賈 寧，于季紅，謝麗君，索繼江，邢玉斌，劉運(yùn)喜

解放軍總醫(yī)院 感染管理與疾病控制科，北京 100853

ICU環(huán)境鮑曼不動(dòng)桿菌存在情況及耐藥基因型調(diào)查

賈 寧，于季紅，謝麗君，索繼江，邢玉斌，劉運(yùn)喜

解放軍總醫(yī)院 感染管理與疾病控制科，北京 100853

目的了解監(jiān)護(hù)室環(huán)境中鮑曼不動(dòng)桿菌的存在狀況及其耐藥表型和基因型。方法于2010年10月- 2011年10月，每隔2周對(duì)外科監(jiān)護(hù)室、神經(jīng)內(nèi)科監(jiān)護(hù)室和呼吸科監(jiān)護(hù)室病人周邊環(huán)境進(jìn)行采樣并分離鮑曼不動(dòng)桿菌；對(duì)所分離的菌株進(jìn)行抗生素敏感試驗(yàn)和耐藥基因IMP、SIM、VIM、OXA-23、24、51、58檢測(cè)。結(jié)果3個(gè)監(jiān)護(hù)室病人周邊環(huán)境共采集標(biāo)本7 878份，共分離鮑曼不動(dòng)桿菌229株，其中呼吸科監(jiān)護(hù)室分離率(5.41%)高于外科監(jiān)護(hù)室(2.39%)和神內(nèi)監(jiān)護(hù)室(2.56%)(P＜0.001)?？股孛舾行猿龑?duì)多黏菌素(67%)相對(duì)較高以外，其余普遍較低；金屬酶IMP和VIM基因檢出率為20.52%和11.36%，未檢出SIM基因；苯唑西林酶(OXA群)基因OXA-51分離率為32.75%(75/229)、OXA-23分離率為31.44%(72/229)、OXA-58分離率為3.49%(8/229)，未檢出OXA-24、AmpC和CTX-M。結(jié)論監(jiān)護(hù)室環(huán)境菌株的污染和耐藥現(xiàn)狀較為嚴(yán)重，應(yīng)加強(qiáng)日常環(huán)境清潔消毒工作，防止鮑曼不動(dòng)桿菌暴發(fā)和感染率的升高。

鮑曼不動(dòng)桿菌；耐藥；基因型

近年來(lái)，多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌引發(fā)的醫(yī)院感染不容忽視，尤其在重癥監(jiān)護(hù)病房[1]。重癥監(jiān)護(hù)室是侵入性操作和抗生素使用密集的地方，發(fā)生多重耐藥菌感染的危險(xiǎn)性比普通病房高5 ～ 10倍[2]，每次診療操作都有可能造成環(huán)境污染。目前有關(guān)多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的研究多集中于病人分離株，而對(duì)重癥監(jiān)護(hù)室環(huán)境中鮑曼不動(dòng)桿菌的分離率和耐藥現(xiàn)況還不十分清楚。為此我們對(duì)我院外科監(jiān)護(hù)室、神經(jīng)內(nèi)科監(jiān)護(hù)室和呼吸監(jiān)護(hù)室的環(huán)境進(jìn)行了連續(xù)監(jiān)測(cè)采樣，并對(duì)所分離的鮑曼不動(dòng)桿菌的耐藥表型和基因型進(jìn)行了分析，以期為醫(yī)院感染控制措施的制定提供數(shù)據(jù)支持。

材料和方法

1 菌株來(lái)源 于2010年10月1日- 2011年10月1日期間，每隔2周對(duì)外科監(jiān)護(hù)室(20張床)、神經(jīng)內(nèi)科監(jiān)護(hù)室(17張床)和呼吸科監(jiān)護(hù)室(18張床)病人周邊環(huán)境，包括床扶手、床邊桌、監(jiān)護(hù)儀、病人枕頭、護(hù)士袖口和ICU病房空氣等部位，按《醫(yī)療機(jī)構(gòu)消毒技術(shù)規(guī)范》2012版操作規(guī)程進(jìn)行病原菌采樣；菌株培養(yǎng)按臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程常規(guī)方法進(jìn)行，經(jīng)法國(guó)生物梅里埃Viteck 32鑒定。分離的鮑曼不動(dòng)桿菌-80 ℃保存。

2 藥物敏感性實(shí)驗(yàn) 采用法國(guó)生物梅里埃公司ATB藥敏條，檢測(cè)所收集的菌株對(duì)氨芐西林/舒巴坦、替卡西林、替卡西林/克拉維酸、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、頭孢吡肟、亞胺培南、美羅培南、頭孢他啶、阿米卡星、慶大霉素、妥布霉素、環(huán)丙沙星、多黏菌素E和復(fù)方新諾明的藥物敏感性，參照美國(guó)實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(NCCLS)判斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判讀。質(zhì)控菌株大腸埃希菌ATCC25922和銅綠假單胞菌ATCC27853。

3 耐藥基因檢測(cè) 基因組DNA制備：將待測(cè)菌接種于LB營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，37℃振蕩20 h(轉(zhuǎn)速180 r/min)，取菌液1.5 ml于10 000 r/min離心5 min，棄上清，加蒸餾水400 μl，100℃水浴20 min，10 000 r/min離心5 min，取上清液為模板DNA。-20℃保存?zhèn)溆?。PCR擴(kuò)增苯唑西林酶(OXA群)基因OXA-51、OXA-24、OXA-23、OXA-58，金屬β內(nèi)酰胺酶基因(MBL群)IMP、SIM、VIM基因，超光譜β內(nèi)酰胺酶基因CTX-M和AmpC基因。引物序列由大連寶生物公司合成[3-7](見(jiàn)表1)；反應(yīng)條件：OXA基因擴(kuò)增條件為94℃、1 min變性，94℃30 s，52℃90 s，72℃ 90 s，30個(gè)循環(huán)，72℃延伸7 min；VIM、SIM、TEM基因擴(kuò)增條件為94℃變性5 min，94℃ 30 s，55℃ 40 s，72℃ 50 s，35個(gè)循環(huán)，72℃延伸7 min；IMP基因擴(kuò)增條件為94℃變性5 min，94℃ 30 s，52℃ 40 s，72℃ 50 s，35個(gè)循環(huán)，72℃延伸7 min；CTX、AmpC基因擴(kuò)增條件為94℃變性5 min，94℃ 30s，47℃ 40 s，72℃ 50 s，35個(gè)循環(huán)，72℃延伸7 min；采用1.5%瓊脂糖凝膠電泳觀察結(jié)果。

表1 PCR引物序列Tab. 1 Primers used in PCR

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用CHISS統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行成組t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析。

結(jié) 果

1 ICU環(huán)境中鮑曼不動(dòng)桿菌分離率 共采集標(biāo)本7 878份，分離鮑曼不動(dòng)桿菌229株，其中外科監(jiān)護(hù)室分離率為2.39%(58/2 420)，神內(nèi)監(jiān)護(hù)室分離率為2.56%(53/2 066)，呼吸監(jiān)護(hù)室分離率為5.41% (118/2 182)。呼吸科監(jiān)護(hù)室分離率高于外科監(jiān)護(hù)室和神內(nèi)監(jiān)護(hù)室(P＜0.001)。病人枕邊分離陽(yáng)性率最高42.8%(98/229)，其次為病人床邊桌、監(jiān)護(hù)儀，陽(yáng)性率分別為19.6%(45/229)和18.7%(43/229)。見(jiàn)表2。

表2 不同ICU環(huán)境中鮑曼不動(dòng)桿菌的分離率Tab. 2 Rate of isolated Acinetobacter baummanii strains in different ICUs

2 鮑曼不動(dòng)桿菌環(huán)境分離株的藥物敏感性 229株鮑曼不動(dòng)桿菌環(huán)境分離株的藥物敏感性除多黏菌素(67%)相對(duì)較高以外，其余普遍較低。氨芐西林/舒巴坦為14.2%，替卡西林為10.1%，替卡西林/克拉維酸為12.6%，哌拉西林為11.6%，哌拉西林/他唑巴坦為19.2%，頭孢吡肟為20.4%，亞胺培南為22.6%，美羅培南為21.7%，頭孢他啶為20.4%，阿米卡星為28.3%，慶大霉素為19.5%，妥布霉素為22.0%，環(huán)丙沙星為20.4%，復(fù)方新諾明為14.8%。見(jiàn)表3。

3 耐藥基因檢測(cè) 在229株鮑曼不動(dòng)桿菌環(huán)境分離株中，碳青霉烯類(lèi)酶耐藥基因中以B類(lèi)金屬酶和D類(lèi)苯唑西林酶為主，未檢出C類(lèi)AmpC基因；B類(lèi)金屬酶IMP檢出率為20.52%，VIM基因檢出率為11.36%，未檢出SIM基因；苯唑西林酶(OXA群)基因OXA-51分離率為32.75%、OXA-23分離率為31.44%、OXA-58分離率為3.49%。未檢出OXA-24基因、超光譜β內(nèi)酰胺酶CTX-M。見(jiàn)表4。

表3 鮑曼不動(dòng)桿菌環(huán)境分離株的藥物敏感性Tab. 3 Drug sensitivity of Acinetobacter baummanii strains isolated in ICU(n=229)

表4 ICU環(huán)境鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥基因檢出Tab. 4 Drug resistant Acinetobacter baummanii genes isolated in ICU(n=229)

討 論

調(diào)查顯示鮑曼不動(dòng)桿菌病人分離株呈現(xiàn)多重耐藥，且其耐藥基因可以在不同地區(qū)、不同國(guó)家進(jìn)行傳播[1,8]，那么醫(yī)院環(huán)境，尤其是多重耐藥菌分離率高的監(jiān)護(hù)室環(huán)境中鮑曼不動(dòng)桿菌的分離率和耐藥基因型攜帶情況如何，監(jiān)護(hù)室環(huán)境的污染狀況是否需要引起足夠的重視以降低醫(yī)院內(nèi)傳播風(fēng)險(xiǎn)的研究就顯得非常重要。本次研究中，呼吸監(jiān)護(hù)室、神內(nèi)監(jiān)護(hù)室和外科監(jiān)護(hù)室的環(huán)境中鮑曼不動(dòng)桿菌分離率在2% ～ 6%，其中呼吸監(jiān)護(hù)室分離率高于外科監(jiān)護(hù)室和神內(nèi)監(jiān)護(hù)室，這可能與收治病人呼吸道疾病較重，吸痰操作較多，易造成飛沫等污染有關(guān)。所分離的229株鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)抗生素敏感性普遍較低，提示我院ICU環(huán)境中存在多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌污染。

鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥機(jī)制復(fù)雜，與產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶、外膜蛋白缺失與外排泵作用等多種機(jī)制有關(guān)，其中以產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶為主[9]。鮑曼不動(dòng)桿菌攜帶的β-內(nèi)酰胺酶主要有碳青霉烯酶、AmpC酶和ESBLs酶，其中碳青霉烯類(lèi)酶報(bào)道較多，AmpC酶和ESBLs酶報(bào)道較少。碳青霉烯類(lèi)酶可分為A、B、C、D四類(lèi)：A類(lèi)包括KPC、GES等基因；B類(lèi)(金屬酶)包括IMP、VIM、SPM、SIM和GIM等基因；C類(lèi)主要包括AmpC基因；D類(lèi)(苯唑西林酶)主要包括OXA基因。與鮑曼不動(dòng)桿菌緊密相關(guān)的主要是B類(lèi)和D類(lèi)，其中最重要的是D類(lèi)OXA酶[10]。目前，根據(jù)氨基酸序列同源性差異分析OXA主要分為9組，其中OXA-51、OXA-23、OXA-58、OXA-24四型最常見(jiàn)。國(guó)外報(bào)道的鮑曼不動(dòng)桿菌以O(shè)XA-23、OXA-51、IMP-1、IMP-2、IMP-4、IMP-6、VIM-1、VIM-2、VIM-3和SIM-1型為主[4,11]。但有關(guān)環(huán)境分離株的耐藥基因攜帶情況報(bào)道較少。本次研究中，在229株鮑曼不動(dòng)桿菌環(huán)境分離株中，碳青霉烯類(lèi)酶耐藥基因中以B類(lèi)金屬酶和D類(lèi)苯唑西林酶為主，未檢出C類(lèi)AmpC基因；B類(lèi)金屬β內(nèi)酰胺酶基因IMP和VIM基因檢出率相對(duì)較高，分別為20.52%和11.36%；金屬酶能夠水解單環(huán)類(lèi)、碳青霉烯類(lèi)在內(nèi)的全部β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素，并且容易發(fā)生水平傳播造成環(huán)境污染。D組OXA酶在鮑曼不動(dòng)桿菌中廣泛分布，國(guó)內(nèi)外均以O(shè)XA-51和OXA-23為主要基因型，本次環(huán)境菌株中檢出率也較高，分別為32.75%和31.44%。OXA酶對(duì)碳青霉烯類(lèi)抗生素的水解活性并不強(qiáng)，一旦與其他耐藥機(jī)制共同作用就容易導(dǎo)致多藥耐藥。OXA-24首次于2000年在西班牙發(fā)現(xiàn)[4]后證實(shí)，OXA-25、OXA-26和OXA-40均為OXA-24的同源株[12]。OXA-24在我國(guó)尚未有相關(guān)報(bào)道。本研究尚未檢測(cè)到OXA-24基因。

研究顯示監(jiān)護(hù)室環(huán)境菌株的污染和耐藥現(xiàn)狀較為嚴(yán)重，不容忽視，應(yīng)加強(qiáng)呼吸監(jiān)護(hù)室的日常環(huán)境清潔消毒工作，防止污染的環(huán)境造成監(jiān)護(hù)室鮑曼不動(dòng)桿菌暴發(fā)和感染率的升高。環(huán)境菌株耐藥基因的來(lái)源還有待于進(jìn)一步研究探討。

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Acinectobacter baummanii in ICU and its drug-resistant genotype

JIA Ning, YU Ji-hong, XIE Li-jun, SUO Ji-jiang, XING Yu-bin, LIU Yun-xi
Department of Nosocomial Infection and Disease Control, Chinese PLA General Hospital, Beijing 100853, China

LIU Yun-xi. Email: yunxiliu1965@yahoo.com.cn

ObjectiveTo investigate the Acinetobacter baummanii in ICU and its drug-resistant phenotype and genotype.MethodsAcinetobacter baummanii was isolated every two weeks in surgical ICU, neurological ICU and respiratory ICU in our hospital from October 2010 to October 2011. The antibiotic sensitivity was tested and the drug-resistant genes (IMP, SIM, VIM, OXA-23, 24, 51, and 58) were detected.ResultsA total of 7 878 samples were collected from 3 ICUs, from which 229 Acinectobacter baummanii strains were isolated. The rate of Acinectobacter baummanii strains isolated in respiratory ICU was signifcantly higher than those isolated in surgical ICU and neurological ICU (5.41% vs 2.39%, 5.41% vs 2.56%, P＜0.001). The resistance of Acinectobacter baummanii strains to polymyxin was 67% and rather low to other antibiotics. The detection rate of IMP, VIM, and OXA -51, OXA-23, OXA-58 was 20.52%, 11.36%, and 32.75% (75/229), 31.44% (72/229), 3.49% (8/229), respectively. No SIM, OXA-24, AmpC and CTX-M genes were detected.ConclusionThe contamination of Acinectobacter baummanii is severe in ICU and its drug resistance is high, daily disinfection of ICU should thus be strengthened in order to prevent outbreak of Acinectobacter baummanii infection.

acinectobacter baummanii; drug resistance; genotype

R 446.5

A

2095-5227(2014)01-0004-04

10.3969/j.issn.2095-5227.2014.01.002

時(shí)間：2013-10-12 15:53

http://www.cnki.net/kcms/detail/11.3275.R.20131012.1553.004.html

2013-08-16

國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(30972523)；國(guó)家科技重大專(zhuān)項(xiàng)課題項(xiàng)目(2009ZX10004-204)

Supported by the National Natural Science Foundation of China(30972523); National Science and Technology Major Project(2009ZX10004-204)

賈寧，女，博士，副研究員。專(zhuān)業(yè)方向：醫(yī)院感染學(xué)。Email: jianing@263.net

劉運(yùn)喜，男，博士，研究員。Email: yunxiliu1965@yahoo. com.cn