王慶凱 ，王慶利 ，閆翠環(huán)，方 敬

(1．河北省滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，河北 滄州 061001； 2．河北省海興縣醫(yī)院，河北 滄州 061200；3．河北中醫(yī)學(xué)院，河北 石家莊 050200)

糖尿病心肌病(DCM)由Rullbler等[1]于1972年最早提出，是糖尿病患者最嚴(yán)重的并發(fā)癥之一。糖尿病心肌病指在糖尿病狀態(tài)下，排除了高血壓、冠心病及其他可以引起心臟異常的因素，基于氧化應(yīng)激和炎性反應(yīng)[2－3]而引起的一系列結(jié)構(gòu)異常及心肌代謝紊亂，并最終導(dǎo)致左心室肥大、舒張和(或)收縮功能減退，臨床病死率高，現(xiàn)受到眾多學(xué)者的關(guān)注。眾多研究表明，心肌微血管病變是糖尿病心肌病主要發(fā)病機(jī)制之一，微循環(huán)障礙、微血管瘤形成和微血管基底膜增厚，是糖尿病心肌微血管病變的典型改變。我院經(jīng)驗(yàn)方復(fù)榮通脈膠囊（批號(hào)為冀藥制字Z20070041，組方為水蛭、地龍、全蝎、黃芪、當(dāng)歸、玄參、葛根、首烏藤、川牛膝、穿山龍、甘草）有養(yǎng)陰益氣、活血通絡(luò)之功效，臨床療效明顯。本試驗(yàn)旨在探討該藥對(duì)心血管內(nèi)皮細(xì)胞的作用機(jī)制，為臨床進(jìn)一步應(yīng)用提供試驗(yàn)依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1．1 動(dòng)物與試藥

80只健康雄性Wistar大鼠，體重180～230 g，由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)為冀醫(yī)動(dòng)管字第1009065。復(fù)榮通脈膠囊（批號(hào)為冀藥制字 Z20070041）；STZ、檸檬酸鈉、檸檬酸均由美國(guó)Sigma公司提供；冰乙酸（≥99．5%，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；ELX800型全自動(dòng)酶標(biāo)儀(美國(guó) BIO－TEK公司）；sEPCR及sTM試劑盒(上海西唐生物科技有限公司)；其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1．2 方法

1．2．1 造模

健康雄性大鼠80只，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后隨機(jī)抽樣，用數(shù)字表法選12只作為正常組，其余68只為造模組，造模前禁食12 h，一次性腹腔注射1%鏈脲佐菌素（STZ）60 mg／kg（STZ臨用前配制，溶于 0．1 mol／L，pH ＝ 4．2，無(wú)菌檸檬酸緩沖液）。正常組注入等量檸檬酸緩沖液。72 h后尾靜脈取血測(cè)血糖，血糖值不低于16．7 mmol／L，確定為糖尿病大鼠，穩(wěn)定1周后列入觀察對(duì)象 (造模過(guò)程中死亡7只，血糖值未達(dá)標(biāo)者13只，造模不成功者剔出)。

1．2．2 分組與給藥方法

造模成功的48只大鼠，按完全隨機(jī)原則分為糖尿病模型組（DM），復(fù)榮通脈膠囊低（FRL）、中（FRM）、高（FRH）劑量治療組，每組12只；正常組12只，共5組。成模大鼠穩(wěn)定1周后給藥。中藥治療組劑量按人體－大鼠體表面積比值表?yè)Q算出大鼠的等效劑量，低劑量組給藥 0．7 g ／(kg·d)，中劑量組給藥 1．4 g ／(kg·d)，高劑量組給藥2．2 g／(kg·d)灌胃[4]。正常組及模型組灌服蒸餾水。大鼠灌胃容量 10 mL／kg，1日 1次，連續(xù)8周。試驗(yàn)期間大鼠自由飲水，喂標(biāo)準(zhǔn)飼料，環(huán)境溫度為（24±2）℃。試驗(yàn)期間未使用胰島素和其他降糖藥物。

1．2．3 取材方法

所有大鼠于灌胃8周后，尾靜脈取血測(cè)血糖，以3%戊巴比妥鈉80 mg／kg腹腔注射麻醉，麻醉后大鼠稱(chēng)體重，后仰臥位固定，剪開(kāi)腹正中皮膚，暴露腹主動(dòng)脈，腹主動(dòng)脈采血，2 mL加入枸櫞酸鈉抗凝管中，3 500 r／min離心，取血清用于可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(sEPCR)、可溶性血栓調(diào)節(jié)蛋白(sTM)測(cè)定。

1．2．4 觀察指標(biāo)及方法

分別于治療前、后測(cè)體重，取尾尖血測(cè)血糖。于治療后8周腹主動(dòng)脈采血分離血清，采用雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)定量測(cè)定sEPCR和sTM質(zhì)量濃度，在ELX800型全自動(dòng)酶標(biāo)儀上讀取 OD值，經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算質(zhì)量濃度(ng／mL)。

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2．1 一般情況

正常組大鼠精神狀態(tài)較好，毛色白有光澤，進(jìn)食量、飲水量及尿量均正常，體重增加，動(dòng)作自如。造模各組大鼠精神狀態(tài)較差，毛色萎黃無(wú)光澤，倦怠，嗜臥，活動(dòng)量少，進(jìn)食量、飲水量及尿量均明顯增多，體重減輕。

2．2 血糖、體重變化

結(jié)果見(jiàn)表1和表2。

表1 各組大鼠治療前后血糖變化比較（,mmol／L）

表1 各組大鼠治療前后血糖變化比較（,mmol／L）

注：與正常組比較，△ P＜0．01。

組別正常組（n＝9）DM 組（n＝9）FRL組（n＝8）FRM 組（n＝8）FRH 組（n＝9）治療前4．88 ± 0．27 23．13 ± 3．95 23．85 ± 3．50 24．74 ± 3．13 24．43 ± 3．71△△△△治療后4．88 ± 0．62 24．51 ± 2．90 25．13 ± 2．21 23．69 ± 3．23 24．78 ± 2．13△△△△

2．3 血清sEPCR及sTM水平變化

結(jié)果見(jiàn)表3。

3 討論

糖尿病心肌病是糖尿病個(gè)體基于氧化應(yīng)激和炎性反應(yīng)而引起的心肌代謝紊亂，最終會(huì)導(dǎo)致心肌舒張和收縮功能減退，甚至誘發(fā)心力衰竭和猝死。本病的發(fā)生受多種因素的影響，微血管病變、血管內(nèi)皮細(xì)胞受損和氧化應(yīng)激反應(yīng)等直接關(guān)系到疾病的輕重程度和進(jìn)展。在傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中，本病被歸于“胸痹”“心悸”“怔忡”等范疇。氣機(jī)郁滯、血行痹阻是本病發(fā)生的主要病因病機(jī)，伴隨疾病的進(jìn)程，終將形成氣血虧虛和血液瘀滯并存的虛實(shí)夾雜證候，益氣養(yǎng)陰、活血化瘀治療成為中醫(yī)遣方用藥的基本原則。

表2 各組大鼠治療前后體重的變化（,g）

表2 各組大鼠治療前后體重的變化（,g）

注：與正常組比較，△ P＜0．01；與本組治療前比較， ■ P＜0．01。

組別正常組（n＝9）DM 組（n＝9）FRL組（n＝8）FRM 組（n＝8）FRH 組（n＝9）治療后228．4 ± 8．59 196．0 ± 17．9 193．6 ± 11．8 196．3 ± 14．1 195．3 ± 15．7治療前196．5 ± 14．9 205．7 ± 17．1 199．7 ± 11．9 199．7 ± 14．6 200．6 ± 13．9△△△△△■■■■

表3 各組大鼠治療后血清sEPCR及sTM水平變化（,ng／mL）

表3 各組大鼠治療后血清sEPCR及sTM水平變化（,ng／mL）

注：與正常組比較， ◆ P＜0．01；與 DM組及 FRL組比較， △ P＜0．01；與 DM組及 FRL組比較，○ P＜0．01。

組別正常組（n＝9）DM 組（n＝9）FRL組（n＝8）FRM 組（n＝8）FRH 組（n＝9）sEPCR 128．1 ± 16．9 324．8 ± 30．4 296．4 ± 33．1 232．9 ± 27．9 209．5 ± 24．9◆◆◆◆△△○ ○sTM 20．9 ± 3．3 80．4 ± 9．1 81．8 ± 9．1 53．0 ± 6．9 52．3 ± 7．3◆◆◆◆△△○ ○

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，血管病變是糖尿病致殘致死的主要原因，誘生的血管內(nèi)皮損傷是糖尿病血管并發(fā)癥的始動(dòng)因素和病理生理基礎(chǔ)[5]。在生理狀態(tài)下，血管內(nèi)皮細(xì)胞主動(dòng)調(diào)節(jié)微循環(huán)血流、凝血過(guò)程和炎性反應(yīng)。糖尿病出現(xiàn)的高血糖、胰島素抵抗及脂代謝紊亂均可導(dǎo)致血管內(nèi)皮功能紊亂，使血管內(nèi)皮細(xì)胞受損，通過(guò)動(dòng)物試驗(yàn)表明[6]，血糖高的大鼠心肌微血管數(shù)目會(huì)減少，且伴隨年齡的增加，心肌微血管數(shù)目會(huì)顯著減少，受到的損害也越發(fā)明顯。血栓調(diào)節(jié)蛋白（TM）是存在于血管內(nèi)皮細(xì)胞膜表面的一種糖蛋白，與凝血酶結(jié)合啟動(dòng)蛋白C抗凝系統(tǒng)[7]。內(nèi)皮細(xì)胞受損，TM釋放入血，血漿中sTM水平增高，造成凝血，形成血栓。近年來(lái)，sTM已成為血管內(nèi)皮損傷和破壞的新標(biāo)志，血漿中存在的sEPCR是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的位于血管內(nèi)皮細(xì)胞的新型蛋白受體，其濃度變化是血管內(nèi)皮損傷的特異性標(biāo)志[8]。

復(fù)榮通脈膠囊由水蛭、地龍、全蝎、黃芪、當(dāng)歸、玄參、葛根、首烏藤、川牛膝、穿山龍、甘草組方。方中水蛭破血通經(jīng)、逐瘀消 ；地龍通利經(jīng)絡(luò)而除痹舒筋止痛；全蝎攻毒散結(jié)，通絡(luò)止痛；又加穿山龍、牛膝，諸藥協(xié)同，共奏活血通經(jīng)、散結(jié)止痛之功。黃芪具有固表止汗，利水消腫，生肌等功效；當(dāng)歸為血家之圣藥，功擅補(bǔ)血活血；葛根生津止渴，又加玄參、首烏藤，共同益氣養(yǎng)血，填精扶正之效；最后以甘草調(diào)和藥性。全方標(biāo)本同治，補(bǔ)瀉兼顧，消瘀而不傷正，扶正而不留邪。

現(xiàn)代研究結(jié)果顯示，水蛭具有抗凝、抗血栓形成、抗腫瘤、調(diào)血脂、抗增殖及抗炎作用?；铙w水蛭唾液中含有水蛭素，還有肝素、抗血栓素等物質(zhì)。地龍?zhí)崛∥锞哂欣w溶和抗凝作用，此外還具有鎮(zhèn)靜、降壓、增強(qiáng)免疫的功效。此類(lèi)活血化瘀的中藥大多可增加血液流動(dòng)性，改善微循環(huán)及細(xì)胞環(huán)境，抑制炎性反應(yīng)[9]。氧自由基增多可造成心肌細(xì)胞的損害，加速心肌肥厚的進(jìn)程[10]。黃芪化學(xué)成分包括苷類(lèi)、多糖、氨基酸、微量元素等[11－12]，其中黃芪多糖明顯抑制損傷造成的心肌凋亡，能增強(qiáng)機(jī)體清除氧自由基的能力，減少細(xì)胞膜脂質(zhì)過(guò)氧化物損傷，對(duì)心肌缺血、缺血再灌損傷及感染病毒心肌均具有明顯的保護(hù)作用。當(dāng)歸有抗炎、清除氧自由基、保肝利膽、保護(hù)腎臟、增強(qiáng)免疫功能等作用[13]。研究證實(shí)，在糖尿病大鼠中，葛根素能顯著降低總膽固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白含量，提高局部微血流量，抑制血小板聚集，且可能通過(guò)抑制炎癥因子TGF－β1的表達(dá)，降低ROS的產(chǎn)生，達(dá)到緩解糖尿病心肌病的作用[14]。

本研究結(jié)果顯示，以活血化瘀、理氣通絡(luò)、益氣養(yǎng)陰為法組成的復(fù)榮通脈經(jīng)驗(yàn)方可顯著降低血sEPCR及sTM?？梢?jiàn)，復(fù)榮通脈膠囊可能是通過(guò)減輕心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷這一機(jī)制，發(fā)揮了對(duì)糖尿病心肌病的良好治療作用。其組方精良，用藥方便、安全，值得臨床推廣。但是否改善了DCM其他發(fā)病機(jī)制如心肌纖維化、心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的損害等，有待進(jìn)一步研究證實(shí)。

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