摘要：目的：成功的提取出淫羊藿的復(fù)方有效活性成分，比如總黃酮、淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅱ，并探析它們抗衰老作用的機制。方法：提取淫羊藿的復(fù)方有效成分主要是采用萃取的方法。用乙醇萃取法提取總黃酮，并且設(shè)計正交試驗進行提取，這個實驗的優(yōu)點在于可以對比提取后的結(jié)果，減小誤差；利用液液萃取法提取淫羊藿苷，并且進行多級逆流萃取，提高了萃取率。結(jié)果：通過乙醇萃取法及液液萃取法，我們將淫羊藿的有效成分成功的提取出來。經(jīng)現(xiàn)代藥理的研究指出，淫羊藿能夠增加人的心腦血管的血流量，改善提高生殖系統(tǒng)的功能，促進人體免疫功能、造血功能以及骨代謝，并同時具有延緩衰老、抗腫瘤等多種神奇的功效。討論：通過有關(guān)實驗的證明，淫羊藿及其復(fù)方有效成分能夠延緩多種實驗物種的衰老，加之通過ⅡS通路發(fā)揮其作用，延緩人類衰老將不再是天方夜譚。一些臨床經(jīng)驗和一些研究老鼠實驗顯示長期使用并不會給人體造成什么傷害，可見其安全性很高，所以經(jīng)各種實驗表明淫羊藿極有可能走向延緩衰老的臨床實踐。

關(guān)鍵詞：淫羊藿總黃酮；淫羊藿苷；抗衰老；提取

Epimedium and its compound and anti-aging effect of extracting effective components analysis

Wang LeiLi JunminLu DiLiu Yunfei

Abstract：Objective： to successfully extract of epimedium compound effective active ingredients， such as flavonoids， epimedium glycoside， epimedium glycoside Ⅱ， and discusses their mechanism of action on anti-aging. Methods： the extract of epimedium compound active ingredients are mainly adopt the method of extraction. Flavonoids were extracted with ethanol extraction method， and designed orthogonal experiment to extract， this experiment is to compare the advantages of the extraction result， reduce the error； Liquid-liquid extraction method is used to extract epimedium glycoside， and multi-stage countercurrent extraction， improved the extraction rate. Results： through ethanol extraction and liquid liquid extraction， we will be successfully extract effective components of epimedium. The modern pharmacological research， points out that epimedium can increase a person's heart cerebrovascular blood flow， improve the function of the reproductive system， promote the body's immune function， the hematopoietic function and bone metabolism， and also has anti-aging， antitumor and other magical efficacy. Discussion： through the experimental proof， epimedium and its compound active ingredients can slow down the ageing process of a variety of experimental species， combined with Ⅱ S pathways through use of its function， human senescence will no longer be a fable. Some clinical experience and some mice showed long-term use will not cause any harm to human body， its security is very high， so the various experiments showed that epimedium is likely to slow down the ageing of clinical practice.

Key words：Epimedium flavone； Epimedium glycoside； Anti-aging； extract

【中圖分類號】R282.71【文獻標(biāo)識碼】A【文章編號】1002-3763（2014）03-0010-02

在當(dāng)今這個科技發(fā)達的時代，人們已經(jīng)不能僅僅滿足于物質(zhì)上的基本需求，更多的是追求精神上的享受，所以如何延緩機體的衰老變得尤為重要，但目前仍然缺乏行之有效的科學(xué)手段延緩衰老。中國的中醫(yī)藥在養(yǎng)生、抗衰老這方面有著悠久的歷史，在一系列的研究中，我們發(fā)現(xiàn)淫羊藿的復(fù)方有效成分在延緩衰老方面有顯著的療效，所以我們進行了對淫羊藿及其復(fù)方有效成分分離提取的實驗，并用實驗證明了其有抗衰老的作用，現(xiàn)報告如下。

1資料與方法

1.1研究對象

1.1.1萃?。?/p>

利用萃取的方法提取淫羊藿的各種復(fù)方有效成分——總黃酮、淫羊藿苷；

1.1.2試驗對比：

對抗衰老的研究分為三個實驗：把野生型的線蟲N2總體分成對照組和實驗組（根據(jù)不同濃度分別分為高、中、低組）進行研究壽命長短的實驗； 把雄性老鼠也總體也分為兩組，總黃酮組和淫羊藿苷組，并進行研究壽命長短的實驗，記錄各個組老鼠的體重、一天所用飼料的數(shù)量、飲水量的多少、大便及小便的數(shù)量，并且在老鼠自然死亡后，對老鼠進行解剖觀察，得到腫瘤發(fā)生及皮膚潰瘍的情況。

1.2方法

1.2.1提取總黃酮：

我們采取正交試驗的方法提取和純化淫羊藿總黃酮。提取及純化的最好的方為：用65%的乙醇提取總黃酮三次，飲片的重量和提取所用的溶劑的用量分別為1/14（g/ml），1/12（g/ml），1/12（g/ml），每一次微波提取的時間定為二十分鐘。提取后的總黃酮溶液進過絮凝初步純化之后可以使總黃酮的含量達到41.3%。一般會使用HZ-841大孔樹脂、PA03060聚酰胺樹脂、D1400大孔樹脂對淫羊藿的有效成分總黃酮進行進一步的純化-動態(tài)吸附純化，研究結(jié)果表明使用第一種樹脂對總黃酮的純化能達到更好的效果，所以我們選用HZ-841大孔樹脂。達到其最佳效果的工藝條件是：兩克HZ-841大孔樹脂，上述樣本中總黃酮的含量為兩毫克每毫升的提取液三十毫升，分別用八十毫升水、四十毫升20%的乙醇及二十毫升95%的乙醇進行梯度稀釋，流動速度為1.5ml/min，純化完提取液后，多獲得的干浸膏中淫羊藿總黃酮含量是70.9%，其中還有9.33%的淫羊藿苷，干浸膏對飲片的吸收率是3.34%。經(jīng)絮凝純化之后，所得的總黃酮含量大于75.9%，淫羊藿苷的含量為11.2%，干浸膏對飲片的吸收率是2.1%。

1.2.2提取淫羊藿苷：綜合比較淫羊藿苷的幾種提取方法，在考察了提取方法的影響因素，最終認定正交試驗的方法是最佳選擇，其工藝為條件：300W的超聲功率、65%的乙醇溶液、液體與固體之比為25∶1、設(shè)定提取的時間為六十分鐘、設(shè)定提取的溫度為五十?dāng)z氏度。據(jù)從優(yōu)擇選工藝的實驗表明，淫羊藿有效成分的提取率高達9355%，純度達到27.9%，重現(xiàn)性比較好。我們還對淫羊藿進行了精提：粗提到的干粉通過三十目的標(biāo)準(zhǔn)篩進行篩選，用專業(yè)儀器稱取零點五克并加有3BV的蒸餾水，利用超聲波充分溶解，并且將溶液調(diào)至微酸性，PH值等于6，然后用AB-8樹脂吸附，時間為三十分鐘，用流動速度為1SV濃度為65%的乙醇溶液來進行洗脫這一操作，收集最終的洗脫液， 使洗脫率高達83.7%， 此時淫羊藿苷的純度達到83.7%。最后要進行淫羊藿苷的分離， 其條件為： 選擇截留的分子量是一千的有機膜超濾0095，原料液體的溫度調(diào)為三十?dāng)z氏度、膜前的壓力設(shè)為0.25Mpa、時間為100分鐘；然后用截留的分子量為三百的納濾膜DK2540，原料液體的溫度設(shè)為三十度，膜前的壓力設(shè)為0.2Mpa、時間為八十分鐘；選擇反滲透膜SGRO-2540進行脫水濃縮，其條件為原料液體的溫度為三十?dāng)z氏度，膜前的壓力是02Mpa、時間為八十分鐘。最終淫羊藿苷的純度是819%。

1.2.3研究其復(fù)方有效成分的抗衰老機制：

利用野生型線蟲研究總黃酮和淫羊藿苷對抗衰老的作用，把野生型線蟲總體分為兩組，一組是對照組，另一組為實驗組，實驗組包括總黃酮濃度為100mg/mL 、總黃酮濃度為50mg/mL 、總黃酮濃度為25mg/mL；另一實驗是針對淫羊藿苷，同上，淫羊藿苷也分為對照組、淫羊藿苷濃度為75μM、淫羊藿苷濃度為45μM、淫羊藿苷濃度為15μM四組；利用小老鼠進行其有效成分對壽命長短的研究，依次把小老鼠分為正常對照組、總黃酮組（0.06%，w/w）、淫羊藿苷組（0.02%，w/w），記錄各個組老鼠的體重、一天所用飼料的數(shù)量、飲水量的多少、大便及小便的數(shù)量，并且在老鼠自然死亡后，對老鼠進行解剖觀察，得到腫瘤發(fā)生及皮膚潰瘍的情況。研究淫羊藿苷的體內(nèi)衍生物淫羊藿苷Ⅱ?qū)ρ娱L壽命即抗衰老的作用機制，依然用到野生型線蟲，把線蟲分為對照組和藥物干預(yù)組，觀察淫羊藿苷Ⅱ?qū)勖L短的影響，并且結(jié)合高效液相檢查測定淫羊藿苷的衍生物對野生型線蟲的體內(nèi)的淫羊藿苷Ⅱ的濃度；我們把遺傳背景不同的線蟲的突變體分成兩組，分別為對照組、淫羊藿苷Ⅱ組（20μM），然后進行淫羊藿苷Ⅱ?qū)勖绊懙膶嶒?，探討其藥物作用的機制。

2結(jié)果

2.1通過實驗，我們可以發(fā)現(xiàn)總黃酮及其主要的成分淫羊藿苷延長多個物種的壽命的作用十分顯著，總黃酮和淫羊藿苷呈劑量依賴性使野生型的線蟲的生存曲線總體向右移動，提高了野生型線蟲的平均壽命和最大壽命；總黃酮和淫羊藿苷使小老鼠的生存曲線也整體向右移動，這標(biāo)志著小老鼠的平均壽命也有明顯的提升，但是小鼠最高的壽命值卻沒有明顯的改變?？傸S酮和淫羊藿苷干預(yù)對小老鼠死后，自我誘發(fā)的腫瘤和皮膚潰瘍的發(fā)生率也沒有明顯的影響。

2.2由實驗可得出，淫羊藿苷能有效地改善老年人的健康狀態(tài)，而且淫羊藿苷能較明顯的降低MRC-5細胞中p-半乳糖苷酶的轉(zhuǎn)錄表達，這種酶使細胞內(nèi)的一種衰老特異性酶，顯著增強野生型線蟲的熱應(yīng)激性、氧化應(yīng)激能力和運動的能力，能延緩野生線蟲的衰老，改善相關(guān)肌肉萎縮的狀況，使小老鼠轉(zhuǎn)棒潛伏的時間變長；淫羊藿苷還能將降低有毒蛋白的毒性，使線蟲癱瘓的幾率大大減少，提高處于老年狀態(tài)的小鼠股骨的骨密度，而且對于經(jīng)過淫羊藿苷干預(yù)的小鼠，其肝組織中有關(guān)衰老的病狀明顯減緩，值得一提的是，盡管長期對小鼠進行藥物干預(yù)，其主要內(nèi)臟卻沒有明顯的毒性影響；

2.3淫羊藿苷和淫羊藿苷的活性代謝衍生物淫羊藿苷Ⅱ延長物種壽命，延緩衰老是通過ⅡS通路進行。從淫羊藿苷和淫羊藿苷的活性代謝衍生物淫羊藿苷Ⅱ?qū)σ吧途€蟲的壽命影響的實驗中，我們得知20μM淫羊藿苷Ⅱ與45μM 淫羊藿苷具有相同的延長物種壽命的效果，HPLC結(jié)果表明在野生型線蟲體內(nèi)檢測出的化合物主要是淫羊藿苷和淫羊藿苷的代謝衍生物淫羊藿苷Ⅱ，提示淫羊藿苷Ⅱ是淫羊藿苷發(fā)揮其抗衰老作用后的體內(nèi)代謝的活性衍生物。淫羊藿苷Ⅱ能較明顯的提高秀麗線蟲的熱應(yīng)激能力以及氧化應(yīng)激的能力，并顯著提高處于老年狀態(tài)的線蟲的運動能力，減緩衰老以及降低與衰老相關(guān)的肌肉萎縮，降低PolyQ和Aβ1-42蛋白的毒性。通過進一步的實驗表明，淫羊藿苷Ⅱ能夠加強IIS通路中核心轉(zhuǎn)錄因子DAF-16的活性，更加有利于該因子的轉(zhuǎn)錄表達，提高IIS通路下游某種有益的靶基因的轉(zhuǎn)錄表達，因此能夠延長健康壽命，延緩衰老。

3討論

通過上述實驗，我們可以得出淫羊藿主要有效成分包括淫羊藿總黃酮、淫羊藿苷以及其代謝衍生物淫羊藿苷Ⅱ，而且通過一系列的實驗表明，淫羊藿及其有效成分能夠減緩多種物種模型的衰老，延長壽命，有可能會進一步應(yīng)用于制造延緩人類衰老的藥物產(chǎn)品中，所以研究淫羊藿及其有效成分的實驗是十分有意義的，并且有很大的研究價值。

參考文獻

[1]王昌利，宋小妹，武新華，淫羊藿總黃酮堤取分離工藝研究[J].中成藥，1996，18（5）：14

[2]陳封政，李書華，淫羊藿總黃酮提取工藝的研究[J].樂山師范學(xué)院報，2003，18（4）；32

[3]張志信.中藥淫藿黃酮類化合物研究進展[J].文山師范高等?？茖W(xué)報，2004，17（1）：88

[4]楊紅，黃衛(wèi)平，吳厚勇.紫外分光光度法測定益壽膠囊中淫羊藿總黃酮的含量[J].時珍醫(yī)藥，2004，15（2）；84

[5]王明權(quán)，畢志明，李萍，等.高效液相色譜法測定淫羊藿中淫羊藿定C和淫羊藿苷的含量[J].中國中藥雜志，2003，28（11）：1025

[6]高效液相色譜法測龜鹿補腎膠囊中淫羊藿苷含量[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報，2004，20（6）17

[7]李健，賈憲生.薄層掃描法測定淫羊藿中朝藿定C的含量[J].貴州醫(yī)藥，200428（2）：190

[8]葉立新，鄧振洪，孔少儀.薄層-紫外法測定金蚧片中淫羊藿苷的含量[J].廣東醫(yī)藥學(xué)報.

[9]朱春林，高素琴.淫羊藿的提取工藝優(yōu)選[J].時珍國醫(yī)國藥，2001， 12 （8）：687

[10]郭寶林，肖培根.中藥淫羊藿主要種類評述[J].中國中藥雜志，2003，28（4）：303