摘要 [目的]揭示貴州境內(nèi)不同變型金櫻子10個(gè)居群間的遺傳變異情況。[方法]采用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)，從ISSR隨機(jī)引物中，篩選有效引物，進(jìn)行擴(kuò)增，用NTSYSpc，ver.2.02軟件進(jìn)行UPGMA聚類(lèi)分析。[結(jié)果]10個(gè)居群不同變型金櫻子的相似性系數(shù)在0.09～0.35，聚成A、B 2大類(lèi)。[結(jié)論]同一變型的金櫻子樣品并不嚴(yán)格為一類(lèi)，不同變型金櫻子樣品之間的遺傳變異較大。

關(guān)鍵詞 金櫻子；ISSR；遺傳變異

中圖分類(lèi)號(hào) S567 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2014）17-05425-02

Abstract [Objective] The heritable variation of 10 was uncovered for different variants of Rosa laevigata Michx. in Guizhou. [Method] By using ISSR molecular marker technology， effective primers were screened from random primers， and were amplified by ISSR. UPGMA cluster analysis was conducted by NTSYSpc， ver.2.02. [Result] The similarity coefficients of the 10 populations were from 0.09 to 0.35， and divided into 2 groups for A and B. [Conclusion] Individuals of the same population did not strictly cluster together and the genetic diversity of individuals in different populations was considerably high.

Key words Rosa laevigata Michx.； ISSR； Heritable variation

金櫻子來(lái)源為薔薇科植物金櫻子（Rosa laevigata Michx.）的干燥成熟果實(shí)，具較高的藥用及食用價(jià)值，能補(bǔ)腎益氣、澀精縮尿、止瀉，用于遺精滑精和遺尿尿頻等?，F(xiàn)代藥理研究表明，金櫻子可降低血清膽固醇含量，可使腸壁之粘膜收縮，分泌減少而有止瀉作用，并具明顯的抗菌及抗病毒作用。因其富含維生素C、糖等，亦可食用，開(kāi)發(fā)應(yīng)用前景十分廣闊，經(jīng)濟(jì)效益潛力頗大。金櫻子在我國(guó)西南、華南、華中、華東均有分布，尤其以貴州分布最廣，產(chǎn)量最高，是貴州大宗藥材之一。為了探討貴州境內(nèi)金櫻子的遺傳分化情況。筆者在DNA分子水平上，采用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)，對(duì)金櫻子已出現(xiàn)的不同變型即莖為綠色型的綠金櫻子、莖為紅色型的紅金櫻子、果刺為黑色型的黑金櫻子、果實(shí)瘦長(zhǎng)型的瘦金櫻子、果實(shí)胖圓型的胖金櫻子的遺傳變異進(jìn)行研究，以期為金櫻子的優(yōu)良性評(píng)價(jià)和種質(zhì)資源保護(hù)等提供參考[1]。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 研究對(duì)象。于2012年主要采集于貴州4個(gè)產(chǎn)地品種共10個(gè)居群，經(jīng)貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院生藥學(xué)教研室鑒定為金櫻子Rosa laevigata Michx.的不同變型（表1）。

1.1.2 主要儀器。BECKMAN，GS15R低溫高速離心機(jī)和紫外-可見(jiàn)光分光度計(jì)，購(gòu)自上海分析儀器廠；GDS7600G凝膠成像儀和電泳儀，購(gòu)自北京六一儀器廠。

1.1.3 主要試劑。Taq酶和PCR相關(guān)試劑，均購(gòu)自上海生物工程有限公司；引物，由上海生物工程有限公司合成；其他生化類(lèi)和有機(jī)試劑均由華美生物工程公司提供。

1.2 方法

1.2.1 金櫻子基因組DNA的提取。采用改良CTAB法[2]。提取DNA流程：①取樣品0.100 g，加少量石英砂，在研缽中磨碎，分裝于1.5 ml的離心管中；②加入0.6 m1 2×CTAB，在65 ℃的水浴鍋中保溫40 min；③12 000 r/min離心10 min，上清液轉(zhuǎn)入新管；④加入等體積氯仿-異戊醇（24 ∶1，V/V），緩慢搖動(dòng)5 min；⑤室溫下10 000 r/min離心10 min；⑥上清液轉(zhuǎn)入新管中加2/3倍體積的異丙醇，混合后于-20 ℃冰箱靜置40 min；⑦室溫下10 000 r/min離心5 min；⑧沉淀用濃度70%乙醇洗2次，風(fēng)干；⑨加1×TE溶解備用。1%瓊脂糖檢測(cè)DNA質(zhì)量。

3 結(jié)論與討論

ISSR（Inter simple sequence repeats）標(biāo)記是20世紀(jì)90年代中期發(fā)展起來(lái)的一種新型的分子標(biāo)記技術(shù)[1]，其原理是根據(jù)真核生物基因組中廣泛存在的簡(jiǎn)單重復(fù)序列，設(shè)計(jì)出各種能與SSR序列結(jié)合的PCR單一引物，對(duì)2個(gè)相距較近、方向相反的SSR序列之間的DNA區(qū)段進(jìn)行擴(kuò)增。擴(kuò)增的指紋圖可以同時(shí)提供基因組內(nèi)多個(gè)位點(diǎn)的序列信息。ISSR標(biāo)記結(jié)合了SSR和RAPD的優(yōu)點(diǎn)，具有模板需要量少，多態(tài)性豐富，無(wú)需試劑盒，結(jié)果記錄方便，試驗(yàn)成本低，操作簡(jiǎn)單，穩(wěn)定性較高等優(yōu)點(diǎn)，現(xiàn)已成功地用于許多栽培種和野生種的遺傳多樣性研究[3-5]。

試驗(yàn)結(jié)果表明，10個(gè)居群金櫻子ISSR擴(kuò)增結(jié)果的遺傳相似性系數(shù)在0.09～0.35，聚成A、B 2大類(lèi)群，同一變型的金櫻子樣品并不嚴(yán)格聚為一類(lèi)，不同變型金櫻子樣品之間的遺傳變異較大。黑金櫻子僅在A類(lèi)中有分布；瘦金櫻子、胖金櫻子僅在B類(lèi)中有分布。同一變型金櫻子沒(méi)有聚到一起，這可能與金櫻子變型的分類(lèi)主要是以其外觀色澤、胖、瘦等性狀為依據(jù)有關(guān)。金櫻子、綠金櫻子、紅金櫻子在A、B 2類(lèi)中均有分布，說(shuō)明其變異程度較大。此外，在2個(gè)類(lèi)群中混合分布了采自貴州境內(nèi)不同產(chǎn)地的金櫻子種質(zhì)，顯示金櫻子各變型間親緣關(guān)系與產(chǎn)地的相關(guān)性不大，說(shuō)明貴州境內(nèi)不同產(chǎn)地金櫻子有移栽的情況[5，7]。

試驗(yàn)對(duì)金櫻子ISSR 反應(yīng)體系和條件進(jìn)行了優(yōu)化，并對(duì)以貴州省為主分布的不同居群、不同變型綠莖、紅莖、黑刺、瘦長(zhǎng)果、胖圓果金櫻子的遺傳變異情況進(jìn)行了初步分析，對(duì)金櫻子品種指紋圖譜的構(gòu)建，品質(zhì)評(píng)價(jià)、種質(zhì)資源保護(hù)等具有重要意義[8]。

參考文獻(xiàn)

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