摘要：目的 建立棗仁安神顆粒含量測定方法。方法 采用HPLC法。結(jié)果 HPLC法定了丹參素鈉含量，丹參素鈉在0.412～2.060μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好（r=0.9999），RSD=2.39%。結(jié)論 鑒別方法重復(fù)性好，專屬性強(qiáng)；含量測定方法簡便、準(zhǔn)確。

關(guān)鍵詞：棗仁安神顆粒；高效液相色譜法；丹參素鈉；含量測定

組方源自李時珍所著《本草綱目》之\"酸棗仁湯\"，由酸棗仁（炒）、丹參、五味子（醋制）三味中藥組成，具有補(bǔ)心養(yǎng)肝，安神益智的作用。用于心肝血虛，神經(jīng)衰弱引起的失眠健忘，頭暈，頭痛。為使本產(chǎn)品質(zhì)量更加可控，經(jīng)多次試驗，確立了本品中丹參有效成分丹參素鈉含量測定方法，陰性無干擾，經(jīng)方法學(xué)考察，方法的重復(fù)性、穩(wěn)定性、精密度、回收率試驗均符合有關(guān)規(guī)定。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀：儀器型號Lab Alliance 檢測器：Model 500 泵：Series III

色譜工作站：ANASTAR 迪馬Column Dimension柱（5μm，4.6×250mm）

AB135-S電子天平

Model C3860A 超聲波儀（上海超聲儀器廠）

對照品：丹參素鈉對照品（含量測定用 批號110855-201311）（中國食品藥品檢定研究院）。

試劑：甲醇、乙腈、磷酸為色譜純，水為二次蒸餾水。

2 結(jié)果

2.1波長的選擇 稱取丹參素鈉對照品適量，加甲醇溶液配成每1ml含0.102mg的溶液，在200～500nm的波長范圍內(nèi)掃描。結(jié)果本品在281nm處有最大吸收。

2.2色譜條件 色譜柱：迪馬Column Dimension柱（5μm，4.6×250mm），流動相：甲醇-乙腈-磷酸三乙胺水溶液（取純凈水約800ML，置1000ML量瓶中，精密加入磷酸1.70ML振搖，精密加入三乙胺1.80ML，加純凈水稀釋至刻度，搖勻，即得）（5：1：94）。

2.3溶液的制備 對照品溶液的制備 取丹參素鈉對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含206μg的溶液，即得。

供試品溶液的制備 取本品適量，研細(xì)，取約2.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，加熱回流1h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

陰性干擾試驗：取除丹參外其它藥材按樣品制備方法制成樣品，按供試品溶液的制備方法制成丹參陰性樣品溶液。

精密吸取供試品溶液、陰性液、對照品溶液各10μl，注入液相色譜儀中，繪制液相色譜圖，由色譜圖提示，在對照品色譜相應(yīng)的位置上，供試品溶液具有相同保留時間的色譜峰，陰性液在此峰位無吸收，對本品中丹參含量測定無干擾，方法專屬性良好。

2.4線性范圍考察 精密稱取丹參素鈉對照品于25ml量瓶中加甲醇稀釋至刻度。精密吸取上述對照品溶液1、2、3、4、5ml置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，制得41.2，22.4，123.6，164.8，206μg/ml的對照品溶液，分別進(jìn)樣10μl，測得色譜峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，以濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算得回歸方程：Y=4009X-4235，r=0.9999。

結(jié)果表明丹參素鈉在41.2～206μg/ml范圍內(nèi)與峰面積程良好的線性關(guān)系。

2.5穩(wěn)定性性試驗 取樣品（批號20140203）研細(xì)，取粉末0.5g，精密稱定，按正文[2.3溶液的制備]項下制備供試液，精密吸取同一供試液，分別于0、2、4、6、8小時進(jìn)樣分析，測定色譜峰面積，RSD%為1.49%。

2.6精密度試驗 取同一份供品溶液10ul，連續(xù)進(jìn)樣5次，測定峰面積，RSD%為1.49%。

2.7重復(fù)性試驗 取本品（批號20140203），研細(xì)，分別取粉末2.0g，五份，精密稱定，分別按正文[2.3溶液的制備]項下方法操作，測定，含量為0.99、1.04、1.02、1.02、1.06mg/g，RSD%為2.03%，本試驗重復(fù)性良好。

2.8回收率試驗考察 精密稱取本品（批號20140203，含量1.02mg/g）五份，分別精密加入對照品于樣品中，按正文[2.3溶液的制備]項下制備供試品溶液，按上述色譜條件依法測定，測定結(jié)果提示：本方法回收率在99.79～102.3%之間，RSD為0.24%，符合有關(guān)規(guī)定。

2.9樣品含量測定數(shù)據(jù) 經(jīng)采用正文[2.3溶液的制備]項下方法，測定十批樣品中丹參素鈉的含量，測定結(jié)果分別為：3.46、4.56、4.07、5.78、4.45、3.50、4.49、3.41、4.16、4.90 mg/袋。

本品工藝摸索中，十批丹參藥材丹參素含量均高于3%，因此確定丹參含量限度為本品含丹參素不得少于3%。

根據(jù)上述測定結(jié)果，參照工藝中制定的丹參含量限度，我們?nèi)】偲骄康?0%作為本制劑丹參素的限量確定本品每袋含丹參以丹參素計不得低于2.2mg。

3 討論

3.1本制劑處方處方中的丹參含有丹參酚酸，丹參酮 和丹參素等成分，但前兩者為醇溶性物質(zhì)，而本制劑為水提，所以選用水溶性的丹參素來測定本品的含量。

3.2檢測波長的選擇 經(jīng)紫外光譜掃描丹參素鈉在281nm有最大吸收，故選用281nm為檢測波長。

3.3流動相的選擇 參照《中國藥典》[1]2010年版一部丹參藥材含量測定項下及文獻(xiàn)報道，采用甲醇-乙腈-磷酸三乙胺水溶液（5：2：93）和甲醇-乙腈-磷酸三乙胺水溶液（5：1：94）為流動相，進(jìn)行色譜圖分析，通過實驗發(fā)現(xiàn)后者較前者分離效果好。故選用甲醇-乙腈-磷酸三乙胺水溶液（5：1：94）為流動相。

3.4樣品提取方法的選擇[2-3]棗仁安神顆粒丹參中丹參素的提取受提取溶劑影響較大，如在相同的提取時間下分別用甲醇及稀乙醇作為提取溶劑，可發(fā)現(xiàn)兩種溶劑提取丹參素鈉含量相差較大，用甲醇提取較為完全，故選用甲醇為提取溶劑。

方法學(xué)研究表明，采用HPLC法對處方中丹參的丹參素含量進(jìn)行測定，結(jié)果準(zhǔn)確，可作為棗仁安神顆粒質(zhì)量控制指標(biāo)之一。

參考文獻(xiàn)：

[1]國家藥典委員會.中國藥典[M].2010.

[2]陳發(fā)奎.常用中草藥有效成分含量測定[M].人民衛(wèi)生出版社，1997.

[3]中華人民共和國國家藥典委員會.衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)（中藥成分制劑）第[S].1998，50.

編輯/哈濤