岳 崟，郝 靖，杜天宇，王麗梅

(武漢輕工大學(xué)生物與制藥工程學(xué)院，湖北武漢430023)

紫蘇(Perilla frutescens Britt.)屬于唇形科紫蘇屬植物，其梗、葉和果實(shí)均可入藥。據(jù)《本草綱目》記載，紫蘇具有行氣活血，清熱利濕，消痰，降氣，平喘，調(diào)和中氣，益五臟，治霍亂，補(bǔ)虛癆，潤腸之功效［1］。紫蘇葉具有宣肺化痰，解表散寒，解魚蟹毒，行氣和中，安胎的功效［2］。紫蘇還具有很高的利用價(jià)值，可食、藥兩用，具有抗腫瘤、抗微生物、降低血糖、解毒的功效［4，6］，在我國種植廣泛，歷史悠久。根據(jù)紫蘇的功能主治，結(jié)合中醫(yī)理論和臨床用藥，表明紫蘇葉有一定的健胃消食作用;但是紫蘇葉健胃消食促進(jìn)腸胃健康的機(jī)理尚未明確，也缺乏相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)。為進(jìn)一步探討紫蘇葉提高胃腸消化吸收的作用，本文選擇紫蘇葉石油醚提取物與乙醇提取物，采用動(dòng)物建模，通過觀察計(jì)算大鼠小腸碳末推進(jìn)百分率與胃液總酸排出量來證實(shí)紫蘇葉的健胃消食、促進(jìn)腸道蠕動(dòng)吸收的作用，并探討紫蘇葉石油醚提取物與乙醇提取物中發(fā)揮功能的重要成分，為開發(fā)紫蘇葉解毒消食劑等藥品、保健品提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 原料與試劑

紫蘇葉，石油醚(A.R)、乙醚(A.R)、95%乙醇(A.R)、A1(NO3)3(A.R)、NaNO2(A.R)、NaOH(A.R)等。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)SD大鼠124只，體重為(200±20)g，雌雄各半，華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院(實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部)提供，動(dòng)物許可證號(hào)SCXK2010-0009。

飼養(yǎng)條件:飼料為標(biāo)準(zhǔn)大鼠飼料，華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院(實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部)提供。獨(dú)立送風(fēng)凈化籠具IVC，溫度維持在18—25℃，相對(duì)濕度維持在40-70%，工作照度150—300L×，動(dòng)物照度15—20L×，晝夜明暗交替時(shí)間12/12 h，自由飲食、水。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器

分析天平，梅特勒-托利多儀器(山海)有限公司出品;超聲波破碎儀KQ2200V，昆山市超聲儀器有限公司出品;冰箱 三洋科龍SC-230LP，中國廣東三洋科龍冷柜有限公司;電熱鼓風(fēng)干燥箱DHG-9145A型，上海一恒科學(xué)儀器有限公司出品;水蒸氣蒸餾裝置，武漢龍翔化玻有限公司;氣質(zhì)聯(lián)用儀 Agilent 7890A/5975C，美國Agilent公司;紫外可見分光光度計(jì)Unico WFZ UV-2100，柯儀器有限公司;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀RE-52A，海亞榮生化儀器廠;循環(huán)水真空泵SHZ-Ⅲ，上海亞榮生化儀器廠;HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋，國華電器有限公司出品;恒流泵HL-2，上海青浦滬西儀器廠;微波萃取儀，深圳市科工達(dá)設(shè)備有限公司;冷凍干燥儀 RLPHA1-4，德國Martin Christ公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 紫蘇葉石油醚提取物的制備

依據(jù)《中醫(yī)藥大辭典》中石油醚提取物的制備方法［7］:紫蘇葉倒進(jìn)專用容器，紫蘇葉用95%乙醇提取，將其提取物用少量95%的乙醇溶解，然后加入硅藻土進(jìn)行攪拌至均勻狀態(tài)，之后將其置于水浴上揮干溶劑，得到硅藻土混合物。然后取針管(玻璃)一支，在針管下部放濾紙，把上一步驟中硅藻土混合物的粉末置于針管中，加入10—20 mL的石油醚勻速流洗，當(dāng)提取液的顏色接近無色時(shí)停止。溶劑濃縮揮發(fā)后便得紫蘇葉的石油醚提取物。

1.2.2 紫蘇葉乙醇提取物的制備

根據(jù)鄒培標(biāo)［8］等人的研究方法并結(jié)合實(shí)驗(yàn)操作將紫蘇葉乙醇提取物的制備方法優(yōu)化為:取干燥的紫蘇葉2—5 g，研磨粉碎，用70%乙醇回流提取3次，然后合并過濾液，減壓濃縮得到3000 mL過濾液，然后離心，留上清液，乙酸乙酯萃取3次，后合并萃取液，減壓濃縮得到紫蘇葉乙醇提取物。

1.2.3 紫蘇葉石油醚提取物與乙醇提取物對(duì)大鼠腸

將64只大鼠隨機(jī)分為8組(每組8只，灌胃劑量按生藥量計(jì)算并且由大鼠體重決定):陰性對(duì)照組(給藥生理鹽水)、陽性對(duì)照組灌食健胃消食片(1.4 g/kg)，紫蘇葉石油醚提取物高劑量組(60 g/kg)、中劑量組(30 g/kg)和低劑量組(15 g/kg)，乙醇提取高劑量組(30 g/kg)、中劑量組(20 g/kg)與低劑量組(10 g/kg)。給藥前對(duì)各組大鼠進(jìn)行稱重，確定各自灌胃劑量，陰性對(duì)照組給予生理鹽水、陽性對(duì)照組給予健胃消食片，每天給藥1次，連續(xù)灌胃10 d，最后一天給藥后立即稱重，小鼠禁食24 h后，用5%的活性阿拉伯膠(0.2 ml/20 g)混懸液灌腸，經(jīng)過20 min后將其處死，剖腹后取出腸管，鋪平，測(cè)量幽門至回盲部位與幽門至炭末前沿的距離，用以下公式計(jì)算碳末推進(jìn)率，并分析數(shù)據(jù)。

1.2.4 紫蘇葉石油醚提取物與乙醇提取物對(duì)大鼠胃液分泌的影響

將56只SD大鼠隨機(jī)均分成7組，每組八只，灌胃給藥，給藥劑量按體重折合。分為:紫蘇葉石油醚提取物與乙醇提取物大、中、小劑量組和陰性對(duì)照組(灌胃生理鹽水)。每天灌胃給藥1次，連續(xù)6 d。第6 d灌胃結(jié)束后，禁食24 h(不禁水)，將大鼠結(jié)扎幽門，十二指腸再次給藥(1次)，然后縫合大鼠腹壁切口。2 h后，拆線并開腹結(jié)扎賁門，取胃并傾出內(nèi)容物，將內(nèi)容物離心后記錄胃液總量。取離心后的上清液1 mL，加入酚紅指示劑1滴，用20 mmol/L的NaOH進(jìn)行中和滴定，記錄消耗的NaOH液量，最后計(jì)算總酸度和總酸排出量。

總酸度(nmol/L)=滴定所用NaOH體積×2%.

總酸排出量(μmol/L)=總酸度×每小時(shí)胃酸量.

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

2.1 紫蘇葉石油醚提取物與乙醇提取物對(duì)大鼠腸蠕動(dòng)的影響

由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，與陰性對(duì)照組相比，陽性對(duì)照組、紫蘇葉石油醚提取物與乙醇提取物各劑量組大鼠的碳末推進(jìn)長度與碳末推進(jìn)百分率均明顯增高，并且各劑量組中，紫蘇葉石油醚提取物中劑量組與大劑量組以及紫蘇葉乙醇提取物高劑量組大鼠的碳末推進(jìn)長度與碳末推進(jìn)百分率與陰性對(duì)照組相比差異極顯著(P＜0.01))。而與陽性對(duì)照組相比，只有紫蘇葉石油醚提取物中劑量組與大劑量組以及紫蘇葉乙醇提取物高劑量組大鼠的碳末推進(jìn)長度與碳末推進(jìn)百分率有明顯增加。更有意思的是，各劑量組中只有紫蘇葉石油醚提取物大劑量組與紫蘇葉乙醇提取物低劑量組的大鼠小腸總長度顯著長于陰性對(duì)照組，表明一定劑量的紫蘇葉石油醚提取物與乙醇提取物可以影響小腸長度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明紫蘇葉石油醚提取物與乙醇提取物可以促進(jìn)大鼠腸蠕動(dòng)(見表1)。

表1 紫蘇葉石油醚提取物與乙醇提取物對(duì)大鼠腸蠕動(dòng)的影響±s，n=8)

表1 紫蘇葉石油醚提取物與乙醇提取物對(duì)大鼠腸蠕動(dòng)的影響±s，n=8)

注:*與陰性對(duì)照組比較，有顯著性差異(P＜0.05)，＊＊有極顯著性差異(P＜0.01);#與陽性對(duì)照組比較，有顯著性差異(P ＜0.05)。

組別 劑量/g·kg－1 碳末推進(jìn)長度/cm 小腸總長度/cm 推進(jìn)百分率/%陰性對(duì)照組組1.4 33.68 ±3.40 98.00 ±5.41 34.40 ±4.1陽性對(duì)照組 1.4 44.46 ±3.11* 101.40 ±4.62 43.85 ±3.7*石油醚提取物低劑量組 15 71.28 ±4.02＊＊# 99.30 ±5.60 71.78 ±4.6＊＊#石油醚提取物中劑量組 30 64.59 ±2.70＊＊# 98.80 ±3.09 65.37 ±2.9＊＊#石油醚提取物高劑量組 60 44.13 ±5.40* 106.40 ±3.27* 41.48 ±4.7*乙醇提取物低劑量組 10 48.45 ±2.91* 100.60 ±4.16* 48.16 ±3.77*乙醇提取物中劑量組 20 51.40 ±3.40* 99.90 ±3.25 51.45 ±3.08*乙醇提取物高劑量組 30 66.85 ±4.90＊＊# 108.60 ±3.08 61.56 ±3.78＊＊#

2.2 紫蘇葉石油醚提取物與乙醇提取物對(duì)大鼠胃液分泌的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與陰性對(duì)照組相比，各組的胃液總量，除了紫蘇葉石油醚提取物低劑量組與紫蘇葉乙醇提取物小劑量組沒有明顯變化外，其余各劑量組大鼠胃液總量均有極明顯增加。在各組總酸度的比較中可以看出，與陰性對(duì)照組相比，各劑量組的大鼠的胃液總酸度均顯著提高，其中紫蘇葉石油醚提取物與乙醇提取物各劑量組大鼠的胃液總酸度與陰性對(duì)照組相比差異極顯著。而在各組大鼠胃液總酸排出量的比較中，只有紫蘇葉石油醚提取物中劑量組、大劑量組，紫蘇葉乙醇提取物高劑量組、中劑量組極高于陰性對(duì)照組，其他劑量組與陰性對(duì)照組相比沒有顯著性差異。

由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，紫蘇葉石油醚提取物與乙醇提取物能夠提高大鼠胃液分泌，提高大鼠胃液總量，總酸排出量與總酸度，具有健胃消食的作用。但是值得注意的是，不同劑量的紫蘇葉石油醚提取物與乙醇提取物對(duì)大鼠的胃液分泌情況起著不同的作用，這位進(jìn)一步研究紫蘇葉的健胃消食作用提供了依據(jù)(見表2)。

表2 紫蘇葉石油醚提取物與乙醇提取物對(duì)大鼠胃液分泌的影響±s，n=8)

表2 紫蘇葉石油醚提取物與乙醇提取物對(duì)大鼠胃液分泌的影響±s，n=8)

注:與陰性對(duì)照組比較，*P＜0.05差異顯著，＊＊P＜0.01差異極顯著。

組別 劑量/g·kg－1 胃液總量/mL 總酸度/mmol·L－1 總酸排出量/mmol·L －1陰性對(duì)照組1.4 1.21 ±0.22 42.30 ±5.58 35.54 ±5.20石油醚提取物低劑量組 15 1.53 ±0.28 68.45 ±6.18* 41.09 ±4.90石油醚提取物中劑量組 30 3.04±0.31＊＊ 101.46±4.70＊＊ 78.71±4.81＊＊石油醚提取物大劑量組 60 3.76±0.32＊＊ 121.04±4.37＊＊ 86.7±4550＊＊乙醇提取物低劑量組 10 1.53 ±0.18 64.48 ±6.04* 39.98 ±4.20乙醇提取物中劑量組 20 2.33±0.29＊＊ 89.84±5.60＊＊ 85.67±3.71＊＊乙醇提取物高劑量組 30 3.38±0.20＊＊ 92.8±16.4＊＊ 72.08±3.89＊＊

3 討論

腸胃的運(yùn)動(dòng)功能是人體消化系統(tǒng)中主要的生理功能之一。健全的胃腸運(yùn)動(dòng)不僅能夠運(yùn)送食糜，推動(dòng)腸道內(nèi)的細(xì)菌和其產(chǎn)物的排出，而且對(duì)胃腸道而言，還能起著非特異免疫的防御作用。醫(yī)學(xué)病例指出，手術(shù)、創(chuàng)傷、放療、化療、等嚴(yán)重感染的應(yīng)激狀態(tài)下，大多數(shù)患者常常會(huì)出現(xiàn)腹脹腹痛、惡心嘔吐等胃腸反應(yīng)，這種反應(yīng)屬于腸胃動(dòng)力障礙的表現(xiàn)。對(duì)于病人而言，在早期服用藥物恢復(fù)胃腸道正常功能對(duì)其疾病的恢復(fù)與預(yù)防至關(guān)重要。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，導(dǎo)致胃腸動(dòng)力障礙的原因很多，促進(jìn)胃腸動(dòng)力的西藥往往治標(biāo)不治本，效果欠佳，而中藥治療具有較好的臨床效果，尤其是近年來紫蘇葉制劑在臨床上的應(yīng)用效果顯著，其發(fā)展前景非常廣闊［9］。紫蘇具有很高的利用價(jià)值，在我國種植廣泛歷史悠久。研究顯示紫蘇具有解表散寒與行氣和胃等功效可用于治療風(fēng)寒感冒，咳嗽嘔吐，妊娠期嘔吐和魚蟹等食物中毒。紫蘇葉具有潤腸通便，宣肺化痰，解表散寒，健胃健脾之功效，其中發(fā)揮作用的關(guān)鍵物質(zhì)是紫蘇葉中的紫蘇醛、紫蘇酮、香薰酮、紫蘇烯、類苯丙醇、反檸檬醛等物質(zhì)，它們可以通過影響機(jī)體的生理功能來影響腸胃排空，蠕動(dòng)［10］，有研究對(duì)紫蘇葉中的主要成分進(jìn)行分析，并且將其歸類［11］，并發(fā)現(xiàn)其中較為引人注目的是醛酮類物質(zhì)與亞麻酸［12-13］。由本實(shí)驗(yàn)結(jié)果看也看出，紫蘇葉石油醚提取物與乙醇提取物各劑量組大鼠的小腸碳末推進(jìn)百分率均顯著增高，證明紫蘇葉可以促進(jìn)大鼠腸道蠕動(dòng)，增強(qiáng)大鼠的健胃消食功效，并且在A組實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)不同劑量的石油醚提取物與乙醇提取物發(fā)揮不同的藥效，其中紫蘇葉乙醇提取物大劑量組與紫蘇葉石油醚提取物中劑量的效果最好。在B組實(shí)驗(yàn)中，我們看出只有紫蘇葉石油醚提取物大、中劑量組與紫蘇葉乙醇提取物的大、中劑量組發(fā)揮極好的效果?？偨Y(jié)實(shí)驗(yàn)結(jié)論，說明一定劑量的紫蘇葉石油醚提取物與乙醇提取物能夠提高大鼠的腸胃功能，而紫蘇葉石油醚提取物與乙醇提取物含0.3%—0.7%的揮發(fā)油，其中主要成分為檸檬烯、紫蘇醛與紫蘇酮等，它們是發(fā)揮作用的關(guān)鍵成分，但是其如何促進(jìn)胃腸健康，還有待進(jìn)一步進(jìn)行研究。目前紫蘇葉的提取物現(xiàn)已被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、保健、美容、食品和防腐劑等行業(yè)，其前景極其可觀，本實(shí)驗(yàn)不僅為進(jìn)一步研究紫蘇葉的藥效量效關(guān)系提供了依據(jù)，為以后深入研究其機(jī)制提供理論依據(jù)，也為研究新的健胃消食藥物、保健品等提供研究基礎(chǔ)。

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