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        蛹蟲草多糖配合果蔬酵素對(duì)抗氧化作用的研究

        2014-04-29 09:59:39佟林峰楊紹斌
        安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2014年20期
        關(guān)鍵詞:抗氧化性

        佟林峰 楊紹斌

        摘要 [目的]研究蛹蟲草多糖與復(fù)合果蔬酵素的復(fù)合物對(duì)動(dòng)物細(xì)胞的抗氧化性。[方法]試驗(yàn)將蛹蟲草多糖與復(fù)合果蔬酵素的復(fù)合物分別飼喂和注射給小鼠,觀察該復(fù)合物在小鼠體內(nèi)的作用和在小鼠體外對(duì)超氧陰離子自由基、羥自由基的清除作用。[結(jié)果]試驗(yàn)表明,該復(fù)合物在小鼠體內(nèi)可使SOD明顯增加,在體外可有效清除超氧陰離子自由基、羥自由基,具有較強(qiáng)的抗氧化性作用。[結(jié)論]研究可為含有蟲草多糖的新型復(fù)合果蔬酵素新品規(guī)?;a(chǎn)提供理論依據(jù)。

        關(guān)鍵詞 蛹蟲草;復(fù)合果蔬酵素;抗氧化性;蟲草多糖

        中圖分類號(hào) S567 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611(2014)20-06769-02

        Antioxidation Research of Fruit and Vegetable Enzyme with Cordyceps militaris Polysaccharide

        TONG Linfeng,YANG Shaobin

        (School of Life Science and Engineering, Shenyang University, Shenyang, Liaoning 110044)

        Abstract [Objective] To study antioxidation of Cordyceps militaris polysaccharide and compound fruit and vegetable enzyme on animal cells. [Method] The complexes were fed and injected into mice, the compound in mice and effect on scavenging superoxide anion free radical, hydroxyl radical in mice were observed. [Result] The results showed that the compound can increase SOD in mice, can scavenge superoxide ion radical, hydroxyl radical, with strong antioxidation. [Conclusion] The study can provide theoretical basis for large scale production of new compound fruit and vegetable enzyme with Cordyceps militaris polysaccharide.

        Key words Cordyceps militaris; Compound fruit and vegetable enzyme; Antioxidation; Cordyceps polysaccharide

        蛹蟲草多糖是蛹蟲草中重要的活性物質(zhì),國內(nèi)外科研人員對(duì)蛹蟲草多糖的結(jié)構(gòu)有較多研究。蟲草多糖已被證實(shí)具有降血糖等作用,同時(shí)對(duì)單核巨嗜細(xì)胞系統(tǒng)的功能具有增強(qiáng)作用,還能提高免疫功能及治療肝的病毒性感染等,具有廣闊的開發(fā)前景。

        復(fù)合果蔬酵素是以生鮮果蔬菌類等有機(jī)食品為原料,通過分選、去雜、漂洗、壓汁、過濾、離心、萃取、純化等食品加工工藝和酶工程技術(shù),獲取果蔬酶液粗品。該制劑具有保護(hù)肝臟免受毒素以及酒精的傷害;幫助消化系統(tǒng)更好地吸收食品中營養(yǎng)的同時(shí)分解并排除身體積存的多余脂肪和膽固醇;對(duì)血管中的壞膽固醇可以溶解并清潔血管;清脂、清宿便、排毒、加速代謝、養(yǎng)顏美容、瘦身;抗氧化,提高人體免疫力等營養(yǎng)和保健作用。

        筆者研究了蛹蟲草多糖配合果蔬酵素的抗氧化作用,經(jīng)配方優(yōu)化,按照17∶1的比例在果蔬酵素中加入蟲草多糖使產(chǎn)品的抗氧化性更強(qiáng),具有更高的保健作用。筆者對(duì)該改良制劑的抗氧化性進(jìn)行了研究,以期為含有蟲草多糖的新型復(fù)合果蔬酵素新品規(guī)模化生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        復(fù)合果蔬酵素,沈陽天益堂生物科技有限公司;

        蛹蟲草子實(shí)體,遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院;

        小鼠,沈陽醫(yī)科大學(xué)。主要試劑:硫酸亞鐵、過氧化氫、水楊酸、Tris、EDTA、鄰苯三酚、氫氧化鈉、氯化鈉、碘酸鉀、碘化鉀、無水磷酸氫二鈉、無水磷酸二氫鉀等;DPPH(分析純)、橄欖油、酚酞,沈陽化學(xué)試劑廠。主要儀器設(shè)備:UV2300紫外可見分光光度計(jì),恒溫水浴鍋,高速組織搗碎機(jī),離心機(jī)。

        1.2 方法

        1.2.1

        含有蛹蟲草多糖的復(fù)合果蔬酵素制劑生產(chǎn)流程。

        ①果蔬酵素生產(chǎn)流程:選取果蔬原料→剝皮→打漿→果汁過濾(排出種子,得到新鮮純果汁)→調(diào)整糖度→殺滅空氣中的微生物和雜菌→添加專用酵母→發(fā)酵→殺滅酵母→終止發(fā)酵→得到含有果肉和全部酵素的發(fā)酵液→過濾得到酵素[1]。②堿提蛹蟲草多糖工藝流程:樣品稱重→浸泡→堿液浸提→離心→中和→濃縮→乙醇沉淀→離心分離→洗滌沉淀→烘干→蛹蟲草粗多糖。③將提取得到的蛹蟲草多糖與復(fù)合果蔬酵素的比例按照17∶1的比例混合,即配得含有蛹蟲草多糖的復(fù)合果蔬酵素制劑。

        1.2.2

        復(fù)合物對(duì)小鼠的影響。選取沈陽醫(yī)科大培育的健康雄性小鼠76只,體重27~33 g,隨機(jī)分成4組:復(fù)合物灌胃組1 g/kg,復(fù)合物灌胃組3 g/kg,復(fù)合物腹腔注射組1 g/kg和等量生理鹽水對(duì)照組。每天給藥1次,接連給藥5 d和15 d。試驗(yàn)結(jié)束后首先將小鼠處死并迅速取出小鼠的肝臟置于冰浴中,準(zhǔn)確稱取肝組織1 g,加入冰生理鹽水在玻璃勻漿器中制成勻漿,在600 r/min離心機(jī)中離心10 min,去除沉渣。勻漿部分采用微量指血鄰苯三酚自氧化法測(cè)定超氧化物歧化酶(SOD ),采用DTNB化學(xué)比色法測(cè)定谷胱甘肽過氧化物酶(GSHPX)。蛋白質(zhì)的含量按Lowry法測(cè)定[2]。

        1.2.3

        對(duì)超氧陰離子自由基清除作用的測(cè)定。取4.5 ml、0.05 mol/L、 pH 8.2的TrisHCl 緩沖液,置于25 ℃水浴鍋中預(yù)熱25 min,分別加不同濃度的復(fù)合物1 ml和25 mmo l/L的鄰苯三酚溶液0.4 ml,將二者混勻,然后于25 ℃水浴中反應(yīng)8 min,加入8 mol/L HCl 1.0 ml以終止反應(yīng)[3],用TrisHCl緩沖液作為參照,在波長299 nm處測(cè)定吸光度,并計(jì)算清除率??瞻讓?duì)照組用1 ml去離子水代替樣品,每樣反應(yīng)做5組,計(jì)算平均值[4]。

        清除率的計(jì)算公式:

        清除率(%)= (A2-A1)/A2×100%

        式中,A1為樣品的平均吸光度;A2為空白的平均吸光度。

        1.2.4

        復(fù)合物對(duì)羥自由基清除作用的測(cè)定。

        羥自由基是由Fenton反應(yīng)產(chǎn)生[5],因?yàn)椤H氧化水楊酸產(chǎn)生對(duì)波長510 nm光有特征吸收,所以可以通過測(cè)定產(chǎn)物的吸光度來檢測(cè)清除率。首先在30 ml比色管中分別按順序加入5 mmol/L水楊酸3 ml、2 mmol/L硫酸亞鐵3 ml、1 mmol/L過氧化氫3 ml,在加入的過程中注意搖勻,在37 ℃水浴加熱20 min后取出,測(cè)定吸光度A0。然后分別加入特定濃度的待測(cè)液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0 ml,然后再按順序逐步加入去離子水0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、0.1、0 ml,搖勻,繼續(xù)在恒溫水浴條件下加熱15 min,然后取出測(cè)其吸光度Ax,為數(shù)據(jù)可靠,每組試驗(yàn)重復(fù)3次取平均值。清除率公式[6]:

        清除率(%)=(A0-Ax)/A0×100%

        2 結(jié)果與分析

        2.1 復(fù)合物對(duì)小鼠的影響

        由表1可見,取復(fù)合物3 g/kg,對(duì)小鼠連續(xù)給藥14 d,增加肝組織SOD的含量,與對(duì)照組比較,有非常顯著性差異(P<0.01),復(fù)合物對(duì)GSHPX的影響,與對(duì)照組比較無顯著性差異(P>0.05)。表明復(fù)合物能增加小鼠肝組織SOD的含量。

        2.2 復(fù)合物對(duì)超氧陰離子自由基的清除作用

        由于復(fù)合物本身具有紅顏色,在波長299 nm下有一定的吸光度值,所以在試驗(yàn)過程中吸光度值A(chǔ)2為減去不同濃度的酵素自身的在波長299 nm下吸光度值后的數(shù)值。

        從圖1中可以看出,復(fù)合果蔬酵素對(duì)超氧陰離子自由基

        2.3 復(fù)合物對(duì)羥自由基的清除作用

        羥基自由基是活性

        氧中化學(xué)性質(zhì)最活潑的自由基,因此可通過分光光度法測(cè)定

        其含量來檢測(cè)待測(cè)物清除羥基自由基的能力。試驗(yàn)中取濃度為50%的復(fù)合物作為樣品,結(jié)果見圖2。

        圖2 濃度為50%的復(fù)合物對(duì)羥自由的基清除效果

        從圖2中可以看出,隨著復(fù)合物加入量的增多,對(duì)羥自由基的清除率也在隨著增加,當(dāng)加入復(fù)合物的體積為1.0 ml時(shí),其清除率為48.5%。同時(shí)又用復(fù)合物原液進(jìn)行試驗(yàn),加入體積為1.0 ml時(shí),其清除率仍在50%左右,說明該復(fù)合物對(duì)羥基自由基清除能力稍差。

        3 結(jié)論

        該研究采用不同的自由基體系對(duì)復(fù)合果蔬酵素體外抗氧化活性和酵素內(nèi)酶活性進(jìn)行了較為全面的研究,從試驗(yàn)結(jié)果可以看出以下結(jié)論:

        新型蛹蟲草多糖與果蔬酵素復(fù)合物對(duì)超氧陰離子自由基具有很強(qiáng)的清除作用,并對(duì)羥自由基也有一定的清除作用;新型復(fù)合物內(nèi)SOD酶活性也很高,具有很好的保健功效。因此可以得出,新型復(fù)合物具有抗氧化、抗衰老、增強(qiáng)免疫力、預(yù)防各種疾病的功效。

        參考文獻(xiàn)

        [1]

        范曉,嚴(yán)小軍,房國明,等.高分子量褐藻多酚抗氧化性質(zhì)研究[J].水生生物學(xué)報(bào),1999,23(5):494-499.

        [2] LARRAURI J A,SAURACALLIXTO S C.Effect of temperature on the free radical scavenging capacity of extracts from red and white grape peels[J].Agric Food Chem,1998,46:2694.

        [3] 鄭芙蓉.人工蟲草菌制劑的臨床應(yīng)用現(xiàn)狀[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志, 1992,12(2):84.

        [4] 王勤.冬蟲夏草的藥理研究及臨床應(yīng)用[J].廣西中醫(yī)藥,1986, 9(1): 43.

        [5] 劉友堯,吳長珠,李常春.中國擬青霉的抗氧化作用[J].中國中藥雜志,1991,16(4):240.

        [6] 張平,朱述鈞,蔣寧,等.北冬蟲夏草功能成分及保健作用分析[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2003(6):105-107.

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