劉紅海

【摘要】 目的：研究精子DNA完整性對(duì)夫精人工授精妊娠結(jié)局的影響。方法：選取2011年1月-2013年1月在本院收治的111例男性不育癥患者作為研究對(duì)象，根據(jù)精子DNA完整性將其分為A組（精子DNA完整性<30%）34例、B組（30%<精子DNA完整性<60%）42例以及C組（精子DNA完整性≥60%）35例，觀察三精子質(zhì)量及人工授精后的妊娠結(jié)局。結(jié)果：B、C組的臨床妊娠率、精子總數(shù)、前向運(yùn)動(dòng)精子率均明顯高于A組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。雖然C組的生化妊娠率、臨床妊娠率、精子總數(shù)、前向運(yùn)動(dòng)精子率高于B組，但僅精子總數(shù)、前向運(yùn)動(dòng)精子率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。三組患者的臨床妊娠率以及精子數(shù)目、前向運(yùn)動(dòng)精子率均為A組

【關(guān)鍵詞】 不育癥； 夫精人工授精； DNA完整性； 臨床妊娠率

男性不育癥是臨床常見疾病，其發(fā)生與精子質(zhì)量不良密切相關(guān)。目前研究認(rèn)為，精子DNA完整性會(huì)影響精子質(zhì)量，DNA破碎程度增高會(huì)產(chǎn)生負(fù)面影響，造成不育和反復(fù)流產(chǎn)[1]。人工授精是治療男性不育癥的主要方法之一[2]。本研究分析精子DNA完整性對(duì)夫精人工授精妊娠結(jié)局的影響，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2011年1月-2013年1月在本院收治的111例男性不育癥患者作為研究對(duì)象，納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合第5版《WHO人類精液檢查與處理實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)》中男性不育癥的診斷[3]；（2）符合人工授精啟動(dòng)標(biāo)準(zhǔn)；（3）取得患者知情同意，并簽署人工授精知情同意書。111例男性不育癥患者研究期間無(wú)失訪、脫落病例，根據(jù)精子DNA完整性將其分為A組（精子DNA完整性<30%）34例、B組（30%<精子DNA完整性<60%）42例以及C組（精子DNA完整性≥60%）35例。三組患者一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 精液常規(guī)檢查 人工授精治療當(dāng)日，患者未排精3～7 d，在取精室內(nèi)通過(guò)手淫法收集精液，精液液化后檢測(cè)精子總數(shù)、精子濃度和精子活力等。

1.2.2 精子完整性檢測(cè)方法 （1）準(zhǔn)備：手淫取出的精液在pH 7.4的磷酸鹽緩沖液中洗滌，離心后懸浮精子至濃度為10×106/mL；（2）制片：70 μL的l%低熔點(diǎn)瓊脂糖于融化于65～90 ℃水中，并在37 ℃下放置約3 min，后加入處理后的精子懸液30 μL，混勻后吸取20 μL混合液體，滴在0.65%標(biāo)準(zhǔn)瓊脂糖凝膠包被的玻片上，蓋上蓋玻片，4 ℃冰箱放置3～5 min，取出后揭去蓋玻片；（3）樣本處理：將載玻片放入新鮮的0.08 mol/L鹽酸中，22 ℃下避光7 min，后放入含0.4 mol/L DTT的精子裂解液內(nèi)約25 min，再將載玻片置于PBS 5 min，后依次置入70%、90%、l00%的乙醇，晾干備用；（4）染色：用瑞士吉姆薩染液染色25～20 min；（5）觀察并計(jì)數(shù)：載玻片自然風(fēng)干后，于40倍顯微鏡下觀察至少200個(gè)精子，判斷標(biāo)準(zhǔn)：精子頭部周圍暈環(huán)寬度不小于精子頭部半徑，認(rèn)為該精子染色質(zhì)DNA完整，否則則認(rèn)為精子DNA完整性破壞。精子完整性=DNA完整精子數(shù)/計(jì)數(shù)精子總數(shù)×100%[4]。

1.2.3 人工授精操作方法 女方選擇枸櫞酸氯米芬片或注射用尿促性素（HMG）對(duì)女方進(jìn)行促排卵治療，根據(jù)卵泡監(jiān)測(cè)大小及血清LH、E2水平適時(shí)注射人絨毛膜粗性腺激素（hCG）5000～10 000 U，24～36 h后行人工授精治療，男方精液行梯度離心法進(jìn)行優(yōu)化選擇，次日檢測(cè)排卵情況，排卵后給予黃體酮膠丸200 mg口服，每晚1次，或黃體酮注射液20 mg，每日1次支持治療。2周后，檢測(cè)尿液中hCG水平，陽(yáng)性為生化妊娠，4周后，行陰道B超檢查，若宮腔內(nèi)可見孕囊則為臨床妊娠。

1.3 觀察指標(biāo) 統(tǒng)計(jì)患者精液處理前的精液質(zhì)量，包括精子總數(shù)、精子濃度、前向運(yùn)動(dòng)精子，同時(shí)統(tǒng)計(jì)各組的生化妊娠數(shù)及臨床妊娠數(shù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 18.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)方差分析，計(jì)數(shù)資料采用 字2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

B、C組的臨床妊娠率、精子總數(shù)、前向運(yùn)動(dòng)精子率均明顯高于A組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。雖然C組的生化妊娠率、臨床妊娠率、精子總數(shù)、前向運(yùn)動(dòng)精子率高于B組，但僅精子總數(shù)、前向運(yùn)動(dòng)精子率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。三組患者的生化妊娠率、臨床妊娠率以及精子數(shù)目、前向運(yùn)動(dòng)精子率均為A組

3 討論

不育癥是指育齡期機(jī)體功能正常的夫婦在保持正常性生活、且未采用避孕措施的條件下，超過(guò)1年時(shí)間仍未能生育[5-6]。不育癥占不孕不育癥的比例超過(guò)30%。相關(guān)的研究認(rèn)為，男性不育癥的發(fā)生與精子質(zhì)量不良密切相關(guān)[7]。

目前檢測(cè)精子質(zhì)量的指標(biāo)主要包括精子數(shù)量、存活率和抗精子抗體。但這些指標(biāo)的檢測(cè)過(guò)程中受檢查者的主觀判斷影響較大，不利于疾病的準(zhǔn)確診斷。近年來(lái)，國(guó)外的研究發(fā)現(xiàn)男性不育患者的DNA碎片會(huì)明顯增多，而DNA碎片程度反映精子遺傳物質(zhì)的完整性，精子DNA發(fā)生碎片化對(duì)生育將會(huì)產(chǎn)生負(fù)面影響，造成不育和反復(fù)流產(chǎn)[8]。研究認(rèn)為檢測(cè)精子DAN的完整性能夠有效評(píng)價(jià)精液質(zhì)量和預(yù)測(cè)生育能力[9]。

在上述研究中筆者分析了精子DNA完整性對(duì)夫精人工授精妊娠結(jié)局的影響，旨在為臨床中探尋篩查不育癥、判斷精液質(zhì)量和生育能力的輔助檢查指標(biāo)提供更多的理論依據(jù)。目前關(guān)于DNA完整性的流行病學(xué)資料顯示，精子DNA的碎片化程度與體外受精的成功率呈顯著負(fù)相關(guān)，當(dāng)DNA碎片化的精子比例超過(guò)10%時(shí)，受精率明顯降低；而當(dāng)這一比例超過(guò)20%時(shí)，受精率更是下降了超過(guò)50%[10]。為此，筆者將接受人工授精的患者分為A組（精子DNA完整性<30%）、B組（30%<精子DNA完整性<60%）以及C組（精子DNA完整性≥60%），進(jìn)一步觀察妊娠結(jié)局可以發(fā)現(xiàn)：DNA完整率越高，其患者精液質(zhì)量越高，精子總數(shù)及前向運(yùn)動(dòng)精子率越高，臨床妊娠率越高。本研究表明精子DNA結(jié)構(gòu)的完整性與精子質(zhì)量關(guān)系密切，DNA完整性越好、精子質(zhì)量越好。精子DNA完整性可能通過(guò)精子質(zhì)量影響人工授精妊娠率。

綜上所述，精子DNA完整性與人工授精妊娠結(jié)局密切相關(guān)，DNA完整性越好，精子質(zhì)量越好，臨床妊娠率也越高。

參考文獻(xiàn)

[1] Bungum M，Humaidan P，Axmon A，et al.Sperm DNA integrity assessment in prediction of assisted reproduction technology outcome[J].Hum Reprod，2007，22（1）：174-179.

[2]白靜，李靜，高瑞格.236周期宮腔內(nèi)人工授精臨床分析[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2011，8（8）：160-161.

[3]世界衛(wèi)生組織.世界衛(wèi)生組織人類精液檢查與處理實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)[M].第5版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2011：53-86.

[4]王瑋瑋，王厚照，張玲，等.精子染色質(zhì)擴(kuò)散法檢測(cè)精子DNA完整性方法探討及臨床意義[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，33（14）：1723-1724.

[5]蘇靜，薛惠英.精子DNA損傷與夫精宮腔內(nèi)人工授精妊娠率的關(guān)系[J].醫(yī)學(xué)臨床研究，2013，30（1）：167-168.

[6]熊付興，莫曉彬.運(yùn)用生精膠囊治療男性不育癥的療效及安全性分析[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2012，9（12）：100-101.

[7]黃茜，丘映，史秋雯，等.精子DNA損傷與精子形態(tài)，頂體完整率的關(guān)系研究[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，34（6）：649-650.

[8]張?chǎng)危瑥埐?，羅清炳，等.精子DNA損傷對(duì)妊娠結(jié)局的影響及臨床意義[J].求醫(yī)問(wèn)藥：下半月刊，2012，10（6）：59-60.

[9]黃茜，丘映，史秋雯，等.年齡，禁欲時(shí)間對(duì)精液質(zhì)量的影響[J].中外醫(yī)學(xué)研究，2013，11（14）：1-2.

[10]劉安娜，董佳，王厚照.精子DNA完整性對(duì)男性不育患者精子質(zhì)量的影響分析[J].中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志，2013，21（2）：113-114.

（收稿日期：2013-12-04） （本文編輯：歐麗）

【摘要】 目的：研究精子DNA完整性對(duì)夫精人工授精妊娠結(jié)局的影響。方法：選取2011年1月-2013年1月在本院收治的111例男性不育癥患者作為研究對(duì)象，根據(jù)精子DNA完整性將其分為A組（精子DNA完整性<30%）34例、B組（30%<精子DNA完整性<60%）42例以及C組（精子DNA完整性≥60%）35例，觀察三精子質(zhì)量及人工授精后的妊娠結(jié)局。結(jié)果：B、C組的臨床妊娠率、精子總數(shù)、前向運(yùn)動(dòng)精子率均明顯高于A組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。雖然C組的生化妊娠率、臨床妊娠率、精子總數(shù)、前向運(yùn)動(dòng)精子率高于B組，但僅精子總數(shù)、前向運(yùn)動(dòng)精子率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。三組患者的臨床妊娠率以及精子數(shù)目、前向運(yùn)動(dòng)精子率均為A組

【關(guān)鍵詞】 不育癥； 夫精人工授精； DNA完整性； 臨床妊娠率

男性不育癥是臨床常見疾病，其發(fā)生與精子質(zhì)量不良密切相關(guān)。目前研究認(rèn)為，精子DNA完整性會(huì)影響精子質(zhì)量，DNA破碎程度增高會(huì)產(chǎn)生負(fù)面影響，造成不育和反復(fù)流產(chǎn)[1]。人工授精是治療男性不育癥的主要方法之一[2]。本研究分析精子DNA完整性對(duì)夫精人工授精妊娠結(jié)局的影響，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2011年1月-2013年1月在本院收治的111例男性不育癥患者作為研究對(duì)象，納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合第5版《WHO人類精液檢查與處理實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)》中男性不育癥的診斷[3]；（2）符合人工授精啟動(dòng)標(biāo)準(zhǔn)；（3）取得患者知情同意，并簽署人工授精知情同意書。111例男性不育癥患者研究期間無(wú)失訪、脫落病例，根據(jù)精子DNA完整性將其分為A組（精子DNA完整性<30%）34例、B組（30%<精子DNA完整性<60%）42例以及C組（精子DNA完整性≥60%）35例。三組患者一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 精液常規(guī)檢查 人工授精治療當(dāng)日，患者未排精3～7 d，在取精室內(nèi)通過(guò)手淫法收集精液，精液液化后檢測(cè)精子總數(shù)、精子濃度和精子活力等。

1.2.2 精子完整性檢測(cè)方法 （1）準(zhǔn)備：手淫取出的精液在pH 7.4的磷酸鹽緩沖液中洗滌，離心后懸浮精子至濃度為10×106/mL；（2）制片：70 μL的l%低熔點(diǎn)瓊脂糖于融化于65～90 ℃水中，并在37 ℃下放置約3 min，后加入處理后的精子懸液30 μL，混勻后吸取20 μL混合液體，滴在0.65%標(biāo)準(zhǔn)瓊脂糖凝膠包被的玻片上，蓋上蓋玻片，4 ℃冰箱放置3～5 min，取出后揭去蓋玻片；（3）樣本處理：將載玻片放入新鮮的0.08 mol/L鹽酸中，22 ℃下避光7 min，后放入含0.4 mol/L DTT的精子裂解液內(nèi)約25 min，再將載玻片置于PBS 5 min，后依次置入70%、90%、l00%的乙醇，晾干備用；（4）染色：用瑞士吉姆薩染液染色25～20 min；（5）觀察并計(jì)數(shù)：載玻片自然風(fēng)干后，于40倍顯微鏡下觀察至少200個(gè)精子，判斷標(biāo)準(zhǔn)：精子頭部周圍暈環(huán)寬度不小于精子頭部半徑，認(rèn)為該精子染色質(zhì)DNA完整，否則則認(rèn)為精子DNA完整性破壞。精子完整性=DNA完整精子數(shù)/計(jì)數(shù)精子總數(shù)×100%[4]。

1.2.3 人工授精操作方法 女方選擇枸櫞酸氯米芬片或注射用尿促性素（HMG）對(duì)女方進(jìn)行促排卵治療，根據(jù)卵泡監(jiān)測(cè)大小及血清LH、E2水平適時(shí)注射人絨毛膜粗性腺激素（hCG）5000～10 000 U，24～36 h后行人工授精治療，男方精液行梯度離心法進(jìn)行優(yōu)化選擇，次日檢測(cè)排卵情況，排卵后給予黃體酮膠丸200 mg口服，每晚1次，或黃體酮注射液20 mg，每日1次支持治療。2周后，檢測(cè)尿液中hCG水平，陽(yáng)性為生化妊娠，4周后，行陰道B超檢查，若宮腔內(nèi)可見孕囊則為臨床妊娠。

1.3 觀察指標(biāo) 統(tǒng)計(jì)患者精液處理前的精液質(zhì)量，包括精子總數(shù)、精子濃度、前向運(yùn)動(dòng)精子，同時(shí)統(tǒng)計(jì)各組的生化妊娠數(shù)及臨床妊娠數(shù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 18.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)方差分析，計(jì)數(shù)資料采用 字2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

B、C組的臨床妊娠率、精子總數(shù)、前向運(yùn)動(dòng)精子率均明顯高于A組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。雖然C組的生化妊娠率、臨床妊娠率、精子總數(shù)、前向運(yùn)動(dòng)精子率高于B組，但僅精子總數(shù)、前向運(yùn)動(dòng)精子率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。三組患者的生化妊娠率、臨床妊娠率以及精子數(shù)目、前向運(yùn)動(dòng)精子率均為A組

3 討論

不育癥是指育齡期機(jī)體功能正常的夫婦在保持正常性生活、且未采用避孕措施的條件下，超過(guò)1年時(shí)間仍未能生育[5-6]。不育癥占不孕不育癥的比例超過(guò)30%。相關(guān)的研究認(rèn)為，男性不育癥的發(fā)生與精子質(zhì)量不良密切相關(guān)[7]。

目前檢測(cè)精子質(zhì)量的指標(biāo)主要包括精子數(shù)量、存活率和抗精子抗體。但這些指標(biāo)的檢測(cè)過(guò)程中受檢查者的主觀判斷影響較大，不利于疾病的準(zhǔn)確診斷。近年來(lái)，國(guó)外的研究發(fā)現(xiàn)男性不育患者的DNA碎片會(huì)明顯增多，而DNA碎片程度反映精子遺傳物質(zhì)的完整性，精子DNA發(fā)生碎片化對(duì)生育將會(huì)產(chǎn)生負(fù)面影響，造成不育和反復(fù)流產(chǎn)[8]。研究認(rèn)為檢測(cè)精子DAN的完整性能夠有效評(píng)價(jià)精液質(zhì)量和預(yù)測(cè)生育能力[9]。

在上述研究中筆者分析了精子DNA完整性對(duì)夫精人工授精妊娠結(jié)局的影響，旨在為臨床中探尋篩查不育癥、判斷精液質(zhì)量和生育能力的輔助檢查指標(biāo)提供更多的理論依據(jù)。目前關(guān)于DNA完整性的流行病學(xué)資料顯示，精子DNA的碎片化程度與體外受精的成功率呈顯著負(fù)相關(guān)，當(dāng)DNA碎片化的精子比例超過(guò)10%時(shí)，受精率明顯降低；而當(dāng)這一比例超過(guò)20%時(shí)，受精率更是下降了超過(guò)50%[10]。為此，筆者將接受人工授精的患者分為A組（精子DNA完整性<30%）、B組（30%<精子DNA完整性<60%）以及C組（精子DNA完整性≥60%），進(jìn)一步觀察妊娠結(jié)局可以發(fā)現(xiàn)：DNA完整率越高，其患者精液質(zhì)量越高，精子總數(shù)及前向運(yùn)動(dòng)精子率越高，臨床妊娠率越高。本研究表明精子DNA結(jié)構(gòu)的完整性與精子質(zhì)量關(guān)系密切，DNA完整性越好、精子質(zhì)量越好。精子DNA完整性可能通過(guò)精子質(zhì)量影響人工授精妊娠率。

綜上所述，精子DNA完整性與人工授精妊娠結(jié)局密切相關(guān)，DNA完整性越好，精子質(zhì)量越好，臨床妊娠率也越高。

參考文獻(xiàn)

[1] Bungum M，Humaidan P，Axmon A，et al.Sperm DNA integrity assessment in prediction of assisted reproduction technology outcome[J].Hum Reprod，2007，22（1）：174-179.

[2]白靜，李靜，高瑞格.236周期宮腔內(nèi)人工授精臨床分析[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2011，8（8）：160-161.

[3]世界衛(wèi)生組織.世界衛(wèi)生組織人類精液檢查與處理實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)[M].第5版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2011：53-86.

[4]王瑋瑋，王厚照，張玲，等.精子染色質(zhì)擴(kuò)散法檢測(cè)精子DNA完整性方法探討及臨床意義[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，33（14）：1723-1724.

[5]蘇靜，薛惠英.精子DNA損傷與夫精宮腔內(nèi)人工授精妊娠率的關(guān)系[J].醫(yī)學(xué)臨床研究，2013，30（1）：167-168.

[6]熊付興，莫曉彬.運(yùn)用生精膠囊治療男性不育癥的療效及安全性分析[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2012，9（12）：100-101.

[7]黃茜，丘映，史秋雯，等.精子DNA損傷與精子形態(tài)，頂體完整率的關(guān)系研究[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，34（6）：649-650.

[8]張?chǎng)危瑥埐?，羅清炳，等.精子DNA損傷對(duì)妊娠結(jié)局的影響及臨床意義[J].求醫(yī)問(wèn)藥：下半月刊，2012，10（6）：59-60.

[9]黃茜，丘映，史秋雯，等.年齡，禁欲時(shí)間對(duì)精液質(zhì)量的影響[J].中外醫(yī)學(xué)研究，2013，11（14）：1-2.

[10]劉安娜，董佳，王厚照.精子DNA完整性對(duì)男性不育患者精子質(zhì)量的影響分析[J].中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志，2013，21（2）：113-114.

（收稿日期：2013-12-04） （本文編輯：歐麗）

【摘要】 目的：研究精子DNA完整性對(duì)夫精人工授精妊娠結(jié)局的影響。方法：選取2011年1月-2013年1月在本院收治的111例男性不育癥患者作為研究對(duì)象，根據(jù)精子DNA完整性將其分為A組（精子DNA完整性<30%）34例、B組（30%<精子DNA完整性<60%）42例以及C組（精子DNA完整性≥60%）35例，觀察三精子質(zhì)量及人工授精后的妊娠結(jié)局。結(jié)果：B、C組的臨床妊娠率、精子總數(shù)、前向運(yùn)動(dòng)精子率均明顯高于A組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。雖然C組的生化妊娠率、臨床妊娠率、精子總數(shù)、前向運(yùn)動(dòng)精子率高于B組，但僅精子總數(shù)、前向運(yùn)動(dòng)精子率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。三組患者的臨床妊娠率以及精子數(shù)目、前向運(yùn)動(dòng)精子率均為A組

【關(guān)鍵詞】 不育癥； 夫精人工授精； DNA完整性； 臨床妊娠率

男性不育癥是臨床常見疾病，其發(fā)生與精子質(zhì)量不良密切相關(guān)。目前研究認(rèn)為，精子DNA完整性會(huì)影響精子質(zhì)量，DNA破碎程度增高會(huì)產(chǎn)生負(fù)面影響，造成不育和反復(fù)流產(chǎn)[1]。人工授精是治療男性不育癥的主要方法之一[2]。本研究分析精子DNA完整性對(duì)夫精人工授精妊娠結(jié)局的影響，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2011年1月-2013年1月在本院收治的111例男性不育癥患者作為研究對(duì)象，納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合第5版《WHO人類精液檢查與處理實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)》中男性不育癥的診斷[3]；（2）符合人工授精啟動(dòng)標(biāo)準(zhǔn)；（3）取得患者知情同意，并簽署人工授精知情同意書。111例男性不育癥患者研究期間無(wú)失訪、脫落病例，根據(jù)精子DNA完整性將其分為A組（精子DNA完整性<30%）34例、B組（30%<精子DNA完整性<60%）42例以及C組（精子DNA完整性≥60%）35例。三組患者一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 精液常規(guī)檢查 人工授精治療當(dāng)日，患者未排精3～7 d，在取精室內(nèi)通過(guò)手淫法收集精液，精液液化后檢測(cè)精子總數(shù)、精子濃度和精子活力等。

1.2.2 精子完整性檢測(cè)方法 （1）準(zhǔn)備：手淫取出的精液在pH 7.4的磷酸鹽緩沖液中洗滌，離心后懸浮精子至濃度為10×106/mL；（2）制片：70 μL的l%低熔點(diǎn)瓊脂糖于融化于65～90 ℃水中，并在37 ℃下放置約3 min，后加入處理后的精子懸液30 μL，混勻后吸取20 μL混合液體，滴在0.65%標(biāo)準(zhǔn)瓊脂糖凝膠包被的玻片上，蓋上蓋玻片，4 ℃冰箱放置3～5 min，取出后揭去蓋玻片；（3）樣本處理：將載玻片放入新鮮的0.08 mol/L鹽酸中，22 ℃下避光7 min，后放入含0.4 mol/L DTT的精子裂解液內(nèi)約25 min，再將載玻片置于PBS 5 min，后依次置入70%、90%、l00%的乙醇，晾干備用；（4）染色：用瑞士吉姆薩染液染色25～20 min；（5）觀察并計(jì)數(shù)：載玻片自然風(fēng)干后，于40倍顯微鏡下觀察至少200個(gè)精子，判斷標(biāo)準(zhǔn)：精子頭部周圍暈環(huán)寬度不小于精子頭部半徑，認(rèn)為該精子染色質(zhì)DNA完整，否則則認(rèn)為精子DNA完整性破壞。精子完整性=DNA完整精子數(shù)/計(jì)數(shù)精子總數(shù)×100%[4]。

1.2.3 人工授精操作方法 女方選擇枸櫞酸氯米芬片或注射用尿促性素（HMG）對(duì)女方進(jìn)行促排卵治療，根據(jù)卵泡監(jiān)測(cè)大小及血清LH、E2水平適時(shí)注射人絨毛膜粗性腺激素（hCG）5000～10 000 U，24～36 h后行人工授精治療，男方精液行梯度離心法進(jìn)行優(yōu)化選擇，次日檢測(cè)排卵情況，排卵后給予黃體酮膠丸200 mg口服，每晚1次，或黃體酮注射液20 mg，每日1次支持治療。2周后，檢測(cè)尿液中hCG水平，陽(yáng)性為生化妊娠，4周后，行陰道B超檢查，若宮腔內(nèi)可見孕囊則為臨床妊娠。

1.3 觀察指標(biāo) 統(tǒng)計(jì)患者精液處理前的精液質(zhì)量，包括精子總數(shù)、精子濃度、前向運(yùn)動(dòng)精子，同時(shí)統(tǒng)計(jì)各組的生化妊娠數(shù)及臨床妊娠數(shù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 18.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)方差分析，計(jì)數(shù)資料采用 字2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

B、C組的臨床妊娠率、精子總數(shù)、前向運(yùn)動(dòng)精子率均明顯高于A組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。雖然C組的生化妊娠率、臨床妊娠率、精子總數(shù)、前向運(yùn)動(dòng)精子率高于B組，但僅精子總數(shù)、前向運(yùn)動(dòng)精子率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。三組患者的生化妊娠率、臨床妊娠率以及精子數(shù)目、前向運(yùn)動(dòng)精子率均為A組

3 討論

不育癥是指育齡期機(jī)體功能正常的夫婦在保持正常性生活、且未采用避孕措施的條件下，超過(guò)1年時(shí)間仍未能生育[5-6]。不育癥占不孕不育癥的比例超過(guò)30%。相關(guān)的研究認(rèn)為，男性不育癥的發(fā)生與精子質(zhì)量不良密切相關(guān)[7]。

目前檢測(cè)精子質(zhì)量的指標(biāo)主要包括精子數(shù)量、存活率和抗精子抗體。但這些指標(biāo)的檢測(cè)過(guò)程中受檢查者的主觀判斷影響較大，不利于疾病的準(zhǔn)確診斷。近年來(lái)，國(guó)外的研究發(fā)現(xiàn)男性不育患者的DNA碎片會(huì)明顯增多，而DNA碎片程度反映精子遺傳物質(zhì)的完整性，精子DNA發(fā)生碎片化對(duì)生育將會(huì)產(chǎn)生負(fù)面影響，造成不育和反復(fù)流產(chǎn)[8]。研究認(rèn)為檢測(cè)精子DAN的完整性能夠有效評(píng)價(jià)精液質(zhì)量和預(yù)測(cè)生育能力[9]。

在上述研究中筆者分析了精子DNA完整性對(duì)夫精人工授精妊娠結(jié)局的影響，旨在為臨床中探尋篩查不育癥、判斷精液質(zhì)量和生育能力的輔助檢查指標(biāo)提供更多的理論依據(jù)。目前關(guān)于DNA完整性的流行病學(xué)資料顯示，精子DNA的碎片化程度與體外受精的成功率呈顯著負(fù)相關(guān)，當(dāng)DNA碎片化的精子比例超過(guò)10%時(shí)，受精率明顯降低；而當(dāng)這一比例超過(guò)20%時(shí)，受精率更是下降了超過(guò)50%[10]。為此，筆者將接受人工授精的患者分為A組（精子DNA完整性<30%）、B組（30%<精子DNA完整性<60%）以及C組（精子DNA完整性≥60%），進(jìn)一步觀察妊娠結(jié)局可以發(fā)現(xiàn)：DNA完整率越高，其患者精液質(zhì)量越高，精子總數(shù)及前向運(yùn)動(dòng)精子率越高，臨床妊娠率越高。本研究表明精子DNA結(jié)構(gòu)的完整性與精子質(zhì)量關(guān)系密切，DNA完整性越好、精子質(zhì)量越好。精子DNA完整性可能通過(guò)精子質(zhì)量影響人工授精妊娠率。

綜上所述，精子DNA完整性與人工授精妊娠結(jié)局密切相關(guān)，DNA完整性越好，精子質(zhì)量越好，臨床妊娠率也越高。

參考文獻(xiàn)

[1] Bungum M，Humaidan P，Axmon A，et al.Sperm DNA integrity assessment in prediction of assisted reproduction technology outcome[J].Hum Reprod，2007，22（1）：174-179.

[2]白靜，李靜，高瑞格.236周期宮腔內(nèi)人工授精臨床分析[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2011，8（8）：160-161.

[3]世界衛(wèi)生組織.世界衛(wèi)生組織人類精液檢查與處理實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)[M].第5版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2011：53-86.

[4]王瑋瑋，王厚照，張玲，等.精子染色質(zhì)擴(kuò)散法檢測(cè)精子DNA完整性方法探討及臨床意義[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，33（14）：1723-1724.

[5]蘇靜，薛惠英.精子DNA損傷與夫精宮腔內(nèi)人工授精妊娠率的關(guān)系[J].醫(yī)學(xué)臨床研究，2013，30（1）：167-168.

[6]熊付興，莫曉彬.運(yùn)用生精膠囊治療男性不育癥的療效及安全性分析[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2012，9（12）：100-101.

[7]黃茜，丘映，史秋雯，等.精子DNA損傷與精子形態(tài)，頂體完整率的關(guān)系研究[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，34（6）：649-650.

[8]張?chǎng)?，張昌軍，羅清炳，等.精子DNA損傷對(duì)妊娠結(jié)局的影響及臨床意義[J].求醫(yī)問(wèn)藥：下半月刊，2012，10（6）：59-60.

[9]黃茜，丘映，史秋雯，等.年齡，禁欲時(shí)間對(duì)精液質(zhì)量的影響[J].中外醫(yī)學(xué)研究，2013，11（14）：1-2.

[10]劉安娜，董佳，王厚照.精子DNA完整性對(duì)男性不育患者精子質(zhì)量的影響分析[J].中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志，2013，21（2）：113-114.

（收稿日期：2013-12-04） （本文編輯：歐麗）