摘要：對鹽酸坦洛新的血藥濃度測定方法及其藥動(dòng)學(xué)研究結(jié)果做分析和綜述。方法：總結(jié)近年來國內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行分析。結(jié)果與結(jié)論：鹽酸坦洛新口服吸收迅速，與血漿蛋白結(jié)合率高，消除緩慢，生物利用度高，主要代謝途徑為氧化代謝。體內(nèi)坦洛新的測定方法以高效液相色譜-熒光檢測法和高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法為主，可以為小劑量藥物的體內(nèi)藥物分析及臨床應(yīng)用提供參考。

關(guān)鍵詞：鹽酸坦洛新血藥濃度；測定方法；藥動(dòng)學(xué)研究進(jìn)展

Hydrochloric acid temple los new method for determination of the blood drug concentration and pharmacokinetic research progress

Zhou XiangMa XiaoyunLiu ZhenWang Yu

Abstract：The temple los new blood drug concentration hydrochloric acid method and its pharmacokinetic study results for analysis and review. Methods：summarize the related literature at home and abroad in recent years are analyzed. Results and conclusion： los new oral absorption quickly with hydrochloric acid， combined with plasma protein， high rate of elimination is slow， high bioavailability， major metabolic pathways for the oxidative metabolism. In Tanzania， new determination method with high performance liquid chromatography （HPLC） with fluorescence method and high performance liquid chromatography （HPLC）-mass spectrometry is given priority to， ia for small doses of the drug in vivo drug analysis and provide reference for clinical application.

Key words：Hydrochloric acid temple los new blood drug concentration； Determination method； Pharmacokinetic research progress

【中圖分類號】R969.1【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】1002-3763（2014）03-0018-02

鹽酸坦洛新（tamsulosin hydrochloride，Ⅰ）即（-）-R-5-[2-[[2-（鄰乙氧基苯氧基）乙基]胺基]丙基]-2-甲氧基苯磺酰胺鹽酸鹽，在結(jié)構(gòu)上是一種強(qiáng)效和高選擇性的α1-腎上腺素受體抑制劑[1]，可用于臨床治療良性前列腺增生和前列腺肥大引起的排尿障礙。體外試驗(yàn)表明，它對前列腺α1-腎上腺素受體的選擇性比對主動(dòng)脈α1-腎上腺素受體的選擇性高10倍[2]，因此與同類藥物鹽酸特拉唑嗪相比，鹽酸坦洛新療效好，頭暈、頭痛和直立性低血壓等不良反應(yīng)小，值得推廣應(yīng)用[3]。鹽酸坦洛新是由日本山之內(nèi)制藥公司研制的，1993年8月在日本首次上市[4]，1996年7月在英國上市，1997年7月在美國上市[5]。由于坦洛新口服吸收迅速，起效快，可能會(huì)引起低血壓和眩暈等不良反應(yīng)，因此臨床應(yīng)用鹽酸坦洛新的緩釋劑型。坦洛新緩釋劑型含藥量低（約含坦洛新0.4～0.8 mg），常用的高效液相色譜-紫外檢測法難以達(dá)到體內(nèi)藥物分析所需的靈敏度，因此本文對近年來鹽酸坦洛新的血藥濃度測定方法及其藥物動(dòng)力學(xué)研究結(jié)果作一綜述，可以為小劑量藥物的體內(nèi)藥物分析及臨床應(yīng)用提供參考。

1血藥濃度測定法

1.1高效液相色譜-熒光檢測法（HPLC-FD）因?yàn)樘孤逍卤旧砗吞孤逍碌牡Ｂ妊苌锞休^強(qiáng)的熒光吸收，所以HPLC熒光法是測定體內(nèi)坦洛新濃度最常用的方法。

1.1.1直接HPLC熒光法：是利用坦洛新本身的熒光吸收性質(zhì)進(jìn)行測定。Soeishi等[5]用（±）-5-[2-[[2-（鄰乙氧基苯氧基）丙基]胺基]丙基]-2-甲氧基苯磺酰胺鹽酸鹽為內(nèi)標(biāo)物，以0.2 mol·L-1K2HPO3-0.2 mol·L-1H3PO4-乙腈（7∶7∶5）為流動(dòng)相，在Nucleosil 5 C18（150 mm×4.0 mm）柱上測定血漿樣品中的鹽酸坦洛新，柱溫26℃，流速1.0 mL·min-1，檢測波長275 nm/325 nm。坦洛新和內(nèi)標(biāo)物的出峰時(shí)間分別為5.9和7.5 min。峰高比對血漿中坦洛新濃度作圖，線性范圍在0.5～15 ng·mL-1之間，檢測限為0.5 ng·mL-1。定量限處的日內(nèi)，日間精密度以標(biāo)準(zhǔn)偏差（s）表示為12.2%。預(yù)處理方法為兩步液液萃取法，考察了2種有機(jī)溶劑和不同pH值條件對血漿樣品中坦洛新提取回收率的影響，結(jié)果表明：在pH 8～11時(shí)，用醋酸乙酯提取回收率為93.2%～95.4%，用乙醚提取為73.9%～88.3%。最后選定醋酸乙酯為提取溶劑，水相pH值用飽和NaHCO3調(diào)至pH 8.5。為進(jìn)一步除去內(nèi)源性物質(zhì)干擾，用HCl和醋酸乙酯重新提取，鹽酸坦洛新總提取回收率約為70%。

1.1.2間接HPLC熒光法：利用坦洛新與丹酰氯等衍生試劑形成的衍生物的熒光吸收性質(zhì)進(jìn)行測定。Matsushima等[6]在液液萃取的基礎(chǔ)上把從血漿中提取的坦洛新和內(nèi)標(biāo)物用丹酰氯衍生，在352 nm/500 nm下檢測，操作步驟如下：1.5 mL血漿加入1 mL飽和NaHCO3，5mL醋酸乙酯，100μL內(nèi)標(biāo)物溶液，提取。然后用2.5 mL 0.4 mol·L-1 HCl重新提取，振蕩，離心，棄去有機(jī)層。水層中加入2 mL飽和NaHCO3，用5 mL醋酸乙酯再提取。提取液減壓蒸干，殘?jiān)苡?0μL 0.1 mol·L-1NaHCO3和500μL丹酰氯，于35℃反應(yīng)90 min，加入5 mL蒸餾水，用5 mL乙醚提取。提取物在45℃水浴中蒸干，殘?jiān)苡?0μL流動(dòng)相，進(jìn)樣20～50μL。色譜條件如下：色譜柱為正相NucleosilSI100-5（250 mm×4 mm）柱，流動(dòng)相為苯-甲醇（100∶1），內(nèi)標(biāo)物為amosulalol。鼠、犬、人血漿中坦洛新的定量限分別為1.0，1.0和0.5 ng·mL-1。鼠和犬血漿中坦洛新QC樣品濃度分別為3，250和400 ng·mL-1，人血漿中為1.5，40和60ng·mL-1。線性范圍分別為1～500，1～500和0.5～80 ng·mL-1。

1.2高效液相色譜-質(zhì)譜法（LC-MS-MS）：研究表明坦洛新主要與血漿中的α1-酸性糖蛋白（α1-AGP）結(jié)合，而坦洛新與血漿蛋白結(jié)合的比例隨著血漿中α1-AGP水平的變化而變化，血漿α1-AGP水平高的患者，與血漿蛋白結(jié)合的坦洛新的濃度也高。因此用血漿藥物濃度來評價(jià)個(gè)體化給藥中的藥理效應(yīng)和不良反應(yīng)是不適合的，而應(yīng)該用游離藥物濃度來表示[7～8]。但是測定血漿中游離坦洛新濃度需要很高的靈敏度，HPLC-FD法難以達(dá)到要求，而LC-MS-MS法具有靈敏度高，需要樣品體積小，預(yù)處理簡單和分析時(shí)間短的優(yōu)點(diǎn)，可以用于測定血中游離坦洛新濃度。Matsushima等[9]建立了一種高靈敏的LC-MS-MS法用于測定人血漿透析液、血漿和尿中的鹽酸坦洛新。預(yù)處理方法為一步液液萃取法，即在一個(gè)10 mL離心管中加入0.2mL血漿（或0.1 mL尿樣）， 100μL內(nèi)標(biāo)溶液（100 ng·mL-1），1 mL飽和NaHCO3溶液和5 mL正己烷-醋酸乙酯（7∶3），振搖10 min，1 200×g離心5 min，取有機(jī)層蒸干，用100μL流動(dòng)相重新溶解，進(jìn)樣50μL。色譜條件如下：以50mmol·L-1醋酸（用50 mmol·L-1醋酸銨調(diào)至pH4.0）-甲醇（4∶6）為流動(dòng)相，在J’sphere ODS-80H柱（75 mm×4.6 mm，5μm）上分離，柱溫40℃，流動(dòng)相流速0.5 mL·min-1。質(zhì)譜條件如下：電噴霧離子化源（ESI），源電壓4.5 kV，正離子檢測。鞘氣（N2）壓力4.48×105Pa，輔助氣流速約為1.5～3 L·min-1，毛細(xì)管溫度150℃。一級質(zhì)譜用于測定分子離子峰MH+，坦洛新分子離子峰m/z 409，內(nèi)標(biāo)物AB 289（Ⅱ）（圖2）分子離子峰m/z 423。分子離子峰在二級質(zhì)譜中分裂為碎片，在三級質(zhì)譜中分別為m/z 228，AB 289 m/z 285。本法可以準(zhǔn)確、靈敏和高選擇地測定血漿透析液、血漿和尿中坦洛新濃度，線性范圍分別為10～1 000 pg·mL-1，0.5～50 ng·mL-1和1～100 ng·mL-1，定量限（LOQ）處的日內(nèi)精密度分別為17.7%，13.3%和18.9%。

1.3放射受體分析法（radioreceptor assay）：生命科學(xué)研究發(fā)現(xiàn)α1-腎上腺素受體至少存在3種亞型α1A，α1B和α1D，人體前列腺分布的主要是α1A-腎上腺素受體，所以在治療前列腺增生時(shí)，選擇性作用于α1A-腎上腺素受體的藥物會(huì)產(chǎn)生高療效和低不良反應(yīng)[10～12]。Taguchi等[12]用克隆α1A-，α1B-，α1D-腎上腺素受體進(jìn)行放射性受體分析得到單劑量口服坦洛新后的藥-時(shí)曲線與HPLC一致。HPLC得到坦洛新最大濃度和放射性受體分析法得到的與α1A-腎上腺受體的最大結(jié)合量都出現(xiàn)在給藥后5h，而且血漿藥物濃度在23.5 h后逐步降至13%（HPLC）或更低（放射性受體分析法）。體外研究中，α1-腎上腺受體亞型結(jié)合順序是α1A>α1D≈α1B，說明坦洛新與受體亞型的結(jié)合能力是α1A≥α1D>α1B。

1.43種方法的優(yōu)缺點(diǎn)：近年來由于高效液相色譜儀的普及應(yīng)用，HPLC-FD法是測定坦洛新血藥濃度最常用的方法[4，8，10]。它的靈敏度高（LOD可達(dá)5 ng·mL-1），預(yù)處理簡單（兩步液液萃?。?，分析時(shí)間短（坦洛新和內(nèi)標(biāo)物的保留時(shí)間分別約為5.9和7.5min），專屬性強(qiáng)（內(nèi)源性物質(zhì)不干擾測定），適合于實(shí)驗(yàn)室研究及臨床血藥濃度監(jiān)測。間接HPLC-FD法需要柱前衍生，操作繁瑣，耗時(shí)長，現(xiàn)在已很少使用。與HPLC-FD法相比，LC-MS-MS技術(shù)是一種新興的技術(shù)，它具有很高的靈敏度（血漿透析液LOD可達(dá)10 pg），需要樣品體積小（僅需0.2mL血漿），預(yù)處理簡單（一步液液萃取），分析時(shí)間短（坦洛新保留時(shí)間約為2 min），可實(shí)現(xiàn)高通量篩選。放射受體分析法在研究坦洛新與各受體亞型的結(jié)合方面具有獨(dú)到的優(yōu)勢，但由于放射性物質(zhì)會(huì)對人體產(chǎn)生很大傷害，該法很少應(yīng)用于藥動(dòng)學(xué)研究。

2藥動(dòng)學(xué)研究結(jié)果

2.1吸收鹽酸坦洛新口服后經(jīng)胃腸道吸收迅速，消除緩慢。大鼠及犬服藥后，坦洛新血藥濃度迅速增加，達(dá)峰時(shí)間分別為7.5和7.5～30 min，半衰期分別為0.99～1.15 h和1.27～1.68h。健康成人口服坦洛新后1.0～1.8 h達(dá)血藥峰濃度，t1/2為5.25～6.79 h[6]。健康成人po0.4 mg坦洛新緩釋膠囊后5 h，達(dá)血藥峰濃度（16.1 ng·mL-1），23.5 h后降至峰濃度的13%（2.1 ng·mL-1）。

2.2分布坦洛新主要與α1-酸性糖蛋白結(jié)合。對大鼠的研究顯示，坦洛新能高濃度地分布于肝臟及腎臟，但向腦部的轉(zhuǎn)運(yùn)很少，連續(xù)21 d給藥未見蓄積性[3]。大鼠和犬的口服清除率為（34.5～113.6）和（3.01～3.99） L·h-1·kg-1，分別為人體口服清除率（0.031～0.041 L·h-1·kg-1）的100倍和1 000～3 000倍[6]。14C-坦洛新與人血漿蛋白的結(jié)合率（98.9%～991%）高于大鼠和犬（分別為79.0%～80.0%和90.2%～903%）。坦洛新的絕對生物利用度物種差異顯著，鼠、犬、人分別為6.9%～22.8%，29.7%～42.0%和接近100%。

2.3代謝在所有的受試物種中[13]，坦洛新主要代謝途徑為氧化代謝，僅有一小部分以原形藥物形式從尿中排泄。在大鼠體內(nèi)，主要代謝途徑一部分是鄰乙氧基苯氧基的去乙基化，一部分是甲氧基苯磺酰胺的去甲基化，還有一部分是與葡萄糖醛酸和硫酸形成綴合物而代謝。在犬體內(nèi)，主要代謝途徑為一部分是鄰乙氧基苯氧基的去乙基化，一部分是去乙基化產(chǎn)物與硫酸結(jié)合，還有一部分是氧化去胺基側(cè)鏈。人體內(nèi)的代謝途徑與犬相似。坦洛新有5種基本代謝產(chǎn)物（圖3），在大鼠體內(nèi)主要代謝為M-1和M-4，在犬和人體內(nèi)主要代謝為M-1和AM-1。通過對人肝微粒體和以P450cDNAs為代表的人淋巴胚細(xì)胞的研究表明，人體內(nèi)坦洛新的M-1和AM-1代謝產(chǎn)物主要是受CYP3A4酶催化產(chǎn)生，而M-3和M-4代謝產(chǎn)物主要是受CYP2D6酶催化產(chǎn)生。

2.4排泄口服鹽酸坦洛新主要經(jīng)膽汁排泄于糞便中。大鼠尿排泄率為17%，犬為47.2%[5]。健康成人口服鹽酸坦洛新緩釋制劑0.1～0.6 mg后30 h內(nèi)，原形藥物尿排泄率基本上維持在12%～14%，連續(xù)口服時(shí)亦未見大的變化[4]。綜上所述，鹽酸坦洛新口服吸收迅速，與血漿蛋白結(jié)合率高（在人體內(nèi)約為99%），消除緩慢，生物利用度高，主要代謝途徑為氧化代謝。體內(nèi)坦洛新的測定方法以HPLC-FD法和LC-MS-MS法為主，在指導(dǎo)臨床應(yīng)用及小劑量藥物的體內(nèi)藥物分析方面，今后還會(huì)有更大的發(fā)展。

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