王璐璐,陳少華,相 莉,張秀立,鄭穩(wěn)生

（中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所·藥物傳輸技術(shù)及新型制劑北京市重點(diǎn)試驗(yàn)室,北京 100050）

5-氟尿嘧啶（5-FU）是治療大腸癌的基本用藥,通過抑制胸腺嘧啶脫氧核苷酸合成酶,阻礙DNA合成,達(dá)到抗腫瘤的作用,現(xiàn)有給藥方式為注射及口服?？诜o藥產(chǎn)生的骨髓抑制作用較靜脈注射持久,靜脈注射和靜脈滴注的給藥途徑較好,但注射部位易發(fā)生靜脈炎,少數(shù)患者發(fā)生神經(jīng)系統(tǒng)和心臟毒性以及維生素B1缺乏癥,長(zhǎng)期動(dòng)脈插管給藥又會(huì)引起動(dòng)脈血栓[1]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明,5-FU栓劑比口服給藥治療直腸癌更有效[2-4],但傳統(tǒng)的栓劑藥物吸收差,對(duì)黏膜的刺激性大,藥物停留時(shí)間短,患者順應(yīng)性低,故對(duì)氟尿嘧啶的劑型進(jìn)行了大量探索[5]。本研究中應(yīng)用原位凝膠技術(shù)結(jié)合復(fù)乳化技術(shù)制備了5-FU復(fù)乳原位凝膠,旨在提高藥物經(jīng)黏膜吸收的效率且減少藥物對(duì)黏膜的刺激性。筆者采用反相高效液相色譜法（RP-HPLC）測(cè)定該制劑的含量,結(jié)果靈敏、準(zhǔn)確、可靠?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

HP8453型紫外分光光度計(jì)（美國(guó)惠普公司）；Agilent1100型高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent公司）；HPLCWaters 2487檢測(cè)器Waters 515泵；FA1004N型電子分析天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）。5-氟尿嘧啶（上海諾泰化工有限公司,含量99.3%）；Poloxamer系列為BASF公司贈(zèng)送；海藻酸鈉（河北大唐生物工程有限公司）；1.2-丙二醇,Tween 80,Span 80（西隴化工股份有限公司）；5-FU復(fù)乳原位凝膠（中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所,規(guī)格為 200 g/L,批號(hào)分別為 20130515,20130516,20130517）；5-FU對(duì)照品 （中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào)為200602,含量為99.2% ）；Poloxamer 407（BASF 公司贈(zèng)送）；甲醇為色譜純,其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.15-FU復(fù)乳原位凝膠的制備[6-10]

5-FU 復(fù)乳:將大豆油、Span 80、Tween 80和 1.2-丙二醇按22∶5∶1∶6的比例混合,在 45℃、轉(zhuǎn)速為 2000 r/min的條件下持續(xù)攪拌,逐滴加入1.5%的5-FU水溶液33mL,繼續(xù)攪拌10min,得到白色微乳。取15 mL 6%Poloxamer水溶液,在 4℃,轉(zhuǎn)速為700 r/min的條件下持續(xù)攪拌,逐滴加入第一步制得的5-FU微乳15mL,繼續(xù)攪拌10min,得白色復(fù)乳。

5-FU復(fù)乳原位凝膠:取含有適量Poloxamer 407和海藻酸鈉的水溶液,在4℃和轉(zhuǎn)速為700 r/min的條件下持續(xù)攪拌,與一定量5-FU復(fù)乳混合,繼續(xù)攪拌10 min,緩慢升溫至室溫,得到白色凝膠。

2.2 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

參考文獻(xiàn)[11],用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑,Hypersic-C18柱(150 mm ×4.6mm,5 μm)；流動(dòng)相:水（用 0.05 mol/L磷酸溶液調(diào)節(jié) PH 至 3.5）-甲醇（95∶5）；檢測(cè)波長(zhǎng):266 nm；流速:1mL/min。取對(duì)照品溶液、樣品溶液及空白溶液,紫外檢測(cè)器在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描,5-FU在266 nm波長(zhǎng)下有最大吸收,故選擇266 nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。取供試品及對(duì)照品溶液20μL,按擬訂色譜條件注入高效液相色譜儀,理論板數(shù)按5-FU峰計(jì)算應(yīng)不低于5000,在此色譜條件下的色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 溶液制備

取5-FU復(fù)乳原位凝膠1mL,加流動(dòng)相稀釋至含5-FU10μg/mL的溶液,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得供試品溶液。取5-FU對(duì)照品適量,精密稱定,加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1 mL含10μg的溶液,即得對(duì)照品溶液。取按處方比例制備不含5-FU的空白復(fù)乳凝膠,4℃條件下以水為溶劑,配制成含5-FU 10μg/mL的溶液,按供試品溶液制備方法制備,即得空白溶液。

2.4 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:精密稱取5-FU對(duì)照品適量,用流動(dòng)相溶解并稀釋成每 1mL含 5-FU 1 mg的溶液。精密量取 6,10,60,100,140,180μL,分別置 10 mL容量瓶中,用流動(dòng)相稀釋至刻度,搖勻,精密量取20μL,分別注入高效液相色譜儀,記錄色譜圖,以峰面積（A）為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度（C）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸,得回歸方程 A=61.79C-15.18（r=0.9991）。結(jié)果表明,5-FU 質(zhì)量濃度在0.6～18μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):取同一供試品溶液,連續(xù)進(jìn)樣6次,測(cè)定其峰面積。結(jié)果 5-FU 的平均峰面積為 648.7,RSD 為 0.11% （n=6）,表明儀器精密度良好。

加樣回收試驗(yàn):精密稱取5-FU對(duì)照品適量,加水稀釋成每1mL含5-FU 1mg的貯備溶液。稱取已知含量的5-FU復(fù)乳原位凝膠5mL,分別置3個(gè)10mL容量瓶中,然后分別加入貯備溶液30,50,70μL,用流動(dòng)相稀釋至刻度,搖勻,即得相對(duì)標(biāo)示量濃度為80%,100%,120%的溶液,按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果見表1。

表1 5-FU加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

穩(wěn)定性試驗(yàn):精密量取同一供試品溶液,分別于 0,2,4,6,12,24 h時(shí)測(cè)定。結(jié)果的 RSD 為 0.72% （n=6）,表明供試品溶液在室溫條件下24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批樣品依法配制供試品溶液,重復(fù)進(jìn)樣5次,依法測(cè)定。結(jié)果的 RSD為1.27%（n=5）,表明該方法重復(fù)性良好。

2.5 樣品含量測(cè)定

精密量取供試品溶液20μL,注入高效液相色譜儀,記錄色譜圖。依法制備對(duì)照品溶液同法測(cè)定,按外標(biāo)法分別計(jì)算峰面積。結(jié)果批號(hào)為 20130915,20130916,20130917的樣品中 5-FU含量分別為標(biāo)示量的 97.34% ,103.57% ,96.86% 。

3 討論

根據(jù)2010年版《中國(guó)藥典（二部）》5-FU含量測(cè)定項(xiàng)中的規(guī)定,5-FU測(cè)定質(zhì)量濃度為10μg/mL,故標(biāo)準(zhǔn)曲線制訂中5-FU對(duì)照品的質(zhì)量濃度配制在0.6～l8μg/mL范圍。其含量測(cè)定采用的是紫外法[12],采用高效液相色譜法測(cè)定本品主藥含量,重復(fù)性好、專屬性強(qiáng)、靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確。

復(fù)乳是將水包油（O/W）或油包水（W/O）的初乳進(jìn)行二次乳化,進(jìn)一步分散在油相或水相中,形成的多相分散體系。它是抗癌藥物和抗病毒藥物的良好載體,具有流動(dòng)性好,可以改善藥物的吸收、延緩或控制藥物的釋放。本研究中先將脂溶性差的藥物5-FU制成復(fù)乳,并進(jìn)一步將其制成攜帶有復(fù)乳的原位凝膠,可以提高藥物的生物利用度,提高患者的用藥依從性。

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