李 哲，文師龍，馮玉康，楊寶翠

(1.神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司，河北 石家莊 051430；2.奧星制藥設(shè)備有限公司，河北 石家莊 050011)

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HPLC法測(cè)定腦力寶丸中維生素B1含量

李 哲1*，文師龍2，馮玉康1，楊寶翠1

(1.神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司，河北 石家莊 051430；2.奧星制藥設(shè)備有限公司，河北 石家莊 050011)

目的：建立腦力寶丸中維生素B1的高效液相色譜測(cè)定方法。方法：采用C18柱(4.6mm×250mm,5μm)，以甲醇-0.05 mol·L-1磷酸二氫鉀溶液(pH 3.0，5∶95)為流動(dòng)相，流速：1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)：246nm，柱溫：35℃。結(jié)果：該方法的專屬性良好，維生素B1的線性范圍為5.16～51.6μg·mL-1，平均回收率為100.08%，RSD=0.87%。結(jié)論：該方法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于腦力寶丸的質(zhì)量控制。

HPLC；腦力寶丸；維生素B1

腦力寶丸收載于《部頒標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十四冊(cè)》，由遠(yuǎn)志、地黃、五味子、地骨皮、菟絲子、茯苓、石菖蒲、川芎八味藥材和維生素E、維生素B1組成的復(fù)方藥劑，具有滋補(bǔ)肝腎、養(yǎng)心安神之功效[1]，主要用于肝腎不足[2]、心神失養(yǎng)所致的健忘失眠、煩躁夢(mèng)多、潮熱盜汗、神疲體倦及神經(jīng)衰弱等證候[3]。該標(biāo)準(zhǔn)尚未建立維生素B1的含量測(cè)定方法，本文于原標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上建立了維生素B1的HPLC含量測(cè)定方法，該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，可用于腦力寶丸中維生素B1的含量測(cè)定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent-1260高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫科技公司)；METTLER-ALC-210.4電子分析天平(上海梅特勒托利多儀器有限公司)；KE3200E型超聲清洗器(昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司)。

1.2 試藥

腦力寶丸，神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司(批號(hào)：1209221、1209222、1209231、1209232、1209241、1209242)；維生素B1對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究所，批號(hào)：100390-200703)；甲醇，色譜純(Thermo Fisher)；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：C18(4.6mm×250mm,5μm)柱；檢測(cè)波長(zhǎng)：246nm；流動(dòng)相：甲醇-0.05mol·L-1磷酸二氫鉀溶液(pH值為3.0，5∶95)；流速1.0mL·min-1，柱溫35℃，進(jìn)樣量10μL。理論塔板數(shù)按維生素B1峰計(jì)算，應(yīng)不低于2 500。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

維生素B1于105℃干燥至恒重，精確稱取5.0mg，至100 mL棕色量瓶中，加0.5% 冰醋酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得0.05mg/L的對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取上述對(duì)照品儲(chǔ)備液4 mL于10 mL量瓶中，用0.5% 冰醋酸溶液稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液制備

取本品，除去包衣，研細(xì)，精密稱取0.2g，置100 mL棕色量瓶中，加0.5%冰醋酸溶液適量，超聲提取30 min，溶解放冷，用0.5% 冰醋酸溶液稀釋至刻度，搖勻?yàn)V過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.4 專屬性試驗(yàn)

按法定工藝[1]制成缺少維生素B1的陰性樣品，根據(jù)供試品溶液制備方法制備成陰性對(duì)照溶液，并進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果維生素B1陰性對(duì)照溶液在與維生素B1對(duì)照品相同保留時(shí)間處未見明顯色譜峰，證明該方法專屬性良好，見圖1。

2.5 線性關(guān)系考察

精密吸取維生素B1對(duì)照品儲(chǔ)備液各1.0、2.0、4.0、6.0、10.0mL于10.0mL容量瓶中，加0.5% 冰醋酸溶液稀釋至刻度，得濃度分別為5.16、10.32、20.64、30.96、51.6 μg·mL-1的對(duì)照品溶液，分別按“2.1”色譜條件測(cè)定，記錄色譜峰，并以峰面積對(duì)溶液濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=25.001X-2.434 (r=0.999 9)，結(jié)果表明，維生素B1在5.16～51.6μg ·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗(yàn)

取同一對(duì)照品溶液，按“2.1”色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，結(jié)果RSD=0.33%，精密度良好。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)

取同一批腦力寶丸6份，分別制備供試品溶液，按“2.1”色譜條件測(cè)定，測(cè)得維生素B1平均含量為1.99mg/丸，RSD= 0.71%。

圖1 腦力寶丸及對(duì)照品HPLC

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，分別于0、2、4、8、12h進(jìn)樣，按2.1色譜條件測(cè)定維生素B1含量，結(jié)果RSD= 0.17% ，說明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 回收率試驗(yàn)

取同一批已知含量的樣品(維生素B1含量為1.99mg/丸)6份，各0.1g，采用加樣回收法，精密加入一定量維生素B1對(duì)照品，照供試品溶液的制備方法和色譜條件進(jìn)行含量測(cè)定，并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表1。

2.10 樣品測(cè)定

按上述含量測(cè)定方法對(duì)6批腦力寶丸進(jìn)行測(cè)定，并計(jì)算維生素B1含量，結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 提取溶劑選擇

本實(shí)驗(yàn)提取溶劑采用0.5%冰醋酸。維生素B1是由嘧啶環(huán)和噻唑環(huán)通過亞甲基結(jié)合形成的一種B族維生素[4]，在酸性溶液中較穩(wěn)定，在堿性溶液中不穩(wěn)定，易被氧化,環(huán)狀容易破壞；遇光和熱維生素B1效價(jià)下降[5]。

3.2 流動(dòng)相選擇

采用0.5% 冰醋酸[6]、0.05 mol·L-1庚烷磺酸鈉(冰醋酸pH=3.0)-甲醇(50：50)[7]、甲醇-0.05 mol·L-1磷酸二氫鉀溶液(pH 3.0)(1∶99)[8]為流動(dòng)相，考察樣品中各成分的分離情況，結(jié)果，采用0.5%冰醋酸為流動(dòng)相對(duì)色譜柱損害極大，且維生素B1峰形不對(duì)稱，拖尾現(xiàn)象嚴(yán)重，而采用庚烷磺酸鈉離子對(duì)試劑為流動(dòng)相時(shí)，柱子平衡時(shí)間較長(zhǎng)，維生素B1峰的保留時(shí)間不穩(wěn)定，同時(shí)采用離子對(duì)試劑也會(huì)影響色譜柱的使用壽命；而采用甲醇-0.05 mol·L-1磷酸二氫鉀溶液(pH3.0)為流動(dòng)相維生素B1峰形對(duì)稱，保留時(shí)間穩(wěn)定，后經(jīng)反復(fù)試驗(yàn)，確定流動(dòng)相比例為5∶95時(shí)，維生素B1峰的分離度良好，因此確定流動(dòng)相為甲醇-0.05 mol·L-1磷酸二氫鉀溶液(pH 3.0,5∶95)。

3.3 方法評(píng)價(jià)

實(shí)驗(yàn)建立的HPLC方法專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好，可用于腦力寶丸中維生素B1的含量測(cè)定。

表1 維生素B1加樣回收率試驗(yàn)

表2 腦力寶丸樣品含量測(cè)定結(jié)果 (n=2)

[1] 衛(wèi)生部.衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑[S].第十四冊(cè)，1997：140.

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(責(zé)任編輯：李嵐春)

2014-02-27

李哲(1984-)，女，河北神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司助理工程師，研究方向?yàn)樗幬镅邪l(fā)。

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1673-2197(2014)11-0039-02