ＜0.05);與模型組相比，梔子組 HbA1C、C-P、血糖水平均降低(P＜0.05);與模型組相比，梔子組INS及C-P水平無統(tǒng)計學(xué)差異。見表1。

表1 三組血糖及胰島功能指標變化(±s)

注:與對照組比較，*P ＜0.05;與模型組比較，#P ＜0.05

組別 n HbA1C(ng/mL) INS(mIU/L) AMY(U/L) C-P(pg/mL) 血糖(mmol/L)對照組 10 20.21 ±1.71 4.10 ±0.25 79.86 ±10.36 3 758.69±253.16 10.46 ±3.40梔子組 10 17.53 ±3.46*# 3.73 ±0.37* 72.46 ±13.24 3 068.47 ±719.03*# 4.95 ±1.47*#模型組 10 21.46 ±4.46 3.50 ±0.60* 75.59 ±11.14 3 575.21 ±516.53 33.98 ±7.37*

2.2 胰腺組織病理變化 對照組胰腺組織清晰，呈圓形或橢圓形，結(jié)構(gòu)完整，細胞數(shù)量較多，未見炎性細胞浸潤。梔子組胰腺組織較清晰，呈圓形或橢圓形，結(jié)構(gòu)較完整，但可見胰島組織肥大、細胞空泡樣變性、炎性細胞浸潤等病理改變。模型組胰島萎縮，體積明顯縮小，細胞核呈固縮狀態(tài)。見圖1。

圖1 三組胰島組織病理變化(HE染色，40×)

3 討論

中醫(yī)將糖尿病病機歸納為陰虛為本，燥熱為標［3］;將糖尿病分為燥熱傷津、胃熱津虧、氣陰兩虛、陰陽兩虛、陰虛陽浮諸證型［4］。梔子具有清熱瀉火的功效，是臨床常用的中藥之一。《藥性論》中記載“梔子殺蟅蟲毒，去熱毒風(fēng)，利五淋，主中惡，通小便，解五種黃病，明目，治時疾除熱及消渴口干，目赤腫痛”?！毒霸廊珪分刑岬健皸d子，味苦，氣寒。味厚氣薄，氣浮味降，陰中有陽。因其氣浮，故能清心肺之火，解消渴，療時疾躁煩，心中懊惱”。故在中醫(yī)臨床上梔子常用于糖尿病的治療。

現(xiàn)代藥理研究表明，梔子提取物能在一定程度上降低血糖。梔子中提取的梔子苷與梔子苷屬同類化合物的環(huán)烯萜苷均有降血糖的作用［5］。謝文利等［6］發(fā)現(xiàn)梔子中提取的京尼平苷可明顯降低糖尿病模型大鼠血糖、提高糖耐量。京尼平苷對降低血清胰島素、提高胰島素敏感指數(shù)和降低血脂也有明顯療效［7］。晉玉章等［8］發(fā)現(xiàn)，梔子中提取的西紅花苷可明顯降低血糖、膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白水平，升高蔗糖糖耐量和高密度脂蛋白水平。費曜等［9］認為梔子可能是通過保護胰島β細胞或促進受損β細胞的修復(fù)促進胰島素分泌，其有效作用可能是多靶點的。

梔子是一種藥食同源中藥，但其藥性苦寒，不宜久服。本研究的目的是觀察梔子對正常大鼠血糖及胰島的影響及長期服用梔子是否存在對胰島的毒性作用，結(jié)果顯示，與對照組相比，梔子組HbA1C、INS、C-P、血糖均有降低趨勢。與模型組相比，梔子組HbA1c、C-P、血糖均降低，提示梔子具有降低大鼠血糖的作用，這與 Miura 等［5］、Kimura 等［10］、周瑞華等［11］的結(jié)論是一致的。而與模型組相比，梔子組血漿INS、C-P水平也出現(xiàn)下降，提示長時間應(yīng)用寒性中藥梔子可以抑制正常大鼠胰島的胰島素的分泌能力。

本研究對胰島的鏡下觀察結(jié)果顯示，梔子組與模型組胰島存在明顯損傷，模型組胰島萎縮，體積明顯縮小，細胞核呈固縮狀態(tài);梔子組雖未達到模型組胰島的損傷程度，但切片顯示其胰島呈現(xiàn)水腫狀態(tài)，組織肥大、細胞空泡樣變性、炎性細胞浸潤等病理改變。

田義龍等［12］以梔子為主組成的梔子豉湯對糖尿病模型大鼠所進行的干預(yù)實驗結(jié)果顯示，梔子豉湯可以增加糖尿病大鼠的胰島素敏感。傅永錦等［13］利用梔子水提取物干預(yù)脂肪肝模型大鼠，結(jié)果顯示梔子可提高胰島素敏感指數(shù)。本研究發(fā)現(xiàn)梔子組灌服梔子40 d后胰島組織出現(xiàn)病理改變，結(jié)合INS、C-P水平下降，考慮長期服用梔子可導(dǎo)致血液胰島素水平下降，但血糖降低的現(xiàn)象可能與機體對胰島素的敏感性提高有關(guān)。

以上研究結(jié)果說明，長時間應(yīng)用寒性中藥梔子可以導(dǎo)致胰島損傷及胰島素分泌水平下降，但由于梔子可以增加胰島素的敏感指數(shù)，因而血糖水平并未出現(xiàn)上升的趨勢。更長時間的梔子用藥會不會因為胰島的損傷及胰島素分泌能力的下降，進而導(dǎo)致血糖水平升高，從而引起更大的毒性作用還有待進一步的實驗研究。

綜上所述，苦寒中藥梔子可降低血糖水平，但長期應(yīng)用會導(dǎo)致胰島結(jié)構(gòu)受損。如何通過配伍、炮制等手段，使其減毒增效，是今后值得深入研究的問題。

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