摘要 [目的]研究超聲波對蜂膠黃酮提取率的影響，優(yōu)化蜂膠黃酮提取工藝，并對不同產(chǎn)地蜂膠原膠中總黃酮的含量進行比較，為進一步研究和開發(fā)蜂膠資源提供依據(jù)。[方法]選取料液比、超聲頻率、提取時間、乙醇濃度、提取次數(shù)5個因素，以蜂膠黃酮的提取率為參數(shù)，分別進行單因素試驗和正交試驗優(yōu)化，得到黃酮提取最佳參數(shù)。最佳提取條件提取并測定不同產(chǎn)地蜂膠中的總黃酮，采用spss 18.0單因素方差分析不同產(chǎn)地蜂膠的總黃酮含量。[結果]經(jīng)單因素和正交試驗優(yōu)化，最佳提取工藝是：超聲頻率59 kHz，提取4次，提取時間18 min，乙醇濃度為65%，料液比1 ∶28 g/ml。在最優(yōu)提取條件下，對不同產(chǎn)地蜂膠黃酮提取率采用spss18.0系統(tǒng)進行顯著性分析，經(jīng)分析不同產(chǎn)地的蜂膠黃酮含量差異顯著（P<0.05）。[結論]蜂膠黃酮提取率經(jīng)正交優(yōu)化后得到最佳提取工藝，不同產(chǎn)地的蜂膠黃酮含量差異較大，該研究對進一步研究和開發(fā)蜂膠資源有理論指導意義。

關鍵詞 蜂膠；黃酮；正交優(yōu)化；超聲輔助萃取

中圖分類號 S896.6 文獻標識碼 A 文章編號 0517-6611（2014）17-05610-04

Abstract [Objective] The parameters of extracting the flavonoids in crude propolis by ultrasonicassisted extraction were optimized. Then the comparison of the total contents of the flavonoids in propolis coming from different regions was completed in order to make the best of the resources of propolis. [Method] 5 factors including the ratio of material to liquid， ultrasonic frequency， extraction time， ethanol concentration， extraction times were studied in order to get the highest extraction yield of flavonoids， by single factor experiment and followed orthogonal experiment optimization， the total comtents of flavonoids of propolis from different origin were compared by spss18.0. [Result] The optimum parameters of extraction process were： 59 kHz ultrasonic frequency， ultrasonic extracting for 4 times， the ultrasonic processing time is 18 min， the concentration of ethanol 65%， solidtoliquid ratio of 1 ∶28 g/ml. Then， the total contents of flavonoids of propolis from different regions was compared by spss18.0 system， the result is the difference of the total flavonoids of propolis from different regions was significant （P<0.05）. [Conclusion] The extraction rate of propolis flavonoids extraction was obtained by orthogonal optimization， propolis flavone content difference from different habitats have a greater significance for further research and development of propolis resources.

Key words Propolis； Flavonoid； Orthogonal optimization； Ultrasonicassisted extraction

蜂膠是指蜜蜂采集植物樹脂等分泌物與其上顎腺、蠟腺等分泌物混合形成的具有特殊芳香氣味的膠黏性物質[1]。蜂膠含有多種天然有效活性物質，如黃酮、酚酸等，具有抗菌、抗病毒、抗癌、降血脂、增強免疫力等多種藥理活性[2]，它被用作食品及飲料的天然防腐劑，并廣泛運用于化妝品和保健品行業(yè)[3]。

目前，蜂膠黃酮的提取方法主要有：浸泡提取、超聲提取、微波提取和超臨界萃取法。李朝強等優(yōu)化了蜂膠浸泡提取法，該方法操作簡單，但耗時長，且提取不完全[4]。唐坤等[5]和李帥等[6]采用微波提取法提取蜂膠黃酮，該法耗時短，效率高，但是微波提取溫度較高，可能會破壞其中的活性物質。盧媛媛等采用超臨界萃取法提取蜂膠黃酮，該方法可以去除重金屬等，提取物較為純凈，但是儀器設備昂貴、操作技術要求高[7]。付中民等在60 ℃溫度超聲提取蜂膠黃酮，該法提取效率高，耗時短，較高的超聲溫度可能會破壞蜂膠黃酮的成分，進而影響活性[8]。

筆者以蜂膠原膠為原料，采用乙醇水溶液為溶劑，控制超聲溫度為（22±3）℃超聲提取蜂膠中黃酮，在單因素試驗基礎上，正交試驗優(yōu)化超聲提取蜂膠中黃酮的工藝條件，并對不同地域來源的蜂膠黃酮含量進行了測定并分析其差異性。

1 材料與方法

1.1 材料

蜂膠原膠均購自蜂農(nóng)，來自山東濰坊、山東臨沂、浙江江山、江西九江、四川眉山、湖北神農(nóng)架，采集時間為2011年9月至2012年10月。將蜂膠在-20 ℃冷凍24 h后快速粉碎，過40目篩備用。

主要試劑：無水乙醇、95%乙醇、六水結晶氯化鋁、醋酸鉀等，均為分析純； 蘆丁，國藥集團化學試劑有限公司，純度≥95.0%。

主要儀器：UV100型紫外-可見分光光度計，上海美普達儀器有限公司；SK3210LIIS型超聲波清洗儀，上?？茖С晝x有限公司；TDL40B型臺式離心機，上海安亭科學儀器廠。

1.2 方法

1.2.1 蜂膠黃酮的提取。

準確稱取0.2 g蜂膠，按一定料液比加適量的乙醇水溶液，控制超聲溫度在（22±3）℃提取一定時間，在3 000 r/min離心2 min后，濾渣重復超聲提取若干次，合并濾液，濾液于4 ℃低溫冷藏12 h后3 600 r/min離心5 min，取上清液定容至25 ml，避光低溫保存待測。

1.2.2 標準曲線的繪制。

稱取0.2 g蘆丁標準物，置于100 ml的容量瓶中，用95%的乙醇溶解定容，制得蘆丁母液（0.2 mg/ml）。

移取蘆丁母液5.00 ml置于50 ml的容量瓶中，用95%的乙醇定容，制得0.02 mg/ml的蘆丁對照液。

采用spss18.0.0使用單因素ANOVA類型進行兩兩比較[假定方差齊性LDS（L）模式]對不同產(chǎn)地蜂膠黃酮的平均含量進行顯著性差異比較，結果得不同產(chǎn)地蜂膠黃酮含量差異性較大。同樣來自山東的2個蜂膠含量都較高，但兩地的含量顯著不同（P<0.05），濰坊蜂膠的黃酮含量明顯大于臨沂蜂膠的黃酮含量；江西九江、四川眉山以及湖北神農(nóng)架之間蜂膠黃酮含量都較低且沒有顯著性差異（P>0.05）。

3 結論

試驗確定了蜂膠總黃酮提取的最佳工藝條件為超聲4次，提取時間18 min，乙醇濃度65%，料液比1 ∶28 g/ml，此條件下的蜂膠黃酮的提取率最大。并且在確定最佳工藝后對不同產(chǎn)地的蜂膠進行黃酮含量的測定并進行對比，結果表明，不同產(chǎn)地的蜂膠黃酮含量具有顯著性差異。試驗優(yōu)化了蜂膠總黃酮的提取工藝，且得出不同產(chǎn)地的蜂膠黃酮含量差異較大，對進一步研究和開發(fā)蜂膠資源有理論指導意義。

參考文獻

[1] 劉元法，王興國，金青哲.超聲波技術提取蜂膠黃酮類功能性物質的研究[J].食品科學，2004，25（6）：35-39

[2] 余晶晶，童群義.超聲微波協(xié)同萃取蜂膠中黃酮類物質的研究[J].食品工業(yè)科技，2013，34（4）：314-317.

[3] SILVA V，GENTA G，MOLLER M N，et al.Antioxidant activity of uruguayan propolis.in vitro and cellular assays[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry，2011，59：6430-6437.

[4] 李朝強.蜂膠提取工藝探討[J].臨床合理用藥，2013，8（8）：87-88.

[5] 唐坤，李標，蔡應繁，等.微波-超聲波提取蜂膠的工藝研究[J].食品研究與開發(fā)，2008，29（10）：74-76.

[6] 李帥，趙巖巖，陳曉平.響應面優(yōu)化微波輔助乙醇提取蜂膠黃酮工藝優(yōu)化[J].食品科學，2012，33（18）：127-132.

[7] 盧媛媛，魏文挺，胡福良.超臨界CO2流體萃取技術在蜂膠提取中的應用[J].食品工業(yè)科技，2013，19（34）：364-368.

[8] 付中民，鄭艷蘋，楊文超.蜂膠提取工藝的研究[J].中國蜂業(yè)，2008，59（10）：26-29.

[9] 中華人民共和國質量監(jiān)督檢驗檢疫總局，中國國家標準化管理委員會.GB/T 20574-2006.蜂膠中總黃酮含量的測定法分光光度比色法[S].北京：中國標準出版社，2007.

[10] VALENCIA D，ALDAY E，ROBLESZEPEDA R，et al.Seasonal effect on chemical composition and biological activities of Sonoran propolis[J].Food Chemistry，2012，131：645-651.

[11] PAPOTTI G，BERTELLI D，BORTOLOTTI L，et al.Chemical and functional characterization of ltalian propolis obtained by different harvesting methods[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry，2012，60：2852-2862.

[12] KUMAZAWA S，HAMASAKA T，NAKAYAMA T，et al.Antioxidant activity of various geographic origins[J].Food Chemistry，2004，84：329-339.

[13] 中華人民共和國質量監(jiān)督檢驗檢疫總局，中國國家標準化管理委員會.GB/T 24283-2009蜂膠[S].北京：中國標準出版社，2009.