王 鍵，陳 婧

(公安邊防部隊總醫(yī)院 藥劑科，廣東 深圳 518023)

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桔?？傇碥蘸繙y定方法研究

王 鍵，陳 婧

(公安邊防部隊總醫(yī)院 藥劑科，廣東 深圳 518023)

目的：建立以香草醛-硫酸比色法測定桔梗中總皂苷含量的方法，為中藥桔梗的藥材質(zhì)量鑒定提供方法借鑒。方法：將桔梗進(jìn)行處理之后采取抽濾的方式提取抽提物，運(yùn)用大孔樹脂分離純化，采取香草醛-硫酸比色法測定桔梗中總皂苷的含量。結(jié)果：比色法所得到的線性方程為A=0.00334C+0.063，r=0.9989。對于來源不同的桔梗所測得的總皂苷的含量比率在2.04%～2.35%之間。結(jié)論：該方法測定桔梗中總皂苷含量穩(wěn)定性好，操作簡單，可以作為桔梗藥材質(zhì)量控制的評價指標(biāo)。

桔梗；總皂苷；含量測定

桔梗(RadixPlatycodonis)為桔?？?Caripanulaceae)植物桔梗的干燥根，屬于一種藥食同源的用途廣泛的植物[1]。在中醫(yī)上，其性味平、辛、苦，歸肺經(jīng)，有排膿、利咽、祛痰、宣肺等功效，多用于治療瘡瘍膿成不潰、肺癰葉膿、音啞、咽痛、胸悶不暢、咳嗽痰多等癥狀。桔梗中的主要藥用成分為皂苷類物質(zhì)，同時皂苷物質(zhì)也是《中國藥典》中規(guī)定的對于桔梗質(zhì)量進(jìn)行鑒定的主要指標(biāo)之一[2]。目前，對于桔梗皂苷研究的文獻(xiàn)顯示，已經(jīng)從桔梗中分離出來的皂苷類物質(zhì)達(dá)40多種，比較常見的有桔梗皂苷A、桔梗皂苷B、桔梗皂苷D、桔梗皂苷D2、桔梗皂苷D3、桔梗皂苷E等物質(zhì)[3]。在藥典中對桔梗皂苷的測定采取的是重量法，該方法會因桔梗中多糖含量的存在而造成一定的誤差，且操作較為復(fù)雜[4]，本文采取桔梗皂苷D作為對照品，以香草醛-硫酸比色法測定桔梗中總皂苷含量，以檢測桔梗中的總皂苷含量，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 儀器與材料

1.1 儀器與試劑

JJ-BC系列電子分析天平(美國雙杰公司)；UV2550紫外分光光度計(日本島津)；數(shù)字顯示恒溫水浴鍋(廣東環(huán)凱)；R-1050旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(長城科工貿(mào))；大孔樹脂色譜柱(長30cm，內(nèi)徑3cm)；桔梗皂苷D標(biāo)準(zhǔn)品(上海紫一試劑廠)；AB-8大孔吸附樹脂(南開大學(xué))；其余試劑均為分析純(國藥集團(tuán))。

1.2 材料

本次試驗中所選用的桔梗樣品一共有10個，分別來自于不同的藥材市場，并經(jīng)過專業(yè)的中藥藥劑師鑒定為純正桔梗藥材。采取英文字母A～J進(jìn)行標(biāo)記，以上藥材均采取相同的處理方式，對其清洗干凈之后置于60℃恒溫烘箱中干燥至恒重，中藥粉碎機(jī)粉碎，干燥密封保存于有標(biāo)記的封口袋中，備用。

2 方法與結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液制備

將標(biāo)準(zhǔn)品桔梗皂苷D干燥至恒重，電子天平準(zhǔn)確稱取3.5mg樣品并用70%甲醇進(jìn)行溶解，轉(zhuǎn)入10mL的容量瓶中，并用70%甲醇溶液添加至容量瓶刻度線處，定容備用。

2.2 供試樣品制備

準(zhǔn)確稱取待測定的桔梗樣品1.0g，放入索氏提取器中，采取70%甲醇作為提取液，浸泡30min之后，再加熱回流提取4次，每次2h，補(bǔ)充70%甲醇至提取之前重量，減壓抽濾，合并濾液，采取旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的方式濃縮至10mL左右的提取物，將該提取物上AB-8大孔樹脂色譜柱進(jìn)行分離純化，重量比例1∶20，反復(fù)上樣，采取200mL的去離子水作為洗脫液，之后再用400mL60%的乙醇作為洗脫液。水洗脫液丟棄，收集60%乙醇洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，加入70%甲醇10mL作為溶解劑溶解，轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中定容備用。

2.3 測定波長選擇

選擇50μL供試樣品和80μL標(biāo)準(zhǔn)樣品放置于試管中，干燥蒸干之后，準(zhǔn)確加入5mL 60%硫酸溶液和0.5mL10%香草醛溶液，均勻混合，搖勻備用。60℃下水浴15min，然后冰水浴3min，配一支空白管作為空白對照，選取波長范圍為472nm作為檢測波長[5]，空白對照沒有干擾。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線

精密量取桔梗皂苷D標(biāo)準(zhǔn)樣品40μL、80μL、120μL、160μL、200μL,分別蒸干之后，加5mL 60%硫酸溶液和0.5mL10%香草醛溶液，均勻混合，搖勻備用。60℃下水浴15min，然后冰水浴3min，選取472nm作為檢測波長。以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度C作為橫坐標(biāo)，吸光度值A(chǔ)作為縱坐標(biāo)，得到回歸方程：A=0.00334C+0.063，r=0.9989，表明線性關(guān)系良好。樣品回收率為97.37%，RSD為1.52%(n=6)。

2.5 含量測定

準(zhǔn)確稱取10種待測定的桔梗樣品，采取與標(biāo)準(zhǔn)樣品相

同的方式制備供試樣品，并采取相同的方式測定其吸光度值，結(jié)果顯示，對于來源不同的桔梗所得到的總皂苷含量比率在2.04%～2.35%之間。詳見表1。

表1 不同來源的桔梗測定總皂苷含量

3 討論

藥典中對桔梗皂苷的測定采取的是重量法，該方法會因桔梗中多糖含量的存在而造成一定的誤差，且操作較為復(fù)雜。本文采取桔梗皂苷D作為對照品以檢測桔梗中的總皂苷含量，結(jié)果顯示采取比色法所得到的線性方程為A=0.00334C+0.063，相關(guān)系數(shù)為r=0.9989。對于來源不同的桔梗所得到的總皂苷含量比率在2.04%～2.35%之間。該方法測定桔梗中總皂苷含量穩(wěn)定性好，操作簡單，可以作為桔梗藥材質(zhì)量控制的評價指標(biāo)，為桔梗藥材質(zhì)量控制的進(jìn)一步研究奠定了基礎(chǔ)。

[1] 李喜鳳,薛秋萍,董誠明.桔梗中總皂苷的含量測定[J].中醫(yī)藥學(xué)刊,2006，24(12).

[2] 石俊英,董其亭,鞏麗麗,等.不同產(chǎn)地桔梗中總皂苷成分與質(zhì)量的相關(guān)性研究[J].山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2006,30(3):247-250.

[3] 魏建和,黃璐琦,陳士林,等.桔梗柱頭、花粉活力及自交親和性研究[J].中國中藥雜志,2006，31(5).

[4] 何美蓮,程小衛(wèi),陳家寬,等.桔梗皂苷類成分及其質(zhì)量分析[J].中藥新藥與臨床藥理,2005，16(6).

[5] 魏尚洲.桔梗資源的綜合開發(fā)利用[J].陜西科技大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版,2005，23(5).

(責(zé)任編輯：魏 曉)

2014-04-23

王鍵，男，廣東省公安邊防部隊總醫(yī)院主管藥師，研究方向為藥劑學(xué)。

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1673-2197(2014)15-0030-02