汪河濱，蘇 華，張 博

（省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地 新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)塔里木盆地生物資源保護(hù)與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆 阿拉爾 843300）

胡楊（Populus euphraticaOliv.）別名梧桐、異葉楊，屬于楊柳科（Salicaceae）楊屬（Populus）胡楊亞屬木本植物，是自白堊紀(jì)起源并保存下來(lái)的古老樹種，也是楊屬中最古老的一個(gè)種。

胡楊研究現(xiàn)狀主要涉及其獨(dú)特的形狀、起源、分類歸屬等同題，以后逐漸擴(kuò)展到其他方面，取得了一定的研究成果，近年來(lái)，胡楊潛在的基因資源價(jià)值和在造紙等工業(yè)方面的用途也逐漸受到有關(guān)人士的關(guān)注。

本研究以胡楊花序?yàn)檠芯坎牧希醪窖芯亢鷹罨ㄐ蛞掖继崛∥飳?duì)小鼠血清和肝勻漿中的超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）的活性及丙二醛（malondialdehyde，MDA）的含量的影響，以初步揭示胡楊花序抗氧化能力，因此對(duì)其進(jìn)行研究和開發(fā)有重要意義。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

胡楊花序：實(shí)驗(yàn)所用胡楊花序采自新疆阿拉爾市塔里木大學(xué)校內(nèi)及周邊地區(qū)，干燥后粉碎，用乙醇浸泡提取3次，提取液45 ℃減壓濃縮成浸膏，干燥后待用。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：小鼠，雌、雄各半，6～8周齡，體質(zhì)量（20±2）g，購(gòu)自塔里木大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心內(nèi)恒溫18～22 ℃，恒濕50%～80%，自由攝入無(wú)菌水和滅菌標(biāo)準(zhǔn)詞料。

劑量選擇：試驗(yàn)設(shè)胡楊花序乙醇提取物低劑量組（165 mg/kg BW）、胡楊花序中劑量組（330 mg/kg BW）、胡楊花序高劑量組（660 mg/kg BW）和空白對(duì)照組（生理鹽水灌胃）。

試劑及試劑盒：冰醋酸（分析純，純度＞99%）：上?；瘜W(xué)試劑公司；無(wú)水乙醇（純度＞99%）：洛陽(yáng)市化學(xué)試劑廠；生理鹽水（0.9%、0.86%）：江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司；雙蒸水實(shí)驗(yàn)室自制；超氧化物歧化酶（SOD）測(cè)試盒、丙二醛（MDA）測(cè)定試劑盒：南京建成生物工程研究所。

1.2 儀器與設(shè)備

DZF6050MBE型真空干燥箱：上海博迅實(shí)業(yè)有限公司；BS124S電子天平：北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司；SK3200H超聲波清洗機(jī)：上?？茖?dǎo)超聲儀器公司；DK-8D數(shù)顯恒溫水浴鍋：金壇市醫(yī)療儀器廠；T6新世紀(jì)紫外-可見分光光度計(jì)：北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；TGLL-18B臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)：江蘇太倉(cāng)醫(yī)療器械廠；FSH-2A型可調(diào)高速勻漿機(jī)：江蘇金元市醫(yī)療儀器廠。

1.3 方法

1.3.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

小鼠按性別隨機(jī)分為4組，每個(gè)試驗(yàn)組10只小鼠，雌雄各半，分別用低、中、高三個(gè)劑量組的胡楊花序乙醇提取物和空白對(duì)照組，給試驗(yàn)小鼠每日每只灌胃胡楊花序提取物一次，飼喂普通飼料，30d后處死，檢測(cè)小鼠血清中的SOD的活性以及肝組織中MDA的含量進(jìn)行分析測(cè)定，并比較各處理對(duì)小鼠血清中的SOD的活性以及肝組織中MDA的含量的影響。

1.3.2 試驗(yàn)方法

小白鼠的分組灌胃：小鼠按性別隨機(jī)分為4組，每個(gè)試驗(yàn)組10只小鼠，雌雄各半，分別用低、中、高三個(gè)劑量組的乙醇提取物和空白對(duì)照組，給試驗(yàn)小鼠每日每只灌胃胡楊花序一次，飼喂普通飼料，30 d后將小鼠摘眼球取血液，并制備肝組織勻漿，檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)。

SOD活力檢測(cè)：血清凝固后4 ℃，3 000 r/min離心10 min，輕取血清20 μL，按照SOD檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書操作，依次加入各種試劑，混勻，置37 ℃恒溫水浴鍋加熱40 min，加入顯色劑，混勻，室溫靜置10 min，于波長(zhǎng)550 nm處，1 cm光徑比色杯，蒸餾水調(diào)零，比色。測(cè)定測(cè)試管及對(duì)照管的吸光度（OD550nm）值。

取肝組織樣品4 μL，3 000 r/min離心10 min，按照SOD檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書操作，依次加入各種試劑，混勻，置37 ℃恒溫水浴鍋加熱40 min，加入顯色劑，混勻，室溫靜置10min，于波長(zhǎng)550 nm處，1 cm光徑比色杯，用蒸餾水調(diào)零，進(jìn)行比色。測(cè)定測(cè)試管及對(duì)照管的吸光度OD550nm值。

活力定義：每毫升反應(yīng)液中SOD（MDA）抑制率達(dá)到50%時(shí)所對(duì)應(yīng)的SOD（MDA）量為一個(gè)亞硝酸鹽單位，U。

SOD活力的計(jì)算：

血清中SOD含量=（對(duì)照管吸光度值-測(cè)定管吸光度值）×反應(yīng)體系的稀釋倍數(shù)/（對(duì)照管吸光度值×50%）

組織中SOD含量=（對(duì)照管吸光度值-測(cè)定管吸光度值）×反應(yīng)體系的稀釋倍數(shù)/（對(duì)照管吸光度值×50%×蛋白含量）

（SOD活力的表示單位：U/mg）

組織勻漿蛋白含量的測(cè)定：準(zhǔn)確稱取待測(cè)肝組織的重量，按體重體積比加生理鹽水制備成10%的組織勻漿，1 000 r/min～3 000 r/min離心10 min，然后取組織勻漿上清再用生理鹽水按1∶9稀釋成1%組織勻漿，待測(cè)。

取肝組織勻漿20 μL，按照考馬斯亮蘭蛋白測(cè)定試劑盒說(shuō)明書的要求，依次加入各種試劑，混勻，靜置10 min，于波長(zhǎng)595 nm處，1 cm光徑比色杯，用蒸餾水調(diào)零，進(jìn)行比色。測(cè)定各管的OD值。

MDA含量的檢測(cè)：血清中MDA含量的測(cè)定：取血清15 μL，按照丙二醛（MDA）測(cè)定試劑盒說(shuō)明書的要求，依次加入各種試劑，混勻器混勻，試管口用封口膜扎緊，用針頭刺一小孔，95 ℃水浴40 min，取出后流水冷卻，然后4 000 r/min離心10min，取上清液，于波長(zhǎng)532 nm處，1 cm光徑比色杯，用蒸餾水調(diào)零，進(jìn)行比色。測(cè)定各管的OD532nm值。

肝組織勻漿中MDA含量的測(cè)定：取肝組織勻漿20 μL，按照丙二醛（MDA）測(cè)定試劑盒說(shuō)明書的要求，依次加入各種試劑，混勻器混勻，試管口用封口膜扎緊，用針頭刺一小孔，95 ℃水浴40 min，取出后流水冷卻，然后4 000 r/min離心10 min，取上清液，于波長(zhǎng)532 nm處，1 cm光徑比色杯，用蒸餾水調(diào)零，進(jìn)行比色。測(cè)定各管的OD值[5-7]。

2 結(jié)果與分析

2.1 胡楊花序?qū)ρ逯谐趸锲缁福⊿OD）活性的影響

表1 胡楊花序?qū)ρ逯谐趸锲缁富钚缘挠绊慣able 1 Effect of P.euphratica inflorescence on SOD content in mice serum（mean±sd）

由表1可知，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組間血清SOD活力都有顯著差異（F=165，df=3，P＜0.05），中劑量組和高劑量組的血清SOD活力均顯著高于生理鹽水對(duì)照組，但3個(gè)實(shí)驗(yàn)組間的血清SOD活力沒有達(dá)到顯著差異。

2.2 胡楊花序?qū)ρ逯斜∕DA）含量的影響

表2 胡楊花序?qū)ρ逯斜┖康挠绊慣able 2 Effect of P.euphratica inflorescence on MDA content in mice serum（mean±sd）

由表2可知，實(shí)驗(yàn)組與生理鹽水對(duì)照組間血清中MDA含量都有顯著差異（F=137.37，df=3，P＜0.05，）中劑量組與高劑量組均顯著高于與低劑量組（P＜0.05）。

2.3 胡楊花序?qū)π∈蟾谓M織中SOD活性的影響

表3 胡楊花序?qū)π∈蟾谓M織中SOD活性的影響Table 3 Effect of P.euphratica inflorescence on SOD content in hepatic tissue of mice（mean±sd）

由表3可知，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組間肝臟中SOD活力都有顯著差異（F=304.25，df=3，P＜0.05），中劑量組和高劑量組的肝臟SOD活力均顯著高于生理鹽水對(duì)照組，但3個(gè)實(shí)驗(yàn)組間的肝臟SOD活力沒有達(dá)到顯著差異。

2.4 胡楊花序?qū)π∈蟾谓M織中MDA含量的影響

表4 胡楊花序?qū)π∈蟾谓M織中MDA 含量的影響Table 4 Effect of P.euphratica inflorescence on MDA content in hepatic tissue of mice（mean±sd）

由表4可知，實(shí)驗(yàn)組與生理鹽水對(duì)照組間肝臟中MDA含量都有顯著差異（F=129，df=3，P＜0.05，）中劑量組與高劑量組均顯著高于與低劑量組，但這3個(gè)實(shí)驗(yàn)組肝組織MDA含量均顯著低于生理鹽水對(duì)照組。

3 結(jié)論

胡楊花序提取物可以顯著增加血清及肝組織蛋白含量，降低血清及組織MDA含量，提高小鼠的血清、肝組織SOD活力，提高老齡小鼠體內(nèi)抗氧化能力。

胡楊花序?qū)偬烊恢参?，提取物提取過程中環(huán)保無(wú)污染，無(wú)細(xì)胞毒性及其他副作用，因此對(duì)其進(jìn)行研究和將其開發(fā)成天然抗氧化劑或自由基清除劑對(duì)保障機(jī)體健康、預(yù)防疾病有重要意義。

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