楊鴻　鄧樺　盧月媚　李敏深　蒲文珺

摘要[目的] 探討玉屏風復合多糖對免疫低下小鼠的調(diào)節(jié)和保護作用。[方法] 以環(huán)磷酰胺80 mg/kg誘導的免疫低下小鼠為實驗動物模型，研究不同劑量玉屏風復合多糖（100、200和400 mg/kg）對小鼠脾臟指數(shù)、血清IL2和IFNγ含量的影響。[結(jié)果] 高劑量玉屏風多糖能提高免疫功能低下小鼠的脾臟指數(shù)（P<0.05）。玉屏風多糖能提高免疫抑制的小鼠血清的IL2和IFNγ含量，尤其以中、低劑量組效果較好。玉屏風多糖能明顯提高正常小鼠血清的IL2含量（P<0.01），但對正常小鼠的IFNγ含量無顯著影響。[結(jié)論] 該研究可為玉屏風復合多糖的臨床應用提供試驗依據(jù)。

關(guān)鍵詞玉屏風復合多糖；IL2；IFNγ；脾臟指數(shù)；小鼠

中圖分類號S567文獻標識碼A文章編號0517-6611（2014）12-03571-02

基金項目廣東省科技計劃項目（2009B020307004）；廣東省自然基金項目（S2013010012191）。

作者簡介楊鴻（1966-），男，云南大理人，教授，博士，從事獸醫(yī)藥理學研究。

復方中藥多糖免疫活性及其應用的研究已逐漸成為生命科學及天然藥物研究的熱點。玉屏風散是中醫(yī)扶正固本的代表方劑，具有廣泛的免疫增強作用[1]。玉屏風多糖（Yupingfeng polysaccharides，YPFP）為玉屏風散總多糖有效部位群，含黃芪多糖、白術(shù)多糖和防風多糖等，是該方劑臨床藥效的主要物質(zhì)基礎(chǔ)[2]。目前，玉屏風散組方中的單味多糖（如黃芪多糖和白術(shù)多糖）已在獸醫(yī)臨床用于免疫增強劑、疫苗佐劑、飼料添加劑以及疾病的輔助治療[3-4]，而有關(guān)玉屏風復合多糖在畜牧獸醫(yī)領(lǐng)域的研究和應用尚未見報道。基于此，筆者以環(huán)磷酰胺（Cyclophosphamide，CY）建立免疫抑制小鼠模型，研究不同劑量玉屏風復合多糖對小鼠脾臟指數(shù)、血清IL2和IFNγ水平的影響，旨在為玉屏風復合多糖的臨床應用提供試驗依據(jù)。

1材料與方法

1.1玉屏風多糖的制備將黃芪、白術(shù)和防風按3∶1∶1的重量配方。采用L9（34）正交試驗設(shè)計優(yōu)化水提醇沉的提取工藝，采用苯酚-硫酸法測定多糖含量。最佳提取工藝為：料液比1∶16、浸提時間1.5 h、浸提溫度90 ℃、提取次數(shù)3次，然后抽濾、濃縮提取液，無水乙醇沉淀濃縮液12 h，取沉淀物經(jīng)真空干燥，即得玉屏風復合多糖。經(jīng)測定，玉屏風多糖得率為11.47%，多糖含量為36.38%。

1.3儀器和試劑全自動酶標儀（芬蘭Labsystems公司）；環(huán)磷酰胺（江蘇恒瑞醫(yī)藥有限公司，批號為12032725）；小鼠IL2和IFNγ ELISA檢測試劑盒，購自上海亞培生物科技有限公司。

1.2實驗動物模型與分組處理90只SPF級昆明小鼠（廣東省醫(yī)學實驗動物中心），合格證書號為4407207211，雌雄各半，25～35日齡，體重16～20 g，隨機分成6組，每組15只。設(shè)置空白對照組、陰性對照組（環(huán)磷酰胺免疫抑制組）、陽性對照組（僅灌服玉屏風復合多糖）、多糖高、中、低劑量組（玉屏風復合多糖+環(huán)磷酰胺）。1～10 d灌服玉屏風復合多糖，4、8、10 d腹腔注射環(huán)磷酰胺，11 d剖殺。具體分組與處理見表1。

1.4檢測脾臟指數(shù)將小鼠摘眼球放血處死，進行系統(tǒng)剖解，觀察脾臟和胸腺的形態(tài)變化；稱取體重和脾臟重量，按照以下公式計算脾臟指數(shù)：脾臟指數(shù)=脾臟重量/體重。

1.5血清中IL2和IFNγ含量的測定每組隨機選取6只小鼠采樣，小鼠于11 d眼球采血，用離心管收集血液。待血液凝固后進行高速離心，3 000 r/min離心5 min，取血清。血清IL2和IFNγ含量的測定按照ELISA試劑盒說明書進行。

1.6數(shù)據(jù)處理試驗數(shù)據(jù)均用±s表示，使用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件進行方差分析和t檢驗。

2結(jié)果與分析

2.1小鼠體質(zhì)量和脾臟指數(shù)的變化由表2可知，免疫抑制對照組、多糖各劑量組小鼠體重均顯著降低，空白對照組和多糖陽性對照組體重最高（P<0.05）。除空白對照組和多糖陽性對照組外，其余各組脾臟指數(shù)顯著降低（P<0.01）。其中，免疫抑制對照組脾臟指數(shù)最低，與多糖高劑量組差異顯著（P<0.05）。這說明高劑量玉屏風多糖對小鼠脾臟有一定的保護作用。

2.2玉屏風多糖對小鼠血清IL2和IFNγ含量的影響由表3可知，免疫抑制對照組的IL2含量最低，與空白對照組差異極顯著（P<0.01）；多糖高、中劑量組IL2含量均低于空白對照組；多糖高、中、低劑量組IL2含量均高于免疫抑制對照組，其中中、低劑量組差異顯著或極顯著（P<001或P<005）；多糖陽性對照組的IL2含量最高，顯著高于其他各組（P<0.01）。

免疫抑制對照組的IFNγ含量明顯低于空白對照組（P<001）；多糖高、中、低劑量組的IFNγ含量均低于空白對照組和陽性對照組（P<0.01或P<005）；多糖高、中、低劑量組的IFNγ含量明顯高于免疫抑制對照組（P<0.01或P<005）；空白對照組和陽性對照組之間無顯著差異。

3討論

第4、8、10天用環(huán)磷酰胺80 mg/kg給小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺，小鼠的體重、脾臟指數(shù)、血清IL2和IFNγ含量較空白對照組明顯降低（P<0.01或P<0.05），表明該方法能建立小鼠免疫抑制動物模型。

該試驗結(jié)果表明玉屏風多糖對小鼠的生長無明顯的影響。玉屏風多糖對正常小鼠脾臟指數(shù)無明顯促進作用，高劑量組玉屏風多糖能提高免疫功能低下小鼠的脾臟指數(shù)（P<0.05），說明其對小鼠的脾臟功能有保護作用。筆者以前研究表明玉屏風復合多糖可以明顯促進小鼠免疫抑制后脾臟結(jié)構(gòu)和功能的恢復，高、中劑量組促進恢復的作用較低劑量組更佳[5]。

IL2是一種在機體的免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮著重要而復雜作用的細胞因子，既可以促進淋巴細胞增殖，增強免疫功能，又能限制 T 細胞反應而增強機體的免疫耐受[6]。IFNγ主要是由活化的T細胞和NK細胞產(chǎn)生的，是動物機體最重要的細胞因子之一，具有強大的免疫調(diào)節(jié)作用和抗病毒、抗腫瘤作用[7]。該試驗結(jié)果表明玉屏風復合多糖能提高免疫抑制的小鼠血清的IL2和IFNγ含量（P<0.01或P<0.05），尤其以中、低劑量組效果較好；玉屏風多糖能明顯提高正常小鼠血清的IL2含量（P<0.01），但對正常小鼠的IFNγ含量無明顯影響。

參考文獻

[1] 楊鴻，陳杖榴，鄧樺，等.加味玉屏風散對雞紅細胞免疫和自由基的影響[J].中國獸醫(yī)科學，2005，36（1）：70-73.

[2] 陳向濤.復方中藥玉屏風多糖的免疫調(diào)節(jié)作用及其機理的研究[D].合肥：安徽醫(yī)科大學，2006.

[3] 左兆云，楊維仁，楊在賓，等.日糧添加黃芪多糖對蛋雞機體抗氧化能力和雞蛋品質(zhì)的影響[J].中國獸醫(yī)學報，2012，32（1）：130-134.

[4] 李贊陽，劉紅，羅燕，等.不同組分 不同純度中藥復方多糖對小鼠免疫活性影響的研究[J].中國畜牧獸醫(yī)，2012，39（9）：181-184.

[5] 鄧樺，楊鴻，張兆，等.玉屏風復合多糖對環(huán)磷酰胺免疫抑制小鼠的恢復作用[J].中國獸醫(yī)學報，2014，34（2）：288-292.

[6] 常瑞雪，顏天華，王秋娟，等.白細胞介素-2 及其相關(guān)藥物的應用研究進展[J].藥學進展，2011，35（1）：1-6.

[7] 夏倫斌，王新華，連宏軍，等.C干擾素及其在動物疾病防控中的應用[J].動物醫(yī)學進展，2007，28（5）：74-78.