溫演偉，董洪松，田耕

(深圳市第二人民醫(yī)院耳鼻喉科，廣東深圳 518035）

放療聯(lián)合高效細(xì)胞因子誘導(dǎo)殺傷細(xì)胞治療鼻咽癌的臨床療效觀察

溫演偉，董洪松，田耕

(深圳市第二人民醫(yī)院耳鼻喉科，廣東深圳 518035）

目的分析高效細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞聯(lián)合放射治療治療鼻咽癌臨床療效和安全性。方法選取2010年6月至2013年6月在我院就診的60例鼻咽癌患者為研究對(duì)象，應(yīng)用隨機(jī)數(shù)字表法將患者分為分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組各30例，對(duì)照組給予放射治療，實(shí)驗(yàn)組則在對(duì)照組治療的基礎(chǔ)上給予高效細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞治療，比較觀察兩組患者免疫指標(biāo)變化和Karnofsky評(píng)分變化。結(jié)果治療4周后兩組患者CD4+/CD8+比值、Treg細(xì)胞百分率、NK細(xì)胞百分率、NKT細(xì)胞百分率均較前明顯改善，但實(shí)驗(yàn)組患者Treg細(xì)胞百分率和NKT細(xì)胞百分率上調(diào)更明顯，而CD4+/CD8+比值和NK細(xì)胞百分率下降更明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。實(shí)驗(yàn)組患者的Karnofsky評(píng)分明顯優(yōu)于對(duì)照組患者，其差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論高效細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞聯(lián)合放射治療能夠有效改善患者的免疫功能，改善患者的生活質(zhì)量，值得在臨床上進(jìn)一步推廣。

高效細(xì)胞因子；殺傷細(xì)胞；放射治療；鼻咽癌；臨床療效

在我國(guó)，鼻咽癌是最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅患者的身心健康，甚至危及患者的性命[1-2]。治療上，疾病早期首選放射治療[3-4]，而對(duì)于晚期鼻咽癌患者多選用以放射治療為主、化療為輔的綜合治療[5-6]。為此，學(xué)者們和腫瘤科醫(yī)師一直致力于優(yōu)化安全高效的綜合治療方案。高效CIK細(xì)胞對(duì)肝癌的治療已經(jīng)有明確的治療效果，而高效CIK治療其他系統(tǒng)的腫瘤具有相同的治療機(jī)制。本研究中筆者采用高效細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞聯(lián)合放射治療在我院就診的60例鼻咽癌患者，收到了滿意的臨床效果，現(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2010年6月至2013年6月在我院就診的60例鼻咽癌患者為研究對(duì)象?；颊呷虢M條件：(1)年齡18～75歲；(2)預(yù)期生存期大于3個(gè)月；(3)病理組織學(xué)上確認(rèn)的鼻咽癌，已經(jīng)放射治療，或放療失敗的轉(zhuǎn)移性Ⅳ期患者；(4)血肌酐≤1.5 μlm(正常值上限)，血膽紅素≤1.5 μlm(正常值上限)，ALT和AST≤2.5 μlm；(5)骨髓儲(chǔ)備充足(白細(xì)胞數(shù)＞3×109/L，淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)＞0.83×109/L，血小板＞50×109/L)；(6)患者簽署知情同意書(shū)；(8)無(wú)明確過(guò)敏史；(9)經(jīng)濟(jì)上可以承受。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)有活動(dòng)的未控制的感染者；(2)有嚴(yán)重心臟病史，未控制的高血壓病，不穩(wěn)定心絞痛，或充血性心力衰竭；(3)懷孕或哺乳期女性；(4)有T淋巴細(xì)胞相關(guān)的免疫疾病史。應(yīng)用隨機(jī)數(shù)字表法將患者分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。其中，對(duì)照組30例患者中男性16例，女性14例；年齡51～75歲，平均(58.62±18.47)歲。實(shí)驗(yàn)組30例患者中男性17例，女性13例；年齡50～75歲，平均(59.45±18.87)歲。兩組患者性別構(gòu)成和平均年齡等方面比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 治療方法對(duì)照組患者給予放射治療，實(shí)驗(yàn)組患者則在上述治療的基礎(chǔ)上給予高效細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞治療。本試驗(yàn)用的高效CIK細(xì)胞由患者自身提供20～100 ml外周血(根據(jù)患者本人淋巴細(xì)胞絕對(duì)值決定所需要的血量)，體外培養(yǎng)擴(kuò)增至原來(lái)的100～1 000倍。每次回輸含3～10×109細(xì)胞/ 100～200 ml含1%白蛋白的生理鹽水。細(xì)胞產(chǎn)品無(wú)細(xì)菌、霉菌、支原體、病毒等任何微生物和內(nèi)毒素的污染。抽外周血后約2周開(kāi)始回輸，患者每周回輸一次，至少回輸4次。

1.3 免疫指標(biāo)及其檢測(cè)方法觀察兩組患者的CD4+/CD8+比值、Treg細(xì)胞百分率、NK細(xì)胞百分率、NKT細(xì)胞百分率。檢測(cè)方法：分別于治療前1 d及治療4周后采集患者2 ml清晨空腹以肝素抗凝外周靜脈血。嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，取100 μl外周靜脈血與20 μl相應(yīng)抗體充分混勻，在混勻后置于室溫時(shí)避光反應(yīng)20 min，加入2 ml 0.85%NH4Cl溶液，再將其置于室溫下避光反應(yīng)10 min，離心去除上清，再PBS洗滌2次，最后將其置于流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。

1.4 Karnofsky評(píng)分[7]患者正常，無(wú)癥狀和體征為100分；能進(jìn)行正常活動(dòng)，有輕微癥狀和體征為90分；勉強(qiáng)進(jìn)行正?；顒?dòng)，有一些癥狀或體征為80分；患者生活能自理，但不能維持正常生活和工作為70分；患者生活能大部分自理，但偶爾需要?jiǎng)e人幫助為60分；患者常需要人照料為50分；患者生活不能自理，需要特別照顧和幫助為40分；患者生活嚴(yán)重不能自理為30分；患者病重，需要住院和積極的支持治療為20分；患者重危，臨近死亡為10分；患者死亡為0分。量表得分越高，健康狀況越好。等分越低，健康狀況越差。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS19.0軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，組間計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者免疫指標(biāo)變化比較治療前兩組患者CD4+/CD8+比值、Treg細(xì)胞百分率、NK細(xì)胞百分率、NKT細(xì)胞百分率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，治療4周后，兩組患者CD4+/CD8+比值、Treg細(xì)胞百分率、NK細(xì)胞百分率、NKT細(xì)胞百分率均較前明顯改善，但是，實(shí)驗(yàn)組患者Treg細(xì)胞百分率和NKT細(xì)胞百分率上調(diào)更明顯，而CD4+/CD8+比值和NK細(xì)胞百分率下降更明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表1。

表1 兩組患者免疫指標(biāo)變化比較(±s)

表1 兩組患者免疫指標(biāo)變化比較(±s)

項(xiàng)目例數(shù)CD4+/CD8+NK(%)NKT(%)Treg(%)對(duì)照組實(shí)驗(yàn)組t值P值30 30治療前0.94±0.14 0.93±0.16 0.258＞0.05治療4周后1.18±0.21 1.46±0.22 5.043＜0.05治療前15.76±2.65 15.84±2.72 0.115＞0.05治療4周后17.23±3.21 22.26±3.13 6.145＜0.05治療前5.42±2.56 5.48±2.70 0.088＞0.05治療4周后10.41±2.85 14.38±2.79 5.452＜0.05治療前9.21±1.53 9.15±1.47 0.155＞0.05治療4周后6.28±1.27 4.21±1.23 6.413＜0.05

2.2 兩組患者Karnofsky評(píng)分比較治療前兩組患者Karnofsky評(píng)分差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，治療4周后，兩組患者Karnofsky評(píng)分均較前明顯改善，但是實(shí)驗(yàn)組患者Karnofsky評(píng)分明顯優(yōu)于對(duì)照組患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表2。

2.3 毒副反應(yīng)觀察實(shí)驗(yàn)組患者在回輸高效細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞過(guò)程中有6例出現(xiàn)低熱，給予物理降溫對(duì)癥處理后體溫均降至正常；1例出現(xiàn)輕度皮疹，給予抗過(guò)敏治療后患者的皮疹消退。

表2 兩組患者Karnofsky評(píng)分比較（±s，分）

表2 兩組患者Karnofsky評(píng)分比較（±s，分）

組別對(duì)照組實(shí)驗(yàn)組t值P值例數(shù)30 30治療前73.18±6.63 72.80±7.02 13.296＞0.05治療4周后82.57±5.70 89.94±6.89 4.514＜0.05 t值5.882 9.88 P值＜0.05＜0.05

3 討論

近30年來(lái)隨著我國(guó)人民生活水平的提高和人均壽命不斷延長(zhǎng)，腫瘤已成為最主要的居民死亡原因。鼻咽癌是一種常見(jiàn)的頭頸部惡性腫瘤。在東南亞及我國(guó)南方多見(jiàn)，廣東省是其中高發(fā)地。放療是治療鼻咽癌的主要方法，但在鼻咽癌放療不敏感、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的情況下，缺乏有效、不良反應(yīng)輕的治療手段。目前免疫治療已經(jīng)成為手術(shù)、化療、放療之后的一種無(wú)創(chuàng)、有效的治療方法，得到全世界廣泛承認(rèn)。

隨著對(duì)腫瘤免疫和免疫逃逸機(jī)制的深入了解，以及淋巴細(xì)胞體外培養(yǎng)技術(shù)的長(zhǎng)足進(jìn)步，不同方式的實(shí)體瘤的細(xì)胞免疫治療顯現(xiàn)了有前景的療效，其中包括對(duì)腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的抑制作用、對(duì)腫瘤瘤體本身的消除作用、對(duì)患者生存期的延長(zhǎng)作用和對(duì)患者生存質(zhì)量的改善作用，因此在國(guó)際上逐漸通過(guò)了不同國(guó)家的藥監(jiān)機(jī)構(gòu)審查[7-10]，成為進(jìn)入Ⅲ期臨床和獲得臨床使用新藥文號(hào)的制劑，如美國(guó)Dendreon公司的樹(shù)突狀細(xì)胞疫苗Sipuleucel-T和Lapuleucel-T等過(guò)繼免疫治療。這使得免疫治療成為腫瘤的第四種治療模式漸漸成為現(xiàn)實(shí)。

在我國(guó)，已有利用LAK和CIK(Cytokine Induced Killer Cell，細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞)進(jìn)行實(shí)體瘤治療的經(jīng)驗(yàn)，治療所采用的細(xì)胞來(lái)源和培養(yǎng)方法在各地、各醫(yī)院差異較大。隨著細(xì)胞生物學(xué)、腫瘤免疫學(xué)近年來(lái)在技術(shù)手段上的突破和機(jī)制研究的發(fā)展，新一代的腫瘤細(xì)胞免疫治療方法正在逐步形成并發(fā)展。在本研究中，我們采用一種新型的細(xì)胞治療-高效細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(高效CIK)進(jìn)行免疫治療。該方法使用的淋巴細(xì)胞來(lái)源于患者自身的少量外周血。在約2周的短時(shí)間內(nèi)，這些淋巴細(xì)胞可以活化擴(kuò)增達(dá)約1 000倍后，再回輸于患者體內(nèi)。高效CIK試劑系統(tǒng)培養(yǎng)的自體淋巴細(xì)胞在日本為常規(guī)使用的腫瘤細(xì)胞免疫治療的手段。日本在治療肝癌的隨機(jī)臨床試驗(yàn)中，使用高效CIK進(jìn)行的免疫治療可提高患者的無(wú)復(fù)發(fā)存活率：經(jīng)過(guò)5次高效CIK回輸治療的肝癌術(shù)后患者，與不經(jīng)該治療的對(duì)照組比較，免疫治療組出現(xiàn)首次復(fù)發(fā)的時(shí)間要明顯延長(zhǎng)(P=0.008)。與無(wú)該治療的患者比較，高效CIK治療組肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)率降低18%，復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)率減少了41%(P=0.01)。高效CIK在韓國(guó)于2007年被批準(zhǔn)進(jìn)入肝癌治療的Ⅳ期臨床，惡性腦腫瘤治療的Ⅲ期臨床試驗(yàn)。日本和韓國(guó)截止到2004年為止有2 134例不同系統(tǒng)的腫瘤患者參加了這項(xiàng)治療，其中完全緩解的患者為5%，部分緩解的患者是17%，長(zhǎng)期病情穩(wěn)定的患者為16%。同時(shí)沒(méi)有發(fā)現(xiàn)Ⅲ和Ⅳ度的不良反應(yīng)。

本研究發(fā)現(xiàn)：實(shí)驗(yàn)組患者Treg細(xì)胞百分率和NKT細(xì)胞百分率上調(diào)更明顯，而比值和NK細(xì)胞百分率下降更明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。實(shí)驗(yàn)組患者Karnofsky評(píng)分明顯優(yōu)于對(duì)照組患者的，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。究其原因可能與以下原因有關(guān)：患者細(xì)胞減少會(huì)使腫瘤細(xì)胞免疫逃逸，而細(xì)胞升高則引起細(xì)胞免疫損害，導(dǎo)致患者體內(nèi)比值明顯下降。在腫瘤免疫抑制及逃逸機(jī)制中起重要作用的Treg細(xì)胞廣泛存在于淋巴瘤、胃癌、乳腺癌、肝癌、肺癌等多種腫瘤微環(huán)境中，且患者局部的Treg細(xì)胞數(shù)量與患者預(yù)后密切相關(guān)。本研究筆者采用高效細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞治療能夠明顯改善患者T淋巴細(xì)胞的數(shù)量和比例，刺激T淋巴細(xì)胞活化，Treg細(xì)胞、NKT細(xì)胞、NK細(xì)胞、比值異常情況得到糾正，增強(qiáng)腫瘤患者機(jī)體細(xì)胞和體液免疫功能，有效改善患者的免疫功能，改善患者的生活質(zhì)量。

綜上所述，高效細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞聯(lián)合放射治療能夠有效改善患者的免疫功能，改善患者的生活質(zhì)量，值得臨床上進(jìn)一步推廣應(yīng)用。

[1]Xue WQ,Qin HD,Ruan HL,et al.Quantitative association of tobacco smoking with the risk of nasopharyngealcarcinoma:a comprehensive meta-analysis of studies conducted between 1979 and 2011 [J].Am J Epidemiol,2013,178(3):325-338.

[2]Nguyen NP,Ceizyk M,Vinh-Hung V,et al.Feasibility of tomotherapy to reduce cochlea radiation dose in patients with locally advanced nasopharyngeal cancer[J].Tumori,2012,98(6):709-714.

[3]Boghani Z,Husain Q,Kanumuri VV,et al.Juvenile nasopharyngeal angiofibroma:a systematic review and comparison of endoscopic,endoscopic-assisted,and open resection in 1047 cases[J]. Laryngoscope,2013,123(4):859-869.

[4]Leong SC.A systematic review of surgical outcomes for advanced juvenile nasopharyngealangiofibroma with intracranial involvement [J].Laryngoscope,2013,123(5):1125-1131.

[5]邢宏,韓方正,汪莉萍.細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(CIK)的基礎(chǔ)與臨床研究新進(jìn)展[J].中國(guó)免疫學(xué)雜志,2011,27(1):88-92.

[6]要跟東,劉愛(ài)民,霍紅旗,等.CIK對(duì)三種鼻咽癌細(xì)胞株殺傷活性的研究[J].山東醫(yī)藥,2011,51(3):79-80.

[7]李曉英,鮑楊漪,江蓓蕾,等.不同類型腫瘤患者自體CIK細(xì)胞治療對(duì)機(jī)體免疫狀態(tài)及臨床癥狀改善的影響[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2012,47(4):434-437.

[8]董毅,朱太崗,李月紅,等.CIK細(xì)胞與DC-CIK細(xì)胞抗腫瘤效應(yīng)的對(duì)照研究[J].中華全科醫(yī)學(xué),2011,9(12):1844-1846.

[9]郭云泉,趙峰,梁麗萍,等.CIK細(xì)胞的體外擴(kuò)增能力及殺瘤效應(yīng)[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2011,34(11):1244-1246.

[10]Li JJ,Gu MF,Pan K,et al.Autologous cytokine-induced killer cell transfusion in combination with gemcitabine plus cisplatin regimen chemotherapy for metastatic nasopharyngeal carcinoma[J].J Immunother,2012,35(2):189-195.

Observation of clinical efficacy and safety of nasopharyngeal carcinoma treated with radiotherapy combined cytokine-induced killer cells therapy.

WEN Yan-wei,DONG Hong-song,TIAN Geng.Department of Otolaryngology, The Second People's Hospital of Shenzhen,Shenzhen 518035,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo analyze the clinical efficacy and safety of nasopharyngeal carcinoma treated with radiotherapy combined combined cytokine-induced killer cells therapy.MethodsSixty cases of patients with nasopharyngeal carcinoma(NPC)from June 2010 to June 2013 in our hospital were selected as the research objects,and were divided into experimental group and control group by random number table method.The 30 cases in control group were given radiotherapy,and the another 30 cases in experimental group were given cytokine-induced killer cell therapy combined with radiotherapy.And then immune indexes and Karnofsky scores in both groups were observed.ResultsAfter 4 weeks treatment,CD4+/CD8+ratio,the percentages of Treg cells,the percentages of NK cells and NKT cells in both groups were obviously improved.Compared to the control group,the percentages of Treg cells and NKT cells in experimental group increased more obviously,while CD4+/CD8+ratio and NK cells percentage decreased more significantly with statistical differences(P＜0.05).The Karnofsky score in experimental group was better than that in control group with statistically significant difference(P＜0.05).ConclusionThe cytokine-induced killer cells with radiation therapy can effectively improve the patient's immune function as well as the quality of life,which is worthy of further clinical application.

Efficient cell factor;Killer cells;Radiation therapy;Nasopharyngeal carcinoma;Clinical curative effect

R739.63

A

1003—6350（2014）11—1570—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.11.0610

2013-11-25)

2012年深圳市科技局項(xiàng)目（編號(hào)：201202025）

溫演偉。E-mail：wyw55@126.com