嚴(yán)鳳好，鐘展華，曾少麗

(惠州市中心血站檢驗(yàn)科，廣東 惠州 516003)

RH抗體致交叉配血不合一例及快速配血策略

嚴(yán)鳳好，鐘展華，曾少麗

(惠州市中心血站檢驗(yàn)科，廣東 惠州 516003)

目的 分析Rh血型抗體導(dǎo)致配血不合的原因和血型血清學(xué)情況，探討一種更自動化、快速、準(zhǔn)確的血源篩查方法。方法 分別用傳統(tǒng)試管法和微孔法為醫(yī)院送檢的疑難標(biāo)本進(jìn)行配血，在226個供血者中為患者篩查相合血源，記錄并對比兩種方法所用的時間。結(jié)果 患者血清中存在抗-C和抗-e不規(guī)則抗體導(dǎo)致配血不合，快速微孔法、試管法均能篩查出相合血源,前者所用總時間比后者短。結(jié)論有輸血史及妊娠史的患者輸血時,必須采用能檢測出不完全抗體的酶、抗人球蛋白或更靈敏的方法配血;微孔配血法能更快篩查出相合血源,為患者的搶救贏得寶貴的時間。

Rh血型；疑難配血；微孔配血法；不規(guī)則抗體

RH血型是繼ABO血型發(fā)現(xiàn)后另一個具有重要臨床意義的血型系統(tǒng)，也是最復(fù)雜的血型系統(tǒng)之一。RH血型系統(tǒng)的抗原至今已發(fā)現(xiàn)了50多個，但涉及到臨床問題的主要是5個，即C，D，E，c和e。RH血型不合的輸血有可能產(chǎn)生危及生命的溶血性輸血反應(yīng)；母子RH不合的妊娠有可能發(fā)生新生兒溶血病，嚴(yán)重者可以導(dǎo)致新生兒死亡，或是使胎兒死于宮內(nèi)。但是，針對抗體類型從庫存血中找出所需血液并不是件容易的事，由于目前臨床上所用的血液只進(jìn)行常規(guī)的ABO及Rh（D）鑒定，而沒有對其他的血型進(jìn)行分型，想要及時找到合適的血液就顯得很困難。本實(shí)驗(yàn)室結(jié)合自身?xiàng)l件采用快速微量自動梯形微孔配血法大大縮短了配血時間，現(xiàn)就其與傳統(tǒng)方法比較做一介紹。

1 病例介紹

劉某，女，27歲，2013年4月16日入院，臨床診斷宮內(nèi)妊娠39周，待產(chǎn)，免疫性血小板減少性紫癜。有輸血史和妊娠史，申請紅細(xì)胞10個單位。醫(yī)院ABO同型配血20多袋均主側(cè)凝集后抽血送往本站檢查。

2 傳統(tǒng)血型血清學(xué)檢查

2.1 試劑 抗-A、抗-B、抗-C、抗-D、抗-E、抗-c、抗-e、抗人球蛋白試劑，篩選細(xì)胞，譜細(xì)胞均由上海血液中心提供；凝聚胺試劑由珠海貝索公司提供，抗人球蛋白凝膠卡由達(dá)亞美公司提供；A、B、O紅細(xì)胞本站自制。

2.2 方法與結(jié)果

2.2.1 血型鑒定 患者ABO正反定型相符，為A型，Rh分型：ccDEE。

2.2.2 直接抗人球蛋白試驗(yàn) 結(jié)果為陰性。

2.2.3 抗體篩查及鑒定 患者血清與篩選細(xì)胞在鹽水中不凝集，在凝聚胺和抗人球中均凝集，表明患者血清中存在IgG型抗體。再用譜細(xì)胞進(jìn)行抗體鑒定，檢出抗-C抗-e抗體，其反應(yīng)格局，見表1。

表1 患者血清與譜細(xì)胞反應(yīng)格局

2.2.4 交叉配血試驗(yàn) 患者血清與A型ccDEE紅細(xì)胞配血相合，主側(cè)次側(cè)均無凝集無溶血現(xiàn)象，與A型ccDee、CCDEe、CcDEE配血，主側(cè)均有凝集。

3 快速微量自動梯形微孔配血法

3.1 試劑 同傳統(tǒng)方法。

3.2 儀器 梯形微孔板，STAR全自動加樣儀(瑞士HAMILTON)，340RT酶標(biāo)儀（瑞士ANTHON）。

3.3 實(shí)驗(yàn)步驟

3.3.1 試劑、標(biāo)本準(zhǔn)備 按已設(shè)定好的程序擺放好受者血清、試劑和梯形板，挑選出與受血者ABO同型的獻(xiàn)血員標(biāo)本放入載架。

3.3.2 抗原抗體反應(yīng) 運(yùn)行程序，讓儀器自動加樣加試劑，加樣完畢，混勻紅細(xì)胞、血清及試劑，靜置15 min。

3.3.3 判讀結(jié)果 由于本實(shí)驗(yàn)室采用孔壁呈階梯狀的特殊梯形微孔板，階梯級寬相當(dāng)于1個紅細(xì)胞的直徑，級高大于1個紅細(xì)胞的直徑，抗原抗體反應(yīng)時，紅細(xì)胞聚集成塊，掛在階梯上，均勻平鋪于孔底，而未反應(yīng)時紅細(xì)胞則沿階梯滾落于孔底中央，形成實(shí)心原點(diǎn)，可運(yùn)用數(shù)碼成像和電腦數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)判斷血液是否相和。

4 結(jié)果

患者血清中存在抗-C和抗-e抗體，以上兩種配血方法均可為患者找到4袋相合的血液，經(jīng)比較可看出，傳統(tǒng)方法總耗時約為220 min，而微孔法只需100 min，提前2 h找到所需血液，見表2。

表2 傳統(tǒng)配血方法與梯形微孔法耗時比較（min）

5 討 論

根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)，可以證實(shí)患者血清中存在抗-C和抗-e抗體，因本站實(shí)驗(yàn)室條件有限，無法用生物學(xué)方法證實(shí)是否是抗-Ce復(fù)合抗體。但據(jù)Issitt等[1]認(rèn)為，一種常見的Rh基因復(fù)合體只存在其中一種復(fù)合抗原，即抗-Ce只能與CDe/cDE基因型的紅細(xì)胞反應(yīng)，不能與CDE/cDe紅細(xì)胞反應(yīng)，因?yàn)榍罢呒t細(xì)胞C、e抗原存在于同一條染色體上，呈順式排列，后者存在不同染色體上，呈反式排列，雖然二者表現(xiàn)型相同。結(jié)合配血結(jié)果，我們推測患者存在混合型抗-C和抗-e，因此與含有C抗原或e抗原的紅細(xì)胞都能發(fā)生凝集反應(yīng)。

Rh系統(tǒng)的不規(guī)則抗體是除ABO系統(tǒng)抗體以外引起輸血反應(yīng)和新生兒溶血病的主要原因，Rh抗體絕大多數(shù)是免疫抗體，經(jīng)妊娠或輸血免疫而產(chǎn)生，可通過胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)，與胎兒紅細(xì)胞起反應(yīng)，從而使胎兒紅細(xì)胞遭到破壞，甚至胎死宮內(nèi)；新生兒則可發(fā)生不同程度的黃疸、貧血、肝脾腫大、水腫、智力障礙等。文獻(xiàn)報道我國漢族人群中孕婦體內(nèi)致Rh-HDN的不規(guī)則抗體以抗-E居多，因?yàn)镽h(E)陰性頻率遠(yuǎn)高于Rh(D)，而Rh(E)抗原又是Rh系統(tǒng)中除Rh(D)外最強(qiáng)的抗原，一次隨機(jī)輸血后產(chǎn)生抗-E的機(jī)會大于抗-D，而C抗原陰性的比例很低，像筆者碰到的這位患者ccDEE更少見。本站篩查200多袋血也只發(fā)現(xiàn)4例Rh血清學(xué)分型與其完全一樣的，因此，這種患者如果產(chǎn)生抗-C抗-e將會給臨床輸血造成很大的麻煩。對于孕婦來說產(chǎn)前抗體篩查是很必要的，但Rh(D)陽性的孕婦往往被忽視了這一點(diǎn)，醫(yī)院一般檢出陽性就不再做分型和抗體篩查了，只有陰性的孕婦醫(yī)生才建議做，導(dǎo)致部分患者錯過了最好的治療時期，直至要分娩用血時才發(fā)現(xiàn)。

隨著醫(yī)學(xué)的進(jìn)步，Rh不合引起的輸血反應(yīng)和新生兒溶血病越來越受到廣泛的關(guān)注，張晨光[2]從我國785份孕婦血清樣本中篩查出7份Rh特異性不規(guī)則抗體，其中5份引起HND，這無疑給我們敲了一次警鐘。為了減少Rh不合造成HDN及輸血反應(yīng)，我們有必要做到以下幾點(diǎn)：(1)產(chǎn)前定期進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查。(2)有妊娠史、輸血史的患者最好使用ABO、Rh同型的血液。(3)提高配血技術(shù)，Rh抗體，尤其是抗-E、抗-c抗體，常為酶增強(qiáng)性抗體，有時表現(xiàn)出唯酶特性[3]，必須采用能檢出不完全抗體的酶，抗人球或更靈敏的方法配血。

臨床上遇到疑難配血，傳統(tǒng)的方法是先對患者的紅細(xì)胞和血清進(jìn)行分析鑒定，找出配血不合原因后，再用已知抗原或抗體去篩查庫存血液，最后再進(jìn)行配血。這種方法耗時長、成本高、操作繁瑣，對于急救患者，有可能會因得不到及時輸血而對生命造成威脅。對此，很多實(shí)驗(yàn)室各出奇招[4-5]，本實(shí)驗(yàn)室也利用現(xiàn)有的設(shè)備資源，如全自動加樣器和酶標(biāo)儀，配合梯形微孔板，可批量地完成篩血工作，快速地找到相合的血液，為挽救患者生命贏得寶貴的時間。

[1]Issitt PD,Issitt CH.Applied Blood Group Serology Spectral Biologicals[M].Oxford California,1979:130-131.

[2]張晨光.Rh血型系統(tǒng)不規(guī)則抗體與新生兒溶血病的相關(guān)性[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2007,34(11):2036-2038.

[3]王培華.輸血技術(shù)學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1998:200-201.

[4]羅海玲,伍偉健,余晉林.自動加樣快速微孔板法在疑難配血中的應(yīng)用[J].國際醫(yī)藥衛(wèi)生導(dǎo)報,2010,16(24):3018-3020.

[5]鐘展華,嚴(yán)鳳好,李雪群,等.快速自動微板血源篩查法在疑難配血中的應(yīng)用[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2012,9(14):031-032.

R457

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1003—6350（2014）10—1527—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.10.0591

2013-10-22)

嚴(yán)鳳好。E-mail：775443294@qq.com