曹志彬王元天薛 蔚鄭貫忠黃旭元黃翼然**

1. 嘉定區(qū)中心醫(yī)院泌尿外科（上海 201800）; 2. 上海交通大學醫(yī)學院附屬仁濟醫(yī)院

慢性前列腺炎患者前列腺液中IILL
--1177的表達及與TNF-α、IL-8、IL-6、IILL--1100相關(guān)性分析*

曹志彬1王元天2薛 蔚2鄭貫忠1黃旭元2黃翼然2**

1. 嘉定區(qū)中心醫(yī)院泌尿外科（上海 201800）; 2. 上海交通大學醫(yī)學院附屬仁濟醫(yī)院

目的通過測定并對比不同類型慢性前列腺炎（CP）患者前列腺液（EPS）中IL-17、TNF-α、IL-8、IL-6、IL-10的含量并分析其相關(guān)性，了解IL-17在CP中的作用及與其他細胞因子的關(guān)系。方法通過尿常規(guī)、EPS常規(guī)檢查、兩杯法尿液細菌培養(yǎng)和美國國立衛(wèi)生研究院慢性前列腺炎癥狀評分指數(shù)（NIH-CPSI），將110例CP患者按NIH前列腺炎診斷標準進行分型。采用雙抗體夾心ELISA法檢測患者及30例正常對照組EPS中的IL-17、TNF-α、IL-8、IL-6、IL-10含量。用SPSS for Windows 12.0統(tǒng)計軟件對測量數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。結(jié)果Ⅱ型、Ⅲ-a型和Ⅲ-b型CP患者EPS中IL-17水平升高，與對照組差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；Ⅱ型和Ⅲ-a型IL-17水平無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）；但兩者與Ⅲ-b型IL-17水平存在統(tǒng)計學差異（P＜0.05）。IL-17水平與NIH-CPSI評分呈正相關(guān)（r =0.462，P＜0.05）。IL-17與IL-10存在正相關(guān)（r =0.289，P＜0.05）。IL-17與IL-6存在正相關(guān)（r =0.26，P＜0.05）。結(jié)論CP患者EPS中IL-17表達變化提示它參與了前列腺的炎癥反應。IL-17不僅是評價CP嚴重程度的一項指標，也是潛在的治療CP新的突破口。

T淋巴細胞亞群; 白細胞介素17; 前列腺炎; 細胞因子

Key woorrddssT-Lymphocyte Subsets; Interleukin-17; prostatitis; cytokine

慢性前列腺炎（chronic prostatitis, CP）是男科臨床中最常見的難治性疾病之一，大多病因不清,發(fā)病機制不明。近年來，對CP的研究已深入到細胞因子水平。前列腺液（EPS）中的細胞因子TNF-α、IL-8、IL-6、IL-10在CP中的作用已有報道[1,2]。最近，TH17細胞的發(fā)現(xiàn)將CD4+T細胞亞群更新為三類—TH1、TH2和TH17細胞。TH17細胞以其分泌白介素-17（interleukin-17，IL-17）而得名。已知IL-17在宿主防御、自身免疫性疾病發(fā)病以及腫瘤中發(fā)揮重要的作用，相關(guān)研究已漸成為醫(yī)學及免疫學研究的熱點[3-5]。本研究試圖通過測定并對比不同類型CP患者和正常人EPS中IL-17、TNF-α、IL-8、IL-6、IL-10的含量并分析其相關(guān)性，了解IL-17在CP中的作用。加深對CP的認識，為CP的診斷、治療提供參考。

材料與方法

一、臨床資料

收集2010年9月至2012年9月在我院泌尿外科及男科門診就診的有明顯CP癥狀、符合美國國立衛(wèi)生研究院（NIH）前列腺炎診斷標準的110例患者的EPS作為研究對象。患者年齡在18～58歲，平均30.6歲。研究對象按NIH有關(guān)前列腺炎分類標準分為3組：（1）Ⅱ型CP組（慢性細菌性前列腺炎）34例；（2）Ⅲ-a型組（炎癥性慢性骨盆疼痛綜合征）36例；（3）Ⅲ-b型組（非炎癥性慢性骨盆疼痛綜合征）40例。另外，選取門診以健康查體檢或婚前體檢、無任何臨床癥狀的30人作為對照組，年齡在21～38歲，平均27.4歲，體格檢查、EPS常規(guī)、尿常規(guī)以及按摩前后尿細菌培養(yǎng)均無異常。

二、方法與步驟

（一）病史詢問及癥狀評分

所有的患者均詳細詢問病史，包括藥物服用史及性生活情況，均進行美國國立衛(wèi)生研究院慢性前列腺炎癥狀評分指數(shù)（NIH-CPSI）統(tǒng)計，并排除可能引起類似癥狀的其他相關(guān)疾病，如尿道炎、附睪炎以及精索靜脈曲張、直腸及肛周病變等。

（二）標本的收集及保存

研究對象及對照組均要求禁欲3～5d，取標本前清洗消毒陰莖頭及尿道外口，分別取前列腺按摩前后尿液行尿常規(guī)及尿細菌培養(yǎng)檢查。取前列腺液時囑患者胸膝位，行前列腺肛診檢查并按摩出前列腺液，將開始流出的EPS收集于1.5ml離心管中，2h內(nèi)送-20℃冰凍保存、待檢。尿道口剩余的一滴EPS滴于載玻片上行EPS常規(guī)鏡檢，高倍鏡下（×400）觀察5個視野并計算白細胞平均計數(shù)。

（三）EPS中的細胞因子檢測

用購自上海易利生物科技有限公司的酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，靈敏度為30pg/ml，采用雙抗體夾心ELISA法檢測EPS中IL-17、TNF-α、IL-8、IL-6、IL-10的含量。

（四）統(tǒng)計方法

數(shù)據(jù)應用SPSS for Windows 12.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析，應用單因素方差分析各組之間年齡、白細胞計數(shù)、NIH-CPSI評分、IL-17、TNF-α、IL-8、IL-6、IL-10之間水平差異，若方差不齊，則采用非參數(shù)檢驗比較各組水平差異。應用Pearson相關(guān)性分析方法分析IL-17、TNF-α、IL-8、IL-4、IL-10、EPS白細胞計數(shù)、NIH-CPSI評分之間的相關(guān)性。P＜0.05認為差異有統(tǒng)計學意義。

結(jié) 果

一、EEPPSS鏡檢結(jié)果

1. Ⅱ型CP組EPS鏡檢白細胞≥10個/HP，卵磷脂小體≤++，前列腺按摩前中段尿細菌培養(yǎng)及鏡檢均為陰性，按摩后初段尿細菌培養(yǎng)陽性，其中大腸桿菌14例，表皮葡萄球菌8例，金黃色葡萄球菌5例，變形桿菌6例，淋球菌1例。

2. Ⅲ-a型組按摩前、后尿液細菌培養(yǎng)均為陰性，EPS鏡檢白細胞≥10個/HP，卵磷脂小體≤++，細菌培養(yǎng)陰性。

3. Ⅲ-b型組前列腺按摩前、后尿液細菌培養(yǎng)均為陰性，EPS鏡檢白細胞數(shù)≤10個/HP，卵磷脂小體≤++～+++。

Ⅲ-b型組患者EPS中白細胞計數(shù)較對照組高，存在統(tǒng)計學差異（P＜0.05）；Ⅱ型組與Ⅲ-a型組患者EPS中白細胞計數(shù)均明顯高于對照組和Ⅲ-b型組，差異均具統(tǒng)計學意義（P＜0.05），但這兩組白細胞計數(shù)差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

二、NIH--CCPPSSII癥狀評分

CP各組間NIH-CPSI癥狀評分差異無統(tǒng)計學意義，見表1。Ⅲ-b型組患者排尿癥狀評分較高，但并未與另外兩組CP患者出現(xiàn)統(tǒng)計學差異，可能與病例數(shù)目較少有關(guān)。

表1 各組CP患者及對照組NIH--CPSI癥狀評分(±s）

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三、EEPPSS中各細胞因子含量及其相關(guān)性

（一）EPS中各細胞因子的含量

表2 各組CP患者及對照組EPS中細胞因子的含量（pg/ml）（s）

表2 各組CP患者及對照組EPS中細胞因子的含量（pg/ml）（s）

與對照組比較,*為P＜0.01,**為P＜0.05; 與Ⅲ-b型組比較,△為P＜0.01,△△為P＜0.05

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由表2可見CP各組和對照組EPS中細胞因子含量。

1. IL-17：Ⅱ型、Ⅲ-a型和Ⅲ-b型患者EPS中IL-17水平升高，與對照組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01)。Ⅱ型和Ⅲ-a型IL-17水平無統(tǒng)計學差異（P＞0.05），但兩者與Ⅲ-b型IL-17水平存在統(tǒng)計學差異（P＜0.05）。IL-17水平與NIHCPSI呈正相關(guān)（r =0.462，P＜0.05）。

2. TNF-α：Ⅱ型和Ⅲ-a型患者EPS中TNF-α水平明顯高于Ⅲ-b型和對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；而Ⅱ型和Ⅲ-a型組間比較及Ⅲ-b型與對照組之間比較，EPS中TNF-α水平差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

3. IL-8：Ⅱ型、Ш-a型CP患者前列腺液中IL-8水平明顯高于對照組和Ш-b型CP患者，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。

4. IL-6：Ⅱ型、Ⅲ-a型和Ⅲ-b型患者EPS中IL-6水平升高，與對照組差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），但三組患者間EPS中IL-6水平無統(tǒng)計學差義（P＞0.05）。

5. IL-10：Ⅱ型和Ⅲ-a型患者EPS中IL-10水平與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），但Ⅱ型和Ⅲ-a型組間及Ⅲ-b型與對照組之間EPS中的IL-10含量差異無統(tǒng)計學意義。EPS中l(wèi)L-10水平和患者NIH-CPSI疼痛癥狀評分之間呈正相關(guān)性（r =0.549，P＜0.01）。

（二）各細胞因子之間的相關(guān)性

CP患者EPS中l(wèi)L-10水平和患者NIH-CPSI疼痛癥狀評分之間呈正相關(guān)性（r =0.549，P＜0.01）。細胞因子相關(guān)性分析顯示，lL-10與TNF-α之間存在正相關(guān)（r =0.26，P＜0.05）。IL-17與IL-10存在正相關(guān)（r =0.289，P＜0.05）。IL-17與IL-6存在正相關(guān)（r =0.26，P＜0.05）。

討 論

TH17細胞是近年來新發(fā)現(xiàn)的一類CD4+T細胞，主要通過IL-17發(fā)揮生物學效應[6]。

本研究發(fā)現(xiàn)IL-17水平與NIH-CPSI評分呈正相關(guān)（r=0.462，P＜0.05）。有資料表明IL-17能夠誘導IL-6、IL-1β、TNF-α等細胞因子產(chǎn)生；特別是IL-6，能夠通過正反饋進一步促進TH17細胞分化。神經(jīng)生長因子（NGF）與疼痛的嚴重程度相關(guān)，IL-6、IL-8在炎癥過程中引導IL-10的表達，IL-10的表達增高導致NGF表達增高，引起會陰區(qū)疼痛不適[7]。本研究也發(fā)現(xiàn)IL-10與CP患者的疼痛癥狀評分呈正相關(guān)（r =0.549，P＜0.01），提示檢測患者IL-10的濃度可能成為一個判斷CP療效的指標，且針對IL-10的細胞因子阻斷治療也許能改善患者的疼痛癥狀[7]。

本研究顯示IL-17、TNF-α、IL-8、IL-10、IL-6在Ⅱ型、Ⅲ-a型CP患者EPS中的表達，差異無統(tǒng)計學意義，推測Ⅱ型、Ⅲ-a型CP的病理改變和炎癥反應可能相同，病因發(fā)病機制可能相似。事實上，部分診斷為Ⅲ-a型CP患者的發(fā)病可能與目前常規(guī)方法未能培養(yǎng)出或尚未被認識的微生物感染有關(guān)，對CP患者EPS和前列腺按摩后初始尿液中的內(nèi)毒素水平測定或EPS中革藍氏陰性菌16SrRNA的PCR的方法檢測的研究結(jié)果也證實這一點[8]。臨床上使用抗生素可使約40%的Ⅲ-a型CP患者癥狀得到緩解，間接說明感染在Ⅲ-a型CP發(fā)病中的作用。

Ⅲ-b型CP患者與對照組EPS中TNF-α、IL-8、IL-10水平差異無統(tǒng)計學意義，但與Ⅱ型、Ⅲ-a型CP患者差別有統(tǒng)計學意義，推測Ⅲ-a型、Ⅲ-b型CP可能是兩種不同發(fā)病機制的疾病。Ⅲ-b型CP的前列腺的本身病變可能較小，相關(guān)癥狀可能主要是由于圍繞膀胱頸部和前列腺尿道的肌肉張力增高或協(xié)調(diào)失調(diào)，精神異常及心里緊張引起自主神經(jīng)功能紊亂，導致α-腎上腺素受體興奮性升高，引起或加重膀胱及后尿道神經(jīng)肌肉功能障礙，使排尿時前列腺部尿道壓力增大，產(chǎn)生排尿異常、會陰部疼痛不適等癥狀，這些癥狀反過來又會加重患者的情緒反應，造成惡性循環(huán)。臨床上使用α-腎上腺素受體阻滯劑、鎮(zhèn)靜劑或抗焦慮藥物來治療Ⅲ-b型CP，患者獲得了良好的療效，進一步說明精神心理因素、盆腔神經(jīng)肌肉功能失調(diào)在Ⅲ-b型CP的病因中的作用[2,9]。本研究結(jié)果中Ⅲ-b型患者排尿癥狀評分較高進一步說明了這一點。

實驗表明，通過可溶性IL-17R及特異性抑制劑阻斷內(nèi)源性IL-17的作用，可以減輕自身免疫、膠原或佐劑誘發(fā)關(guān)節(jié)炎的關(guān)節(jié)損傷程度，降低類風濕性關(guān)節(jié)炎滑膜及骨組織IL-6和I型膠原降解標志物（C-telopeptide）釋放量[10-12]。K-阿片拮抗劑、環(huán)孢霉素A及甲基強的松龍對類風濕性關(guān)節(jié)炎有一定治療作用，其中機制之一即為下調(diào)IL-17mRNA的表達[12]。故IL-17不僅是評價關(guān)節(jié)炎癥狀嚴重程度的一項指標，也是治療關(guān)節(jié)炎新的突破口。由此，我們可以推斷通過抑制IL-17的生成，中和IL-17或IL-17R，抑制IL-17作用于靶細胞所產(chǎn)生的致病物質(zhì)等各種途徑均可減輕IL-17對前列腺組織的病理作用，這對前列腺炎的治療具有積極的意義。

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（2013-09-12收稿）

Correlation analysis of IL-17 expression and TNF-α, IL-8, IL-6, IL-10 in EPS of patients with chronic prostatitis＊

Cao Zhibin1, Wang Yuantian2, Xue Wei2, Zheng Guanzhong1, Huang Xuyuan2, Huang Yiran2**
1. Department of Urology, Jia-Ding District Center Hospital, Shanghai 201800, China 2. Department of Urology, Renji Hospital, School of Medicine, Shanghai Jiaotong University

ObjectiveeTo determine the levels of IL-17, TNF-α, IL-8, IL-6, IL-10 in prostatic secretions of different types patients with chronic prostatitis and analyze their relevance, as well as better understand the role of IL-17 in the development of chronic prostatitis.Metthhooddssa total of 110 patients with chronic prostatitis were classifi ed by NIH prostatitis diagnostic criteria including urine routine, routine examination of the prostatic secretions, two glasses of urine culture, and the NIH-CPSI score. The levels of IL-17, TNF-α, IL-8, IL-6 and IL-10 were detected by double antibody sandwich ELISA assay in prostatic secretions of all patients and 30 normal controls. Data analysis was performed by SPSS statistical software.RessuullttssThe levels of IL-17 in TypeⅡ, Ⅲ-a-and Ⅲ-b-type CP patients were signifi cantly higher than those of the control group (P＜0.01); There was no statistical difference in IL-17 level betweenⅡ-and Ⅲ-a type (P＞0.05); but both groups had signifi cant difference with Ⅲ-b-type in IL-17 level (P＜0.05). IL-17 level was positively correlated with NIH-CPSI score (r =0.462, P＜0.05; r =0.571, P＜0.01), IL-10 (r =0.289, P＜0.05), and IL-6(r=0.26, P＜0.05).ConcluussiioonnThe levels of IL-17 in patients with chronic prostatitis suggests that it may be involved in prostate infl ammation.IL-17 is not only the evaluation marker for the severity of chronic prostatitis, but also a new treatment target for chronic prostatitis.

∶ Huang Yiran, E-mail∶ hyrrenji2@yahoo.com.cn

R 697.33

資助∶ 嘉定區(qū)衛(wèi)生系統(tǒng)科研項目（NO.KYXM2010-12-04）；上海市科委科研計劃項目資助（編號09411950300）

**通訊作者, E-mail∶ hyrrenji2@yahoo.com.cn

ddooii∶10.3969/j.issn.1008-0848.2014.02.013