張 立

(武漢市中醫(yī)醫(yī)院，湖北 武漢 430010)

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醇提取法提取大黃中蒽醌成分研究

張 立

(武漢市中醫(yī)醫(yī)院，湖北 武漢 430010)

目的：研究大黃中蒽醌成分提取方法。方法：以提取率、純度為研究指標，采用醇提取法提取大黃中蒽醌成分。結(jié)果：3種單體成分的提取率依次為大黃酸0.3%、大黃素0.6%、大黃酚0.1%；單體純度分別為大黃酚86.0%、大黃素83.6%、大黃酸81.5%。結(jié)論：與單純采用pH緩沖溶液萃取大黃蒽醌類有效成分相比，醇提取法具有費用低、操作簡單、提出率較高等優(yōu)點，高壓制備系統(tǒng)分離效果較好，有效成分純度較高，為大黃中蒽醌類成分提取提供了參考依據(jù)。

大黃；蒽醌；醇提取法

大黃藥物成分比較復雜，蒽醌為其主要成分之一，具有瀉下作用。大黃性寒，味苦，主要藥效為消炎止血、行癖化積、清熱瀉下。過去多采用煎煮工藝提取大黃中蒽醌成分，該工藝不僅提取率極低，且還會因長時間高溫導致蒽醌結(jié)構(gòu)受到破壞，影響藥效[1]。超聲法、熱回流法能夠有效提高蒽醌的提取率，防止長時間受熱蒽醌結(jié)構(gòu)受到破壞，從而保持藥效。本文采用醇提取法提取大黃中蒽醌成分，并對提取工藝進行深入分析和研究，以期進一步提高蒽醌類成分的純度及提取率，為大黃中蒽醌類成分提取提供參考依據(jù)。

1 提取及分離

1.1 大黃中蒽醌類成分提取

取大黃根莖適量，研磨成粉末，過20目篩，稱取濾過粉末140g，放入燒瓶中，加入700mL濃度為95%的乙醇，置于79℃水浴，0.5h后回流提取，連續(xù)提取4次；將4次提取液混合過濾，濃縮到100mL，加入280mL稀硫酸(2.5mol/L)，置于沸水浴5min，在回流水解作用下，蒽醌甙轉(zhuǎn)化為游離甙，依次采用乙醚150mL一份、100mL兩份、50mL兩份萃取水解液，混合萃取液，水浴除去乙醚。

1.2 蒽醌類成分分離

1.2.1 大黃酸混合物Ⅰ制備 大黃蒽醌類成分主要包括大黃酚、大黃素、大黃酸等，具有不同的酸度，萃取分離分別采用相應的pH溶液。在分液漏斗中加入乙醚萃取液，緩沖液為pH 8.0的硼酸鹽溶液，每次萃取用量為75mL，連續(xù)2次。將2次萃取液合并采用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至3.0，靜置沉淀過濾，對所得沉淀物進行干燥處理，并采用丙酮結(jié)晶，即得大黃酸混合物Ⅰ。

1.2.2 大黃素混合物Ⅱ制備 萃取液所得醚層依次加入200mL、100mL的硼酸鹽緩沖液(pH為 9.2)，連續(xù)萃取2次。將2次萃取液合并采用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至3.0，靜置沉淀過濾，對所得沉淀物進行干燥處理，并采用丙酮重結(jié)晶即得[2]。

1.2.3 大黃酸、大黃素及大黃酚制備 混合大黃酸混合物Ⅰ和大黃素混合物Ⅱ，加入甲醇完全溶解，過濾，采用高壓制備系統(tǒng)(型號DeLtar4000)分離濾液，根據(jù)色譜條件分別收集3次高峰流分(分別以A、B、C表示)。將得到的3份流出液置于75°C左右水浴蒸發(fā)濃縮，至溶液20mL，放置結(jié)晶，過濾取沉淀物采用丙酮進行重結(jié)晶，所得A、B、C分別為大黃酸、大黃素和大黃酚。采用色譜分析儀分析3種樣本色譜，與標準品進行比較分析。

1.3 HPLC色譜分析及計算

1.3.1 色譜分析 制備得到A(大黃酸)、B(大黃素)和C(大黃酚)3種單體結(jié)晶，純化進行色譜分析，參照標準品進行比較分析。

1.3.2 提取率 采用電子天平稱重得到的3份單體成分，計算出提取率[3]：提取率=單體重量/濾過粉末重量×100%。

1.3.3 純度分析 分別精密稱取3份單體結(jié)晶適量，加入適量甲醇溶液溶解制成樣品溶液，根據(jù)色譜條件對溶液進行定量、定性分析。根據(jù)標準曲線方程，計算所得峰面積得出溶液濃度，分別算出3種單體結(jié)晶的純度[4]。

2 HPLC色譜分析

2.1 線性范圍考察

2.1.1 大黃酸線性關系 在大黃酸標準液中加入甲醇溶液稀釋，溶液濃度分別為：3、6、12、24、48μg/mL，根據(jù)色譜分析條件每個樣本各進樣3次；計算峰面積，橫坐標為溶液濃度，縱坐標為峰面積，所得回歸方程為：Y=75 634.37X+31 943.17(r=0.999 6)，線性回歸后測定結(jié)果顯示：大黃酸溶液在濃度(0.48～7.5)×10-3μg/mL范圍內(nèi)線性良好。

2.1.2 大黃素線性關系 在大黃素標準液中加入甲醇進行稀釋，制備所得的溶液濃度分別為：1.3125、2.625、5.25、10.5、21、42、84μg/mL，根據(jù)色譜分析條件每個樣本各進樣3次；計算峰面積，橫坐標為溶液濃度，縱坐標為峰面積，所得回歸方程如下：Y=27 561.25X-128.3(r=0.999 8)，線性回歸后測定結(jié)果顯示：大黃素溶液在濃度(0.84～1.3125)×10-2μg/mL范圍線性良好。

2.1.3 大黃酚線性關系 在大黃酚標準液中加入甲醇進行稀釋，制備所得的溶液濃度分別為：0.234 5、0.469、0.938、1.875、3.75、7.5、15μg/mL，根據(jù)色譜分析條件將每個樣本各進樣3次，計算出峰面積，橫坐標為溶液濃度，縱坐標為峰面積，所得回歸方程為：Y=44 242.47X-2613.80(r=0.999 8)，線性回歸析測定結(jié)果顯示：大黃酚溶液在濃度(0.15～2.345)×10-3μg/mL范圍線性良好。

2.2 靈敏度

該方法測定濃度最低值分別為：大黃酸7.56μg/mL，大黃素13.13μg/mL，大黃酚2.35μg/mL。

2.3 色譜結(jié)果

采用pH緩沖溶液提取液中蒽醌類成分僅包含大黃酸、大黃素2種，且純度較低，色譜顯示兩種成分并不能明顯分離，所得樣品Ⅰ、Ⅱ色譜基本相似，因此該方法不能得到大黃蒽醌類單體成分。

圖1 大黃酸、大黃素、大黃酚HPLC色譜

醇提取法能夠有效分離大黃中蒽醌類成分得到大黃酸、大黃素、大黃酚。醇提取法提取液中包含3種單體成分，且含量均較高，色譜顯示3種成分混合與標準圖一致。采用醇提取法，大黃酸、大黃素、大黃酚單體成分收率極佳，純度高達80.0%以上。詳見圖1。

3 結(jié)果

3.1 提取效果

由大黃原料提取得到大黃酸、大黃素和大黃酚3種單體成分，黃色結(jié)晶物質(zhì)為大黃酸，桔紅色且呈針狀物質(zhì)為大黃素，黃色顆粒狀物質(zhì)為大黃酚，分別計算各成分的提取率，詳見表1。

表1 3種單體成分提取效果

3.2 純度分析

根據(jù)色譜分析上述3種單體成分純度，結(jié)果為：大黃酚86.0%，大黃素83.6%，大黃酸81.5%。見表2。

表2 3種單體成分純度

4 討論

大黃為多年生蓼科植物，藥材部分多為馬蹄大黃的根及根莖。大黃味苦微澀，性寒，具有瀉火、解毒、破積滯、行瘀血等功效。臨床上多用于治療便秘、譫語發(fā)狂、胃熱嘔吐、咯血、淤血經(jīng)閉、產(chǎn)后瘀血、小便不利等疾病[5]。近年來藥理研究表明，大黃具有抗菌、降壓、止血、提升血管韌性等功效；經(jīng)小鼠試驗發(fā)現(xiàn)大黃可抑制黑色素瘤、乳腺瘤等。藥性研究發(fā)現(xiàn)大黃中主要成分為蒽醌類衍生物，其含量達3%～5%，存在形式為葡萄糖結(jié)合甙。目前酸水解利用有機溶劑提取方法較為常見，但大黃中蒽醌類成分提取效率較低，且不穩(wěn)定，提取時間長。

綜上所述，醇提取法提取大黃蒽醌類有效成分方法具有費用低、操作簡單、提出率較高等優(yōu)點。與單純pH緩沖溶液萃取方法相比，醇提取法高壓制備系統(tǒng)分離效果大大提高，有效成分純度較高，為大黃中蒽醌類成分提取提供了參考依據(jù)。

[1] 彭秧錫,陳啟元,鐘世安,等. 玉竹中總黃酮的提取工藝研究[J]. 武漢理工大學學報， 2005，27(12)：103-104.

[2] 宋應華,陶冶,張建新,等.脫脂葡萄籽中原花青素提取工藝研究[J]. 重慶工商大學學報：自然科學版，2010，27(02) :57-58.

[3] 黃瓊,陳麗芬,李鑫宇,等.超聲波提取牡荊揮發(fā)油化學成分的GC-MS分析[J].廣西工學院學報,2007，18(04) :69-70.

[4] 聶媛,李夢青,張潔,等.虎杖中白藜蘆醇、白藜蘆醇苷、大黃素等有效成分的提取[J].河北工業(yè)大學學報，2008，37(02):60-65.

[5] 許海丹,顧霞敏.烏藥葉中總黃酮提取工藝的研究[J].科學技術與工程，2010，10(26) :6515-6518.

(責任編輯：李嵐春)

2014-05-08

張立(1982-)，男，湖北省武漢市中醫(yī)醫(yī)院藥師，研究方向為藥物臨床。

R284.2

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1673-2197(2014)16-0023-02