任香 舒春貴

作者單位：330100 南昌 江西省南昌市新建縣人民醫(yī)院

臨床經(jīng)驗(yàn)

HIF-1α和BCRP在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中的表達(dá)及臨床意義

任香 舒春貴

作者單位：330100 南昌 江西省南昌市新建縣人民醫(yī)院

目的 探討低氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）和乳腺癌耐藥蛋白（breast cancer resistance protein，BCRP）在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中的表達(dá)及臨床意義。方法 采用免疫組化SP法分別檢測(cè)75例乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織和15例癌旁組織中HIF-1α和BCRP的表達(dá)水平。結(jié)果 HIF-1α和BCRP在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌癌組織的陽(yáng)性表達(dá)率分別為61.3%和41.3%，顯著高于癌旁組織的陽(yáng)性表達(dá)率（均為0），兩組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）；兩者的表達(dá)均與腫瘤組織學(xué)分級(jí)、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)（P均＜0.05），而與患者年齡、腫瘤大小無(wú)關(guān)（P均＞0.05）。在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中HIF-1α和BCRP的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.333，P＜0.004）。結(jié)論HIF-1α和BCRP的表達(dá)在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌的發(fā)生、發(fā)展中可能起一定作用。

乳腺腫瘤；低氧誘導(dǎo)因子-1α；乳腺癌耐藥蛋白；免疫組化

乳腺癌是對(duì)化療比較敏感的實(shí)體瘤之一，化療在乳腺癌的綜合治療中起著不可替代的作用，而多藥耐藥（multidrug resistance，MDR）是影響乳腺癌化療療效的重要因素之一。因而，人們一直關(guān)注腫瘤耐藥機(jī)制的研究。研究表明，缺氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）與腫瘤細(xì)胞的MDR有關(guān)。而MDR相關(guān)蛋白的表達(dá)與人類腫瘤細(xì)胞MDR有關(guān)。本研究以免疫組化SP法檢測(cè)乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌（invasive ductal carcinoma，IDC）組織中HIF-1α和乳腺癌耐藥蛋白（breast cancer resistance protein，BCRP）的表達(dá)水平，并對(duì)其相互關(guān)系進(jìn)行分析，探討乏氧對(duì)乳腺IDC的影響，為腫瘤早期診斷和臨床合理用藥及預(yù)后評(píng)估提供指導(dǎo)。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源

收集2006年6月至2008年6月在江西南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院手術(shù)根治性切除并經(jīng)病理證實(shí)的乳腺IDC存檔蠟塊75例，均為女性。年齡為32～75歲，中位年齡47歲。術(shù)前均未接受放療、化療和內(nèi)分泌治療，全組臨床資料完整。另取15例距腫瘤邊緣＞5 cm的癌旁組織作為對(duì)照，經(jīng)病理檢查未見(jiàn)癌的證據(jù)。每例均行HE染色和ElivisionTMplus免疫組化染色。由2名病理科醫(yī)師確診核實(shí)，并詳細(xì)登記臨床資料。

1.2 試劑與方法

所有手術(shù)標(biāo)本均經(jīng)10%福爾馬林固定，石蠟包埋后行4 μm連續(xù)切片。一抗分別為兔抗人HIF-1α單克隆抗體（福州邁新生物技術(shù)公司產(chǎn)品）和兔抗人BCRP多克隆抗體（廣東森達(dá)生物技術(shù)公司產(chǎn)品）。實(shí)驗(yàn)按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。用PBS液代替一抗作為陰性對(duì)照，用已知陽(yáng)性的腫瘤標(biāo)本作為陽(yáng)性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判斷

HIF-1α陽(yáng)性表達(dá)主要表現(xiàn)在腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞核，為棕黃色顆粒或棕褐色顆粒狀，可呈單個(gè)散在、局限性或彌漫性片狀分布。BCRP陽(yáng)性表達(dá)的部位在細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，為較大的棕黃色顆粒。由2名病理科醫(yī)師分別雙盲閱片，HIF-1α及BCRP的表達(dá)判斷采用定量法，即根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和染色深度計(jì)分，每例隨機(jī)抽取10個(gè)高倍鏡視野，根據(jù)每個(gè)視野的陽(yáng)性細(xì)胞率，取其平均數(shù)。以陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)計(jì)分，＜5%為0分、5%≤1分＜25%、25%≤2分＜50%、50%≤3分＜75%、≥75為4分。以陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)的染色深度計(jì)分，基本不著色為0分，染色淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。將兩者得分相乘，0～2分為表達(dá)陰性，＞2分為陽(yáng)性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析及處理數(shù)據(jù)。兩組計(jì)數(shù)資料的比較行χ2檢驗(yàn)，兩者相關(guān)關(guān)系用Spearman相關(guān)分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HIF-1α和BCRP在乳腺IDC癌組織中的表達(dá)

在75例乳腺IDC癌組織中，HIF-1α的陽(yáng)性表達(dá)率為61.3%（46/75）。BCRP在乳腺IDC癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為41.3%（31/75）。見(jiàn)圖1。HIF-1α及BCRP在乳腺IDC癌旁組織中均為陰性表達(dá)。兩組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。

圖1 HIF-1α和BCRP在乳腺IDC癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)（SP×100）

2.2 乳腺IDC癌組織中HIF-1α和BCRP的陽(yáng)性表達(dá)與乳腺IDC臨床病理特征的關(guān)系

在乳腺IDC癌組織中HIF-1α和BCRP的陽(yáng)性表達(dá)與乳腺IDC的TNM臨床分期、組織學(xué)分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P均＜0.05），而與患者年齡、腫瘤大小無(wú)關(guān)（P均＞0.05）。見(jiàn)表1。

2.3 在乳腺IDC組織中HIF-1α和BCRP表達(dá)的相關(guān)性分析

31例乳腺IDC組織中BCRP表達(dá)陽(yáng)性的癌組織標(biāo)本中有25例HIF-1α的表達(dá)為陽(yáng)性，而25例HIF-1α表達(dá)陽(yáng)性的乳腺IDC癌組織標(biāo)本中BCRP的表達(dá)均為陽(yáng)性，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析二者的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.333，P＜0.004）。

3 討論

乳腺癌是女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，常因發(fā)現(xiàn)較晚及化療耐藥而預(yù)后不良。臨床研究顯示，盡管有新的抗癌藥物及化療方案不斷推出，但乳腺癌化療的效果始終不理想，腫瘤細(xì)胞MDR是主要原因之一。因此，對(duì)乳腺癌MDR的機(jī)制進(jìn)行研究有助于乳腺癌的防治。

表1 HIF-1α和BCRP的陽(yáng)性表達(dá)與乳腺IDC臨床病理特征的關(guān)系［n（%）］

在腫瘤快速增殖過(guò)程中，腫瘤組織普遍存在相對(duì)低氧狀態(tài)，但缺氧狀態(tài)下的腫瘤細(xì)胞仍能迅速增殖、轉(zhuǎn)移。有研究表明，HIF-1α在低氧條件下，其穩(wěn)定性和活性增強(qiáng)，可介導(dǎo)細(xì)胞對(duì)缺氧的適應(yīng)性反應(yīng)，維持腫瘤細(xì)胞能量代謝、新生血管生成、增殖、轉(zhuǎn)移以及放化療耐受等［1］。Birner等［2］應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)HIF-1α在91例子宮頸癌和5例子宮頸正常組織中的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)HIF-1α在子宮頸癌組織中過(guò)表達(dá)。BCRP是由MDR1編碼的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白［3，4］，主要參與膜內(nèi)、外藥物轉(zhuǎn)運(yùn)，即通過(guò)主動(dòng)外排藥物及降低藥物核質(zhì)分布比例而呈現(xiàn)多藥耐藥性，避免藥物的細(xì)胞毒作用，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞耐藥。Ross等［5］對(duì)21例急性白血病患者標(biāo)本進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)高水平BCRP的表達(dá)與腫瘤耐藥呈明顯正相關(guān)。Sargent等［6］研究亦表明BCRP過(guò)表達(dá)參與腫瘤耐藥的形成。本研究結(jié)果顯示，15例乳腺IDC癌旁組織中均未見(jiàn)HIF-1α和BCRP的表達(dá)，而75例乳腺IDC癌組織中HIF-1α的陽(yáng)性表達(dá)率為61.3%，BCRP的陽(yáng)性表達(dá)率為41.3%，兩者的表達(dá)與乳腺IDC的臨床TNM分期及病理組織學(xué)分級(jí)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)（P均＜0.05），而與患者年齡、腫瘤大小無(wú)關(guān)（P均＞0.05）。提示HIF-1α和BCRP的表達(dá)與腫瘤生物學(xué)特性密切相關(guān)，可能是腫瘤快速增殖、侵襲和惡化的基因標(biāo)志。

腫瘤中缺氧環(huán)境及癌基因的激活和抑癌基因的突變，易激活HIF-1α并使其過(guò)度表達(dá)，進(jìn)而識(shí)別相應(yīng)靶基因。被HIF-1α誘導(dǎo)的基因MDR1含有3個(gè)缺氧反應(yīng)元件，即HIF-1α結(jié)合位點(diǎn)。其中BCRP位于-116 bp~112 bp，電泳分析證明-116 bp~112 bp確實(shí)粘著了HIF-1α［7］，提示 HIF-1α基因的活化可能參與BCRP基因的表達(dá)。Semenza等［8］應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)腫瘤標(biāo)本，發(fā)現(xiàn)HIF-1α的表達(dá)和MDR1的高表達(dá)密切相關(guān)，并指出HIF-1α過(guò)表達(dá)將增加惡性腫瘤患者的死亡率，抑制HIF-1α活性可延長(zhǎng)腫瘤患者的生存期。在脊索瘤研究中，研究人員發(fā)現(xiàn)在脊索瘤組織中及脊索瘤細(xì)胞株CM-319中HIF-1α和MRP1均呈過(guò)表達(dá)，且HIF-1α的表達(dá)與MRP1的表達(dá)呈正相關(guān)，提示HIF-1α可能通過(guò)調(diào)控MRP1的表達(dá)參與脊索瘤多藥耐藥的作用［9］。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，乳腺IDC癌組織中BCRP的表達(dá)與HIF-1α表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.333，P＜0.004），支持BCRP的表達(dá)受HIF-1α調(diào)控的觀點(diǎn)。由此，我們推測(cè)HIF-1α可能通過(guò)調(diào)控BCRP的表達(dá)在乳腺IDC多藥耐藥的形成中發(fā)揮重要作用。隨著基礎(chǔ)研究的不斷深入，這一腫瘤多藥耐藥形成的機(jī)制可為今后以HIF-1α基因?yàn)榘悬c(diǎn)治療乳腺IDC提供重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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［2014-03-25收稿］［2014-04-20修回］［編輯 阮萃才］

737.9

A

1674-5671（2014）03-03

10.3969/j.issn.1674-5671.2014.03.15