王禮偉 夏小偉 屈勇剛* 王葦 楊亞?wèn)| 楊一鳴 梁晏 楊蓓

（1石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，新疆石河子 832003；2新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)第八師石河子總場(chǎng)北泉鎮(zhèn)獸醫(yī)站，新疆石河子 832011；3新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)第八師石河子疾病預(yù)防控制中心，新疆石河子 832000）

新疆石河子地區(qū)豬場(chǎng)呼吸與繁殖障礙綜合征免疫抗體水平檢測(cè)與分析

王禮偉1夏小偉2屈勇剛1*王葦1楊亞?wèn)|1楊一鳴1梁晏3楊蓓1

（1石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，新疆石河子 832003；2新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)第八師石河子總場(chǎng)北泉鎮(zhèn)獸醫(yī)站，新疆石河子 832011；3新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)第八師石河子疾病預(yù)防控制中心，新疆石河子 832000）

為了解新疆石河子地區(qū)豬呼吸與繁殖障礙綜合征（PRRS）免疫抗體水平及其消長(zhǎng)的規(guī)律，采集周邊不同地區(qū)13個(gè)豬場(chǎng)共726份血清，采用間接ELISA方法檢測(cè)PRRS免疫抗體水平并進(jìn)行分析。結(jié)果顯示，該地區(qū)PRRS免疫抗體陽(yáng)性率平均為87.33%，免疫抗體陽(yáng)性率超過(guò)80%的豬場(chǎng)占全部豬場(chǎng)的76.92%，同時(shí)，母豬、種公豬、育肥豬免疫抗體的整體水平均超過(guò)85%，而仔豬的免疫抗體水平較低，僅為71.11%。結(jié)果表明當(dāng)?shù)貞?yīng)用的PRRS疫苗的免疫原性較好，免疫效果確實(shí)；仔豬免疫抗體水平較低的具體原因尚不清楚。該結(jié)果可為進(jìn)一步了解石河子周邊地區(qū)豬場(chǎng)PRRS免疫抗體的現(xiàn)狀，制定合理的治療措施和免疫程序提供參考。

豬呼吸與繁殖障礙綜合征；抗體水平；ELISA；陽(yáng)性率

豬繁殖與呼吸障礙綜合征（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS），又稱豬藍(lán)耳病，是由PRRS病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV）所引起的一種高度接觸性傳染病，主要以母豬的繁殖障礙和各年齡段仔豬的呼吸道疾病為主要特征。1990年，該病相繼在德國(guó)、荷蘭、西班牙等地暴發(fā)流行。1992年國(guó)際獸醫(yī)局（OIE）將其列為B類疫病，也是我國(guó)規(guī)定的二類動(dòng)物疫病。1993年在我國(guó)部分地區(qū)暴發(fā)流行，隨后中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所從病豬體內(nèi)分離到該病毒，確定了豬繁殖與呼吸障礙綜合征在我國(guó)的存在[1]。由于該病的傳染性強(qiáng)、傳播迅速、危害廣泛，給我國(guó)的畜牧業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失[2]。

宋剛?cè)A等[3]對(duì)新疆庫(kù)車縣部分豬場(chǎng)藍(lán)耳病的血清抗體調(diào)查研究表明，庫(kù)車縣全縣的藍(lán)耳病血清抗體陽(yáng)性合格率僅為74.4%，存在一定的隱患。為進(jìn)一步了解石河子地區(qū)藍(lán)耳病免疫抗體水平的現(xiàn)狀，采集石河子周邊不同地區(qū)豬場(chǎng)、不同類別豬群的血樣，通過(guò)間接ELISA檢測(cè)方法檢測(cè)PRRS免疫抗體水平并進(jìn)行分析，可為豬場(chǎng)制定合理有效的治療措施及免疫程序提供參考。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 樣品來(lái)源

2013年10月至2014年1月期間，采集石河子周邊13個(gè)豬場(chǎng)（母豬存欄量在400頭及以上的2個(gè)、100～400頭的豬場(chǎng)7個(gè)、100頭以下的4個(gè)）不同類別的豬血清共726份。其中，母豬血清254份、種公豬血清110份、仔豬血清135份、保育豬血清227份（根據(jù)豬場(chǎng)豬群的實(shí)際數(shù)量，按照接近10%的比例進(jìn)行采集）。根據(jù)豬群的日齡不同，進(jìn)行前腔或耳緣靜脈采血，每頭豬采集血液2～5 mL，室溫靜置30～60分鐘。待血清析出以后，吸取1 mL血清于1.5 mL EP管中，如果血液凝固不良，可以4000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘，收集上清液。收集的血清應(yīng)清亮、無(wú)溶血現(xiàn)象。將盛有血清的EP管放置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩２杉臉悠肪幪?hào)要與豬的耳號(hào)對(duì)應(yīng)，以便于后期有針對(duì)性地提供合理有效的治療措施。

1.1.2 材料和儀器

豬繁殖與呼吸綜合征病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒（武漢科前生物制品有限責(zé)任公司，批號(hào)：130911）、獸用一次性采血盛血器5 mL(浙江民生醫(yī)藥器材有限公司)、8道微量移液槍（美國(guó)GILSON公司）、自動(dòng)酶標(biāo)儀（美國(guó)BioTek公司）、恒溫培養(yǎng)箱（天津東泥沽設(shè)備儀器廠）、平板震蕩儀、1.5 mL EP管及一次性槍頭若干。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 間接ELISA方法

根據(jù)試劑盒的操作步驟，對(duì)待檢血清進(jìn)行一定倍比稀釋，同時(shí)洗滌抗原包被板。將稀釋好的血清按照對(duì)應(yīng)的量加入到洗滌好的抗原包被板中，同時(shí)設(shè)定陰陽(yáng)對(duì)照組，均勻震蕩后，置于37℃溫浴30分鐘。然后棄去抗原包被板中的液體，對(duì)抗原包被板進(jìn)行洗滌。再在每孔中加入羊抗豬酶標(biāo)二抗，置于37℃溫浴30分鐘，隨后棄掉廢液，再次洗滌。將洗滌好的抗原包被板每孔加入底物A、底物B，混勻，室溫避光顯色10分鐘。最后，每孔加入終止液。在10分鐘內(nèi)，用酶標(biāo)儀在630 nm波長(zhǎng)下對(duì)樣品的OD值進(jìn)行測(cè)定，根據(jù)OD值的大小，判定樣品血清抗體的水平。

1.2.2 結(jié)果判定

試驗(yàn)成立的條件是陽(yáng)性對(duì)照孔OD值的均值≥0.7，陰性對(duì)照孔OD值的均值＜0.3。

根據(jù)酶標(biāo)儀測(cè)定OD值的大小，利用office軟件進(jìn)行KQ值的計(jì)算。KQ值=樣品OD值×100/陽(yáng)性對(duì)照平均值。若KQ值≥20，判定為豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體陽(yáng)性；若KQ值＜20，判定為豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體陰性。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)分析

利用office軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)并分析。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 各個(gè)豬場(chǎng)PRRS免疫抗體水平ELISA檢測(cè)結(jié)果

2.3 兩組不良反應(yīng)發(fā)生率比較 A組患兒中出現(xiàn)了腹瀉8例，皮疹7例，不良反應(yīng)發(fā)生率為30.00%，B組患兒中出現(xiàn)了皮疹、腹瀉各1例，不良反應(yīng)發(fā)生率為4.00%。B組患兒的不良反應(yīng)發(fā)生率顯著低于A組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=11.970，P<0.05)。

由表1可知，A～M這13個(gè)豬場(chǎng)之間的免疫抗體水平存在較大的差異，豬場(chǎng)免疫抗體陽(yáng)性率最高的可達(dá)到100%，最低的為55.00%，免疫抗體陽(yáng)性率達(dá)到80%以上的有10個(gè)豬場(chǎng)，占全部豬場(chǎng)的76.92%。初步統(tǒng)計(jì)，石河子周邊地區(qū)豬場(chǎng)PRRS免疫抗體陽(yáng)性率平均為87.33%，樣品KQ值均值為56.64。由抗體水平的變異系數(shù)可知各個(gè)豬場(chǎng)PRRS免疫抗體水平的離散程度，13個(gè)豬場(chǎng)PRRS抗體水平的變異系數(shù)范圍在0.15～0.84，數(shù)據(jù)整體比較平穩(wěn)。

表1 13個(gè)豬場(chǎng)PRRS免疫抗體水平ELISA檢測(cè)結(jié)果

2.2 各個(gè)類別豬群PRRS免疫抗體水平ELISA檢測(cè)結(jié)果

由表2可知，不同豬群之間的免疫抗體水平也存在較大的差異，母豬的免疫抗體水平最高，達(dá)到94.88%，其次為種公豬的88.18%，育肥豬的88.11%，三者免疫抗體的整體水平均超過(guò)85%，而仔豬的免疫抗體水平最低，僅為71.11%。

3 分析與討論

3.1 豬群免疫抗體陽(yáng)性率整體較高

對(duì)石河子周邊地區(qū)13個(gè)豬場(chǎng)血清中PRRS抗體水平的檢測(cè)結(jié)果表明，PRRS免疫抗體陽(yáng)性率整體較高，最高的豬場(chǎng)陽(yáng)性率已達(dá)到100%，最低的豬場(chǎng)陽(yáng)性率也達(dá)到了72.09%，說(shuō)明目前應(yīng)用的PRRS疫苗的免疫原性較好，免疫抗體產(chǎn)生迅速、高效，達(dá)到了豬場(chǎng)免疫預(yù)防的目的，抗體的平均水平均達(dá)到了農(nóng)業(yè)部《2012年國(guó)家動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫計(jì)劃》規(guī)定的抗體合格率在70%以上的要求[4]。同時(shí)，與王偉丞等[5]對(duì)貴州部分豬場(chǎng)免疫豬群中PRRS血清抗體水平的檢測(cè)結(jié)果相比，本研究結(jié)果中石河子地區(qū)PRRS血清抗體水平整體偏高，表明該地區(qū)PRRS的免疫程序整體良好。但是，也有部分豬場(chǎng)的抗體水平低于80%，應(yīng)當(dāng)引起高度重視。鑒于該病的高度傳染性，從業(yè)人員應(yīng)加強(qiáng)控制力度，制定治療措施及調(diào)整免疫程序。

3.2 不同類別豬群抗體陽(yáng)性率存在較大差異

表2 3類豬群PRRS免疫抗體水平ELISA檢測(cè)結(jié)果

3.3 科學(xué)合理使用疫苗

疫苗免疫是豬場(chǎng)疾病防治的重要途徑之一，目前，國(guó)內(nèi)外已經(jīng)研制出弱毒苗和滅活苗。弱毒苗的臨床應(yīng)用效果更佳，但是弱毒苗存在著一定的散毒和返祖現(xiàn)象，因此，從業(yè)人員應(yīng)當(dāng)根據(jù)自己豬場(chǎng)的實(shí)際情況選擇疫苗，切忌盲目跟風(fēng)[6]。通過(guò)對(duì)石河子周邊地區(qū)豬場(chǎng)免疫抗體水平的分析，一些抗體水平較低的豬場(chǎng)，我們應(yīng)當(dāng)加強(qiáng)疫苗免疫；針對(duì)仔豬抗體水平低下的情況，我們可以通過(guò)提高母源抗體水平來(lái)保護(hù)剛出生的仔豬，在仔豬母源抗體消失前進(jìn)行首免，母源抗體消失后進(jìn)行二免；對(duì)種公豬和妊娠母豬，應(yīng)慎重使用弱毒苗。

盡管該地區(qū)PRRS免疫抗體水平整體較好，但仍有一些規(guī)模豬場(chǎng)的抗體水平并不理想。因此需要提高豬場(chǎng)的管理水平和疾病的防范意識(shí)，做到防微杜漸，從源頭上杜絕疫病的入侵。

[1] 謝英,單天錫.豬繁殖與呼吸綜合征研究進(jìn)展[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志,2001,37(1):29-32．

[2] 權(quán)中會(huì),陰明亮,權(quán)鳳英,等.我國(guó)豬繁殖障礙性疾病的流行狀況和綜合防制[J].畜禽業(yè),2003(4):7-9．

[3] 宋剛?cè)A,陳創(chuàng)夫.新疆庫(kù)車縣豬繁殖障礙性疾病血清學(xué)調(diào)查與分析[J].當(dāng)代畜牧,2013(8):83-86．

[4] 劉志勇,韓慶安,劉乃強(qiáng),等.規(guī)模養(yǎng)豬場(chǎng)主要疫病免疫效果評(píng)估模型建立[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志,2011(7):88-90．

[5] 王偉丞,曾智勇,劉志杰.貴州省幾種豬繁殖障礙性疫病抗體水平檢測(cè)[J].貴州農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2013,41(5):118-120．

[6] 馬興樹,朱美霞,韓改英,等.冀南地區(qū)3種豬病毒血清抗體的檢測(cè)與分析[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī),2011,38(1):204-205．

S858.28

A

1673-4645(2014)06-0046-03

2014-04-24

王禮偉（1989-），男，江蘇淮安人，碩士研究生，主要從事動(dòng)物傳染病診斷與防治工作

*通訊作者：屈勇剛（1971-），男，陜西人，副教授，主要從事重要人獸共患病致病機(jī)理研究，E-mail:quyonggang@shzu.edu.cn