閆兆吉1 劉婷婷2 張惠3 劉奇4

（1吉林省吉林市永吉縣畜牧業(yè)管理局岔路河畜牧獸醫(yī)站，吉林吉林 132200；2吉林省吉林市永吉縣畜牧業(yè)管理局疫控中心，吉林吉林 132200；3吉林省吉林市永吉縣畜牧業(yè)管理局畜產(chǎn)品質(zhì)量安全中心，吉林吉林 132200；4吉林省吉林市永吉縣黃榆鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)站，吉林吉林 132200）

豬流行性腹瀉、豬傳染性胃腸炎和輪狀病毒混合感染的診斷實例

閆兆吉1 劉婷婷2 張惠3 劉奇4

（1吉林省吉林市永吉縣畜牧業(yè)管理局岔路河畜牧獸醫(yī)站，吉林吉林 132200；2吉林省吉林市永吉縣畜牧業(yè)管理局疫控中心，吉林吉林 132200；3吉林省吉林市永吉縣畜牧業(yè)管理局畜產(chǎn)品質(zhì)量安全中心，吉林吉林 132200；4吉林省吉林市永吉縣黃榆鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)站，吉林吉林 132200）

目前，豬場病毒性腹瀉混合感染的現(xiàn)象普遍存在，給我國養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大損失。2014年2月吉林省某規(guī)模化豬場的豬群發(fā)生以仔豬發(fā)病初期嘔吐、排灰色水樣稀便、惡臭，大豬腹瀉為主要特征的傳染病，根據(jù)發(fā)病情況、臨床癥狀、剖檢變化并結(jié)合實驗室診斷方法進行綜合診斷，最終結(jié)果顯示，導(dǎo)致該豬場大規(guī)模發(fā)病并死亡的主要病原包括豬流行性腹瀉病毒、豬傳染性胃腸炎病毒和豬輪狀病毒，是典型的混合感染導(dǎo)致大規(guī)模發(fā)病的案例。

豬流行性腹瀉；豬傳染性胃腸炎；輪狀病毒；混合感染

豬流行性腹瀉（Porcine epidemic diarrhea,PED），是由豬流行性腹瀉病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）引起的豬的一種急性、高傳染性的腸道疾病。該病以急性腸炎、嘔吐、水樣腹瀉和脫水為主要特征[1]。

豬傳染性胃腸炎（Transmissible gastroenteritis of swine,TGE），又稱幼豬的胃腸炎，是一種高度接觸傳染性，以嘔吐、嚴重腹瀉、脫水、2周齡以內(nèi)仔豬高死亡率為特征的病毒性傳染病[2]。

豬輪狀病毒病是由輪狀病毒（Rotavirus,RV）引起的一種急性腸道傳染病，仔豬高發(fā)，大豬多呈隱性感染，多發(fā)于晚秋、冬季和早春季節(jié)[3]。

以上三種豬病毒性腹瀉疾病都嚴重影響了我國養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展，目前豬場混合感染嚴重，主要表現(xiàn)為病毒與細菌之間、不同病毒之間的混合感染，一般發(fā)生病毒性腹瀉疾病的豬場，其混合感染率都在50%以上。豬病毒性腹瀉疾病的共同特點是水樣腹瀉和嘔吐，PED和TGE可見于各種日齡的豬，而RV主要發(fā)生于哺乳仔豬，成年豬多呈隱性感染。病毒性腹瀉的發(fā)病急，傳播快，一周齡以內(nèi)的仔豬出現(xiàn)癥狀后2～7天內(nèi)死亡，死亡率可高達100%，育成豬經(jīng)3～7天腹瀉后，可逐漸康復(fù)，但可能形成僵豬[4-6]。2014年2月，吉林省某規(guī)?；i場的豬群出現(xiàn)灰色水樣腹瀉，部分仔豬有嘔吐現(xiàn)象發(fā)生，本研究根據(jù)臨床癥狀并結(jié)合實驗室檢測對該疫情進行綜合診斷。

1 臨床癥狀及剖檢病變

2014年2月，吉林省某規(guī)?；i場1周齡以內(nèi)的仔豬突然發(fā)病，病情擴散很快，發(fā)病豬只迅速擴增至200頭，并呈現(xiàn)繼續(xù)傳染態(tài)勢。其中1～5日齡內(nèi)的仔豬感染率最高，癥狀最為嚴重，病死率也最高。病豬體溫正常或稍微升高，精神沉郁，食欲降低，日齡較大的豬癥狀較輕，日齡較小的豬癥狀較重。仔豬發(fā)病初期發(fā)生嘔吐，排灰色水樣稀便，惡臭。

剖檢病死豬，可見小腸腸管脹滿，充滿黃色內(nèi)容物，腸壁變薄，腸系膜呈樹枝狀充血，腸系膜淋巴結(jié)水腫。

2 實驗室診斷

2.1 材料及方法

病毒DNA/RNA抽提試劑盒、RT-PCR一步法試劑盒和ExTaq DNA聚合酶，均購自TAKARA公司；豬輪狀病毒膠體金試劑盒，購自韓國安捷動物診斷試劑有限公司；所用各種引物均為本實驗室設(shè)計合成。

2.2 病毒核酸檢測

將發(fā)病豬的腸內(nèi)容物處理后，利用TAKARA MiniBEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver 5.0試劑盒進行病毒DNA和RNA的抽提，采用PCR和RT-PCR方法對PEDV、TGEV、PRV（豬偽狂犬病毒）、CSFV（豬瘟病毒）進行檢測。

2.3 豬輪狀病毒檢測

取0.5 mL稀釋液加入試管中，加適量糞便標本到試管中，使?jié)舛冗_到5%～10%，充分混合均勻后，用滴管取2～3滴加入膠體金檢測卡的樣品孔，5～10分鐘判讀結(jié)果。

3 結(jié)果

3.1 病毒核酸檢測結(jié)果

以提取的病毒DNA或RNA及PEDV、TGEV、PRV和CSFV特異性檢測引物進行PCR或RT-PCR反應(yīng)[7]，結(jié)果顯示，1、3和4號樣品PEDV檢測結(jié)果為陽性，RT-PCR擴增出750 bp左右的陽性條帶（圖1a），TGEV的RT-PCR擴增出480 bp左右的陽性條帶（圖1b），均與預(yù)期片段大小相符；而PRV、CSFV的PCR檢測均無陽性條帶出現(xiàn)（圖1c、1d），基于以上結(jié)果，初步確定豬群感染了PEDV和TGEV兩種病毒。

圖1 發(fā)病豬腸內(nèi)容物的實驗室檢測結(jié)果

3.2 輪狀病毒膠體金檢測結(jié)果

檢測結(jié)果顯示，4號樣品在T線顯色，表明豬輪狀病毒抗原陽性，提示豬場中已經(jīng)有豬只感染豬輪狀病毒（圖2）。

圖2 豬輪狀病毒膠體金檢測結(jié)果

4 討論

分子生物學(xué)診斷技術(shù)的應(yīng)用，為疫病的快速確診提供了捷徑，尤其是PCR方法的應(yīng)用[8]，是現(xiàn)如今最簡單、最便捷的分子生物學(xué)診斷方法。本次疫情就是在結(jié)合發(fā)病情況、臨床癥狀、剖檢病變的基礎(chǔ)上，根據(jù)實驗室PCR診斷結(jié)果，確診本次疫情為豬流行性腹瀉、豬傳染性胃腸炎及豬輪狀病毒病的混合感染。

近年來，由于多種原因，集約化豬場腹瀉疫情屢見不鮮，主要以PEDV和TGEV的混合感染為主，少數(shù)混合豬輪狀病毒病的感染。由于造成豬腹瀉的病毒及細菌多樣，且臨床癥狀又有一定的相似性，這給臨床病原學(xué)的確診和防治增加了一定的難度，并影響著我國現(xiàn)代養(yǎng)豬業(yè)健康快速發(fā)展。2010年至今，豬病毒性腹瀉在我國的流行與暴發(fā)日益增多，其綜合防治的好壞直接影響到養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，因此正確認識我國豬病毒性腹瀉的流行現(xiàn)狀與預(yù)防控制方法，建立行之有效的綜合防控措施，對提高我國養(yǎng)豬業(yè)水平、增加經(jīng)濟效益意義重大[8]。

目前，對于豬病毒性腹瀉的臨床鑒別診斷較為困難，所以采取合理的監(jiān)控措施及免疫程序，采取一定的綜合防治措施，加強衛(wèi)生和飼養(yǎng)管理，嚴格控制引種和“全進全出”，同時定期進行病原及抗體水平監(jiān)測，提高豬群對疫病的抵抗力是目前控制病毒性腹瀉的有效方法。

[1]孫東波,馮力,陳建飛,等.豬流行性腹瀉病毒分子生物學(xué)研究進展[J].動物醫(yī)學(xué)進展,2006,27(10):11-14.

[2]王海艷.豬傳染性胃腸炎的防治[J].養(yǎng)殖技術(shù)顧問,2013(9): 83.

[3]李邵青.豬輪狀病毒的鑒別診斷技術(shù)[J].畜牧與飼料科學(xué), 2009(2):189-190.

[4]殷震,劉景華.動物病毒學(xué)[M].第二版.北京:科學(xué)出版社, 1997:688-690.

[5]趙德明,張仲秋,沈建忠,譯.豬病學(xué)[M].第九版.北京:中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社,2009:769-782.

[6]張坤,何啟蓋.豬流行性腹瀉、豬傳染性胃腸炎和豬A群輪狀病毒多PCR檢測方法的建立及臨床應(yīng)用[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報,2010(8): 1001-1005.

[7]劉巖,董麗娜,胡桂學(xué),等.豬傳染性胃腸炎和豬流行性腹瀉疫苗研究進展[J].中國獸藥雜志,2007,41(2):40-45.

[8]陳建飛,劉孝珍,時洪艷,等.2010-2011仔豬腹瀉的病因分析和防控措施[J].養(yǎng)豬,2011(5):81-83.

S858.28

B

1673-4645(2014)12-0049-03

2014-08-08

閆兆吉，男，吉林人，吉林省吉林市永吉縣長橋子公路動物衛(wèi)生監(jiān)督檢查站站長