李丹 吳海紅 邢桂梅等

摘要[目的] 建立一套完整的‘紫泉萱草組織培養(yǎng)快繁技術(shù)體系。[方法]選取‘紫泉萱草的花托及幼嫩的莖段為外植體，旨在建立‘紫泉萱草離體培養(yǎng)的有效再生體系。[結(jié)果]適合花托愈傷組織產(chǎn)生的培養(yǎng)基是MS+6BA 2.0 mg/L+NAA 0.01 mg/L，適合莖段愈傷組織產(chǎn)生的培養(yǎng)基是MS+6BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L。誘導(dǎo)不定芽分化與增殖的最佳培養(yǎng)基為MS+6BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L，最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA 0.4 mg/L。[結(jié)論]為‘紫泉萱草的大規(guī)模生產(chǎn)提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

關(guān)鍵詞紫泉萱草；組織培養(yǎng)；快速繁殖

中圖分類號(hào)S188文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2014）23-07723-03

作者簡(jiǎn)介李丹（1984- ），女，遼寧扶順人，助理研究員，從事花卉組織培養(yǎng)方面的研究。

收稿日期20140710萱草（Hemerocallis）又稱忘憂草、金針菜、黃花菜等，屬百合科萱草屬多年生草本宿根花卉。萱草姿態(tài)優(yōu)美，品種繁多，生長(zhǎng)強(qiáng)健，適應(yīng)性強(qiáng)，是庭園、花壇及街頭綠化的理想花卉，同時(shí)，其花可食用，根可入藥，已成為現(xiàn)代人們生活中不可缺少的重要花卉。萱草基因高度雜合，種子繁殖難以保持母本的優(yōu)良性狀，采用分株的方式進(jìn)行繁殖時(shí)，繁殖系數(shù)較低，難以實(shí)現(xiàn)規(guī)模化的生產(chǎn)，無法達(dá)到萱草商品化生產(chǎn)需求[1]。目前，市場(chǎng)需求日益增加，利用組織培養(yǎng)方法進(jìn)行萱草種苗的繁育，既可保持優(yōu)良性狀又可在短時(shí)間內(nèi)獲得大量種苗，是實(shí)現(xiàn)萱草產(chǎn)業(yè)化快速發(fā)展的有效途徑。

國(guó)內(nèi)外很多植物學(xué)專家先后對(duì)萱草組織培養(yǎng)進(jìn)行了研究，但結(jié)果不盡相同。這說明萱草品種間差異性大、品種特異性強(qiáng)，因此針對(duì)每一萱草品種進(jìn)行組培快繁研究都很有必要[2-4]。為此，筆者針對(duì)‘紫泉萱草的組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行研究，旨在建立一套完整的‘紫泉萱草組織培養(yǎng)快繁技術(shù)體系。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料供試材料為‘紫泉萱草，由遼寧省農(nóng)科院花卉所提供。

1.2方法

1.2.1外植體消毒和接種。選取生長(zhǎng)勢(shì)旺盛、強(qiáng)壯的植株，以花托和幼嫩的花莖為外植體。將外植體用洗衣粉清洗，流水沖洗30～40 min。在超凈工作臺(tái)上用75%乙醇將外植體浸泡30 s，再用 0.1%的氯化汞溶液消毒10 min。然后用無菌水沖洗3～5次后備用。在無菌培養(yǎng)皿上將花托切成小段，幼嫩花莖切成1 cm左右的莖段接種在愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中。

1.2.2愈傷組織誘導(dǎo)。采用MS基本培養(yǎng)基，利用不同濃度的6BA、NAA設(shè)計(jì)試驗(yàn)，6BA的濃度為1.0、2.0、3.0、4.0 mg/L，NAA濃度為0.01、0.10 mg/L，共8個(gè)組合（）。添加蔗糖30 g/L、瓊脂5 g/L，pH 5.8。

將外植體消毒后，分別接種至6BA、NAA以上組合，每處理接種30甁外植體。

不同基本培養(yǎng)基及激素濃度配比對(duì)‘紫泉萱草愈傷組織誘導(dǎo)的影響

試驗(yàn)號(hào)培養(yǎng)基類型∥mg/LNAA6BA不同外植體的愈傷誘導(dǎo)率∥﹪花托莖段10.011.028.0234.2520.012.067.0855.0630.013.018.0740.3140.014.08.0321.7750.101.022.0626.5460.102.014.0369.3270.103.025.1241.6980.104.05.3212.18

1.2.3不定芽誘導(dǎo)與增殖培養(yǎng)基篩選。采用MS基本培養(yǎng)基，利用6BA、NAA 2因素進(jìn)行試驗(yàn)設(shè)計(jì)，6BA的濃度為0.5、1.0、2.0 mg/L，NAA濃度為0.01、0.10 、0.50 mg/L，共9個(gè)組合（）。添加蔗糖30 g/L、瓊脂5 g/L，pH 5.8。

1.2.4生根培養(yǎng)?；九囵B(yǎng)基采用1/2MS，NAA的濃度為0.1、0.2、0.3、0.4 mg/L。添加蔗糖30 g/L、瓊脂5 g/L，pH 5.8。14 d后統(tǒng)計(jì)生根率、生根數(shù)、根的長(zhǎng)度等。

1.2.5試管苗煉苗及移栽。當(dāng)甁苗的根長(zhǎng)3～4 cm時(shí)，進(jìn)行煉苗移栽。扦插前打開瓶蓋，在自然散射光條件下煉苗2～3 d，然后用鑷子小心地從培養(yǎng)瓶中取出苗，并用自來水沖掉粘在根上的培養(yǎng)基。而后移栽到蛭石、細(xì)河沙、草炭∶沙子=1∶1和蛭石∶珍珠巖=1∶1 4種不同基質(zhì)中，溫室內(nèi)保持溫度在20～25 ℃，相對(duì)濕度在80%左右，并用遮陰網(wǎng)遮陰，噴水2次/d，待幼苗挺直、葉片展開時(shí)，可去掉遮蔭網(wǎng)，28 d后調(diào)查不同煉苗天數(shù)和不同基質(zhì)中試管苗的成活率及生長(zhǎng)情況。

不同激素濃度配比對(duì)‘紫泉萱草不定芽誘導(dǎo)與增殖的影響

試驗(yàn)號(hào)培養(yǎng)基類型∥mg/LNAA6BA接種愈傷

組織塊數(shù) 誘導(dǎo)出不定

芽塊數(shù)誘導(dǎo)率

2結(jié)果與分析

2.1愈傷組織的誘導(dǎo)選取‘紫泉萱草的花托及幼嫩的莖段作為外植體分別接種到8種培養(yǎng)基上。花托在接種14 d后產(chǎn)生愈傷組織，愈傷組織呈淡綠色，形成瘤狀突起（），花托于MS+6BA ‘紫泉萱草花托誘導(dǎo)出的愈傷組織2.0 mg/L+ NAA0.01 mg/L培養(yǎng)基上誘導(dǎo)率較高，可見6BA濃度為2.0 mg/L，NAA濃度為0.01 mg/L的激素比例適合花托愈傷組織的產(chǎn)生。

幼嫩的莖段接種于培養(yǎng)基上20 d后，與培養(yǎng)基接觸部位開始膨大，30 d左右開始出現(xiàn)愈傷組織（），莖段在8種培養(yǎng)基中均能誘導(dǎo)出愈傷組織，但不同激素配比對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)率有很大影響，在MS+6BA2.0 mg/L+NAA0.1 mg/L培養(yǎng)基中的誘導(dǎo)率最高，說明莖段是初代培養(yǎng)較適宜的外植體，合適的激素濃度為6BA2.0 mg/L、NAA0.1 mg/L有利于誘導(dǎo)莖段產(chǎn)生愈傷組織。

‘紫泉萱草花莖誘導(dǎo)出的愈傷組織2.2不同激素濃度配比對(duì)‘紫泉萱草不定芽誘導(dǎo)與增殖的影響將上述誘導(dǎo)出的愈傷組織轉(zhuǎn)接到9種不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，14 d后愈傷組織上可見不定芽，繼續(xù)培養(yǎng)，不定芽可長(zhǎng)成具有明顯莖葉結(jié)構(gòu)的小植株（圖 3）。將長(zhǎng)至5 cm左右的小苗切下接種到生根培養(yǎng)基上生根，將帶有不定芽的愈傷組織切塊接種到分化培養(yǎng)基，不定芽可不斷增殖。

‘紫泉萱草愈傷組織分化不定芽由可知，‘紫泉萱草不定芽誘導(dǎo)與增殖得最佳激素配比為6BA濃度為2.0 mg/L，NAA濃度為0.1 mg/L。

2.3不同NAA濃度對(duì)‘紫泉萱草試管苗生根的影響從可以看出，不同NAA濃度對(duì)‘紫泉萱草生根情況的影響，所設(shè)置的4個(gè)濃度之間存在差異，生根率和根長(zhǎng)均隨著NAA濃度增加而增加，當(dāng)NAA濃度為0.1 mg/L時(shí)，雖然根有一定的長(zhǎng)度，但生根率和平均根數(shù)較低，NAA濃度為0.2 mg/L與NAA濃度為0.3 mg/L各項(xiàng)指標(biāo)之間差異均不顯著，當(dāng)NAA濃度達(dá)到0.4 mg/L時(shí)生根率﹑平均根數(shù)和根長(zhǎng)都達(dá)到較好狀態(tài)，綜上所述，適合‘紫泉萱草不定芽生根的培養(yǎng)基為1/2MS+NAA 0.4 mg/L（）。

2.4煉苗與移栽試驗(yàn)表明，煉苗時(shí)間短，試管苗對(duì)外界環(huán)境不適應(yīng)，嚴(yán)重影響了移栽成活率，試管苗煉苗1 d的移栽成活率極低，煉苗2、3 d的移栽成活率均達(dá)到90%以上，因此萱草試管苗煉苗時(shí)間應(yīng)以2～3 d為宜。細(xì)河沙或蛭石∶草炭=1∶1較適合作為‘紫泉萱草的移栽基質(zhì)。

（1）莖段和花托適合作為‘紫泉萱草組培快繁的外植體。

（2）‘紫泉萱草不同部位的外植體都可以以MS作為基本培養(yǎng)基使用，但不同外植體對(duì)激素配比的要求不同，這就要求根據(jù)不同類型的外植體配置不同的激素濃度，才能達(dá)到更好的培養(yǎng)效果。

參考文獻(xiàn)

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