楊 平，衣雪竹

（大連百傲化學(xué)股份有限公司,遼寧 大連 116038）

新型硫酸鹽還原菌殺菌劑的性能評價

楊 平，衣雪竹

（大連百傲化學(xué)股份有限公司,遼寧 大連 116038）

采用絕跡稀釋法研究了新型殺菌劑B對硫酸鹽還原菌（SRB）的殺菌性能。結(jié)果表明，新型殺菌劑B相對于同類殺菌劑A具有起效快、用量少、時效長的優(yōu)勢，對SRB的最低抑制濃度為30mg·L-1，加60mg·L-1作用72h殺菌率為100％，藥效可持續(xù)14d。

硫酸鹽還原菌（SRB）；殺菌性能；絕跡稀釋法

在工業(yè)冷卻循環(huán)水及油田回注水中，大量微生物的生長繁殖會使水質(zhì)變差，管道堵塞，設(shè)備腐蝕，若不加以控制將嚴(yán)重影響正常生產(chǎn)。循環(huán)水中最常見的危害菌為硫酸鹽還原菌，它是一種厭氧菌，代謝過程中會產(chǎn)生黑色沉淀物和硫化氫。研究表明大部分的腐蝕破壞都是由硫酸鹽還原菌生長造成的[1]，因此對硫酸鹽還原菌的有效控制已成為水處理殺菌劑的研究熱點(diǎn)。在循環(huán)水處理中最常使用氧化型殺菌劑和季銨鹽類殺菌劑，這兩類殺菌劑雖對硫酸鹽還原菌有一定的殺菌能力[2-3]，但用久會使菌體產(chǎn)生耐藥性，影響藥效，增加使用成本。本文采用絕跡稀釋法[4-5]對市售及新型非氧化型殺菌劑進(jìn)行了殺菌性能對比，旨在找到一種針對硫酸鹽還原菌的有效殺菌劑，為工業(yè)防腐的有效控制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)測試菌及藥品

SRB由本微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)保存；殺菌劑A為市售水處理殺菌劑；殺菌劑B由大連百傲化學(xué)公司提供；SRB測試瓶（HY-SRB-7）購自北京華運(yùn)安特科技有限責(zé)任公司；其它試劑均購自國內(nèi)試劑公司。

1.1.2 SRB培養(yǎng)基

磷酸氫二鉀0.5g，氯化銨1.0g，硫酸鈉0.5g，氯化鈣0.1g，硫酸鎂2.0g，乳酸鈉3.5g，酵母粉1.0g，加水補(bǔ)至1000mL，pH 7.2～7.4，121℃滅菌15分鐘后取出放涼；每100mL培養(yǎng)液加1.0mL硫酸亞鐵銨溶液及1.0mL維C溶液，兩種溶液配制方法均見GB/T14643.5-93[6]。

1.1.3 儀器設(shè)備

超凈工作臺；恒溫培養(yǎng)箱；高壓滅菌鍋；AG135梅特勒-托利多天平等。

1.2 方法

（1）抑菌濃度判斷：1mLSRB測試菌液加入SRB測試瓶（HY-SRB-7）中，分別加入不同劑量殺菌劑，以不加殺菌劑瓶作為空白對照，35℃培養(yǎng)觀察，培養(yǎng)液不變黑或無黑色沉淀生成的濃度為抑菌濃度[4]。

（2）殺菌率：采用三管絕跡稀釋法測定殺菌劑處理液不同時間的殘留菌數(shù)[5-6]，以不加殺菌劑的菌數(shù)作對照，計(jì)算殺菌率=（起始菌數(shù)-殘留菌數(shù)）/起始菌數(shù)×100％。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同時間的抑菌能力對比

實(shí)驗(yàn)觀察了7d內(nèi)殺菌劑A、B對SRB的抑菌能力的變化[7]，殺菌劑加入劑量0-50mg·L-1，梯度增加值5mg·L-1，SRB菌量控制在為106-107個· mL-1。由圖1，未加入殺菌劑測試瓶3h即變黑；加入30mg·L-1殺菌劑A ，24h-96h可抑制SRB菌生長，但7d時需45mg·L-1方可抑制SRB菌生長；而加入10mg·L-1殺菌劑B，24h試劑瓶僅有少量黑色沉淀，2d時20mg·L-1仍可保持不變色，隨著時間的延長其抑制濃度逐漸增大，但7d后30mg·L-1仍可抑制SRB菌生長。

圖1 殺菌劑A（下）殺菌劑B（上）加入不同時間狀態(tài)，0-50mg·L-1（左-右）

7d后對測試瓶中菌液進(jìn)行計(jì)數(shù)（MPN，3管），如表1，加入40mg·L-1殺菌劑B的測試瓶中SRB≤4個·mL-1，加入同等劑量殺菌劑A測試瓶中SRB≥9.5×104個·mL-1，兩者殘留菌數(shù)差4個數(shù)量級，可見殺菌劑B對SRB的抑菌能力明顯優(yōu)于殺菌劑A。

表1 對SRB的殺菌率（7d）對比

2.2 不同時間的殺菌效果對比

研究殺菌劑不同時間的殺菌效果可確定殺菌劑起效的最佳時間及藥效時長，對于殺菌劑實(shí)際應(yīng)用中的合理投加及效果檢測有重要的指導(dǎo)意義。實(shí)驗(yàn)分別向裝入100mL培養(yǎng)液的滅菌厭氧瓶（控制SRB菌量在106-107個·mL-1）中加入60mg·L-1的殺菌劑A、B，并以未加殺菌劑的厭氧培養(yǎng)液作為空白對照。充分混勻后放入35℃的生化箱中培養(yǎng)，不同作用時間后，以MPN法檢測殘留菌數(shù)。

由表2，殺菌劑A、B對SRB的殺菌率都均在72h時達(dá)到最佳，這是因?yàn)閮煞N殺菌劑均屬非氧化型殺菌劑，其對SRB的抑制主要是通過影響細(xì)菌代謝來完成的，故比傳統(tǒng)的氧化型殺菌劑見效慢[8]。殺菌劑B在72h未檢出SRB，結(jié)果可持續(xù)14d，此時殺菌劑A的殺菌率有明顯降低，對SRB生長抑制開始減弱。分析結(jié)果，可見殺菌劑B在對SRB的抑制中具有長效性的優(yōu)勢，這是由于殺菌劑B中部分組份與殺菌劑A不同引起的。

表2 不同時間對SRB的殺菌率

3 結(jié)論

綜上，殺菌劑B對殺滅硫酸鹽還原菌較現(xiàn)有市售殺菌劑A有更高的殺菌能力，其對SRB的有效抑制僅需30mg·L-1，投加60mg·L-1作用72h后可達(dá)到最佳的殺菌效果，殺菌率達(dá)100％，持續(xù)14d以上無SRB菌生長，適用水處理中硫酸鹽還原菌的殺滅控制。

[1]于亮，李佰廣，孫琦等.硫酸鹽還原菌引起的腐蝕及微生物防控研究進(jìn)展[J].遼寧化工,2009,38（06）：389-392.

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[3]孫玉海，馬天態(tài)，張松亭等.雙子表面活性劑對硫酸鹽還原菌的殺菌性能[J].大連工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2010,29（06）：452-454.

[4]何世梅，田劍臨，余偉明等.測試瓶法快速檢測循環(huán)水中硫酸鹽還原菌[J].工業(yè)水處理,2004,24（01）：52-59.

[5]楊春雨，李進(jìn)，沈瑩.硫酸鹽還原菌殺菌劑的殺菌能力評價[J].工業(yè)用水與廢水,2008,39（02）：76-78.

[6]GB/T14643.5-93，工業(yè)循環(huán)冷卻水中硫酸鹽還原菌的測定MPN法[S].

[7]高建富，李進(jìn)，敬超文等.不同殺菌劑對硫酸鹽還原菌殺菌能力評價[J].工業(yè)用水與廢水,2013,44（06）：53-56.

[8]袁曉娟，呂榮湖.幾種殺生劑的殺菌規(guī)律與作用機(jī)理探討[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2008,36（17）：7425-7426.

楊平（1973—），女，大連人，碩士，工程師，主要從事：工業(yè)殺菌劑的評價及應(yīng)用研究。