胡 瑩

(江蘇省中醫(yī)院，江蘇 南京 210019)

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金櫻子飲片HPCE指紋圖譜研究

胡 瑩

(江蘇省中醫(yī)院，江蘇 南京 210019)

目的：初步建立金櫻子飲片的HPCE指紋圖譜分析方法，分析比較金櫻子及金櫻子炮制品的指紋圖譜。方法：采用高效毛細(xì)管電泳法，以三萜類作為參照物，測(cè)定金櫻子及金櫻子炮制品的指紋圖譜，并進(jìn)行模糊聚類法分析并評(píng)價(jià)其相似度。結(jié)果：初步建立了以9個(gè)共有峰為特征指紋信息的金櫻子飲片HPCE指紋圖譜；少數(shù)金櫻子飲片的指紋圖譜有一定差異，生品與炮制品指紋圖譜中的共有峰相對(duì)峰面積差異顯著。結(jié)論：采用高效毛細(xì)管電泳法測(cè)定金櫻子指紋圖譜準(zhǔn)確性高，具有較好的重復(fù)性，可作為金櫻子飲片質(zhì)量的評(píng)價(jià)依據(jù)。

金櫻子；高效毛細(xì)管電泳檢測(cè)法；指紋圖譜

金櫻子(RosaLaevigataMichx)系薔薇科薔薇屬，一般為野生蔓性灌木植物，其分布較為廣泛，通常生長(zhǎng)在田邊、山野以及溪畔灌叢等海拔不高于1 600m的地區(qū)。金櫻子果實(shí)中含有三萜類、黃酮類、多糖類、維生素C、B1、B2以及胡蘿卜素、礦物質(zhì)、脂肪酸和氨基酸等活性成分[1-2]。《本草綱目》中記載金櫻子性酸、澀、平、無毒，可脾瀉下痢、止小便利、澀精氣，久服令人耐寒輕身、補(bǔ)血益精?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，金櫻子對(duì)燒燙傷、皮膚腫瘤、神經(jīng)性頭痛、神經(jīng)衰弱等都具有很好的療效[3-4]，其還具有抗腫瘤、抗氧化[5-6]、抗病毒、降糖降脂等藥理學(xué)作用[7]。中藥質(zhì)量評(píng)估方法多種多樣，毛細(xì)管電泳技術(shù)是新型分析技術(shù)，其特點(diǎn)是效率高、速度快且具有較高的靈敏度，適用范圍較為廣泛。因此，本研究采用高效毛細(xì)管電泳法測(cè)定金櫻子及其炮制品指紋圖譜，以期為規(guī)范金櫻子飲片市場(chǎng)及確保其內(nèi)在質(zhì)量的均一性和穩(wěn)定性提供參考依據(jù)。

1 儀器與試劑

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(RotavaporR-3型)購(gòu)自瑞士BUCHI公司；高效毛細(xì)管電泳儀(G1600-AX型)購(gòu)自美國(guó)Agilent公司，并配有自動(dòng)進(jìn)樣器以及惠普化學(xué)工作站和二極管陣列檢測(cè)器(DAD)等；超聲波清洗器(KQ-500E型)購(gòu)自昆山市超聲儀器有限公司； pH計(jì)(pHS-3C型)購(gòu)自上?？祪x儀器有限公司。

磷酸二氫鈉為分析純，購(gòu)自南京化學(xué)試劑一廠；硼砂、氫氧化鈉為分析純，購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；甲醇、鹽酸、無水乙醇、乙酸均為分析純，購(gòu)自上?；瘜W(xué)試劑有限公司；乙腈為HPLC級(jí)，購(gòu)自德國(guó)Merck試劑公司；實(shí)驗(yàn)過程中緩沖溶液及供試品溶液配制所用水均為重蒸餾水。

三萜類對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院(批號(hào)110873-201052)，生金櫻子購(gòu)自當(dāng)?shù)厮幍?，金櫻子提取物為自制?/p>

梓醇(批號(hào)：110456-201007)、桃葉珊瑚苷(批號(hào)：112545-200942)、梔子苷(批號(hào)： 111358-200853)、肉桂酸(批號(hào)：112534-201037)購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；毛蕊花糖苷購(gòu)于上海永葉生物科技有限公司。

將不同批次的金櫻子樣品進(jìn)行編號(hào)，分別為R1-R11。R1-R5為生金櫻子，R6-R9為熟金櫻子，R10、R11為金櫻子的加工炮制品。所有樣品均經(jīng)鑒定教研室鑒定為金櫻子新鮮或干燥的果實(shí)，或生金櫻子的加工炮制品。

2 方法

在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前用濃度為0.1mmol/L的氫氧化鈉溶液清洗毛細(xì)管，然后在加壓的情況下分別使用樣品溶液、蒸餾水和運(yùn)行緩沖液對(duì)毛細(xì)管進(jìn)行沖洗5、10、5min。將樣品溶液加入到樣品管中，按照下述條件進(jìn)行測(cè)定：樣品管為未涂漬標(biāo)準(zhǔn)熔融石英毛細(xì)管(64.5cm×75μm，有效長(zhǎng)度56cm，Agilent 科技有限公司)，運(yùn)行緩沖液中為40mmol/L硼砂，pH8.6的10mmol/L磷酸二氫鈉-10%甲醇，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，分離電壓為20kV，進(jìn)樣壓力為5kPa×6s，毛細(xì)管溫度為20℃。每測(cè)定一個(gè)樣品后，都要使用0.1mmol/LNaOH、蒸餾水、緩沖液對(duì)毛細(xì)管進(jìn)行沖洗并平衡3、5、5min。平衡和沖洗所用溶液在使用前均需經(jīng)0.22μm 濾膜過濾，并超聲脫氣。測(cè)定所有供試品HPCE色譜，疊加后見圖1。

圖1 金櫻子HPCE指紋圖譜疊加

比較金櫻子樣品R1-R11的HPCE 色譜，分析各色譜峰的重疊率，以金櫻子標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)定的10個(gè)共有峰作為指紋圖譜的特征峰，比較各樣品共有峰相對(duì)峰面積大小。

3 結(jié)果

對(duì)各樣品指紋圖譜的重疊率進(jìn)行分析，劃定基準(zhǔn)線后，結(jié)果顯示，R1與R2～R11指紋圖譜的重疊率分別為84.38%、85.63%、86.27%、87.37%、86.04%、85.16%、86.05%、85.96%、85.12%、85.78%。生金櫻子與金櫻子炮制品的指紋圖譜重疊率為73.53%，以生金櫻子為基準(zhǔn)，炮制金櫻子與其的相似度為0.749。

4 討論

本研究初步建立了金櫻子飲片HPCE指紋圖譜，不同批次的金櫻子飲片指紋圖譜有一定差異，生品與炮制品指紋圖譜中的共有峰相對(duì)峰面積亦不相同。綜上所述，采用高效毛細(xì)管電泳法測(cè)定金櫻子指紋圖譜準(zhǔn)確性高，具有較好的重復(fù)性，可作為金櫻子飲片質(zhì)量的評(píng)價(jià)依據(jù)。

[1] 何洪英.金櫻子生理功能及其保健食品研究進(jìn)展[J].飲料工業(yè),2001,4(3):33-35.

[2] 肖凱軍,劉曉紅.金櫻子果實(shí)的化學(xué)成分及其應(yīng)用[J].現(xiàn)代食品與藥品雜志,2006,16(4):1-3.

[3] 江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大字典[M].上冊(cè).上海:上海人民出版社,1977：1406-1408.

[4] 閔運(yùn)江,劉文中,陳乃富.皖西大別山區(qū)金櫻子野生資源儲(chǔ)備量的調(diào)查研究[J].生物學(xué)雜志,2001,18(2):26-28.

[5] 彭梅,張振東,楊娟.14種多糖對(duì)小鼠S180肉瘤抑制活性篩選[J].山地農(nóng)業(yè)生物學(xué)報(bào),2011,30(1):56-59.

[6] 馮承恩,田素英.金櫻根多糖的制備及其體內(nèi)抗腫瘤作用初探[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2011,17(6):209-212.

[7] 吳玉蘭,曹運(yùn)長(zhǎng).中藥金櫻子的化學(xué)成分及其藥理作用研究進(jìn)展[J].微量元素與健康研究,2012,29(1):53-56.

(責(zé)任編輯：尹晨茹)

2014-05-23

R284.1

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1673-2197(2014)18-0022-01