華海俠，董玉寶，王曉華，姚 薇，王 玲，付占昭＊，顧 濤，趙 敏

（秦皇島市第一醫(yī)院1.腫瘤內(nèi)科；3.老年病科；4.急診科；5.病理科，河北秦皇島066000；2.撫寧縣人民醫(yī)院腫瘤科，河北秦皇島066300）

Snail和SRF在人惡性腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其與微血管密度的關(guān)系

華海俠1，董玉寶2，王曉華3，姚 薇1，王 玲4，付占昭1＊，顧 濤1，趙 敏5

（秦皇島市第一醫(yī)院1.腫瘤內(nèi)科；3.老年病科；4.急診科；5.病理科，河北秦皇島066000；2.撫寧縣人民醫(yī)院腫瘤科，河北秦皇島066300）

膠質(zhì)瘤是神經(jīng)系統(tǒng)常見腫瘤，手術(shù)和傳統(tǒng)放化療手段效果不佳［1］。膠質(zhì)瘤的發(fā)生機(jī)制尚未完全闡明，但是目前認(rèn)為腫瘤細(xì)胞獲得侵襲和轉(zhuǎn)移的能力，以及產(chǎn)生放化療耐藥能力是腫瘤復(fù)發(fā)和生存率低的分子基礎(chǔ)［2］。本研究通過檢測鋅指蛋白轉(zhuǎn)錄因子Snail和血清反應(yīng)因子（SRF），觀察二者與微血管密度（MVD）之間的關(guān)系，為探討膠質(zhì)瘤發(fā)生機(jī)制提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 臨床標(biāo)本 收集秦皇島市第一醫(yī)院2010年6月至2012年6月間手術(shù)切除，經(jīng)病理確診的腦膠質(zhì)瘤石蠟標(biāo)本80例，并按照2007年WHO中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分類及分級標(biāo)準(zhǔn)復(fù)診并進(jìn)行病理組織學(xué)分級，其中Ⅰ級5例，Ⅱ級32例，Ⅲ級25例，Ⅳ級18例。對照組腦組織15例，均來自癌旁正常腦組織。

1.2 方法 所有石蠟切片均常規(guī)行HE染色，均由2名病理科醫(yī)師分別進(jìn)行組織學(xué)觀察，5μm連續(xù)切片，分別行Snail、SRF和CD34免疫組織化學(xué)染色，抗體濃度均為1∶100，采用枸鹽酸熱修復(fù)，實(shí)驗(yàn)中分別設(shè)立陰性對照和陽性對照。

1.3 結(jié)果判定 由2名病理科醫(yī)師獨(dú)立閱片，在400倍視野下觀察10個(gè)視野，每視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，計(jì)算陽性細(xì)胞百分比，按照以下4級進(jìn)行計(jì)分：0分：陽性細(xì)胞數(shù)＜10%；1分：10%－25%；2分：26%－50%；3分：51%－75%；4分：＞75%。染色強(qiáng)度評分標(biāo)準(zhǔn)：無色0分；淡黃色1分；棕黃色2分；棕色或棕褐色3分。以兩者乘積作為陽性評判標(biāo)準(zhǔn)，其中4分以上定義為陽性。CD34表達(dá)以血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿棕黃色著色，計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)為：棕黃色的單個(gè)、數(shù)個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞可計(jì)數(shù)為1個(gè)血管，計(jì)數(shù)5個(gè)不連續(xù)高倍視野內(nèi)的微血管數(shù)，取其平均值作為該病例的微血管密度值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，不同組別間比較采用χ2檢驗(yàn)，MVD兩組間采用t檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用spearman相關(guān)系數(shù)法，以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Snail、SRF在兩組中的表達(dá) Snail、SRF在膠質(zhì)瘤中陽性表達(dá)率分別為70.00%、45.00%，顯著高于對照組的26.67%、13.33%，兩組間比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 CD34染色結(jié)果及MVD測定 膠質(zhì)瘤組織中血管壁CD34免疫組織化學(xué)染色呈棕黃色，微血管形態(tài)呈芽狀、管狀、條索狀。腦膠質(zhì)瘤組中MVD值為42.12±12.18，顯著高于對照組的13.14±3.26，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.3 Snail、SRF、MVD在腦膠質(zhì)瘤中表達(dá)的臨床意義 如表2所示，Snail、SRF、MVD在腦膠質(zhì)瘤中的差異表達(dá)，與性別、年齡、腫瘤大小均無關(guān)（P＞0.05）；而與腫瘤級別和1年復(fù)發(fā)率密切相關(guān)，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 Snail、SRF在對照組及腦膠質(zhì)瘤組中的表達(dá)

表2 Snail、SRF和MVD在腦膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)的臨床意義

2.4 Snail、SRF與MVD在腦膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)的相關(guān)性分析 Snail陽性組MVD值為48.24± 14.73，顯著高于陰性組的38.12±7.45，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t＝3.187，P＝0.002）；SRF陽性組MVD值為47.28±10.34，顯著高于陰性組的36.38± 9.25，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t＝4.972，P＝0.000）。

3 討論

研究表明，腦膠質(zhì)瘤的復(fù)發(fā)和放化療耐性與上皮－間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）關(guān)系密切［5］。在腦膠質(zhì)瘤SHG－44細(xì)胞中過表達(dá)整連素相關(guān)蛋白激酶能夠誘導(dǎo)Snail蛋白表達(dá)上調(diào)，細(xì)胞獲得更強(qiáng)的遷移和侵襲能力。在本研究中發(fā)現(xiàn)Snail在膠質(zhì)瘤組織中高表達(dá)，并與腫瘤級別和復(fù)發(fā)關(guān)系密切，提示Snail在膠質(zhì)瘤中的高表達(dá)多提示預(yù)后不良。而轉(zhuǎn)錄因子SRF在EMT中發(fā)揮重要調(diào)控作用，能夠調(diào)控惡性腫瘤的進(jìn)行性進(jìn)展，破壞細(xì)胞連接，使腫瘤細(xì)胞松散獲得遷移可能，并能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖，上調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）－2、－9的表達(dá)，使腫瘤細(xì)胞更易浸潤和侵襲；SRF的轉(zhuǎn)錄能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞獲得間質(zhì)細(xì)胞表型，促進(jìn)遷移和侵襲的能力提高，提示SRF在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展進(jìn)程中起到了較為重要的調(diào)控作用，其對膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移亦具有重要的調(diào)控作用［6］。

［1］Chang L，Su J，Jia X，et al.Treating malignant glioma in Chinese patients：update on temozolomide［J］.Onco Targets Ther，2014，7：235.

［2］Miyazono K，Ehata S，Koinuma D.Tumor－promoting functions of transforming growth factor－βin progression of cancer［J］.Ups J Med Sci，2012，117（2）：143.

［3］Chiang C，Ayyanathan K.Snail／Gfi－1（SANG）family zinc finger proteins in transcription regulation，chromatin dynamics，cell signaling，development，and disease［J］.Cytokine Growth Factor Rev，2013，24（2）：123.

［4］Zhao M，Xu H，He X，et al.Expression of serum response factor in gastric carcinoma and its molecular mechanisms involved in the regulation of the invasion and migration of SGC－7901cells［J］.Cancer Biother Radiopharm，2013，28（2）：146.

［5］Xi H，Hong X，Min Z，et al.Serum response factor is overexpressed in esophageal squamous cell carcinoma and promotes Eca－109cell proliferation and invasion［J］.Oncol Let，2012，5（3）：819.

［6］Ziv－Av A，Taller D，Attia M，et al.RTVP－1expression is regulated by SRF downstream of protein kinase C and contributes to the effect of SRF on glioma cell migration［J］.Cell Signal，2011，23（12）：1936.

2013－07－19）

1007－4287（2014）07－1092－02

＊通訊作者