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        肝郁證實質(zhì)的實驗研究概述

        2014-04-15 14:13:56張曉龍
        江蘇中醫(yī)藥 2014年12期
        關(guān)鍵詞:肝郁疏肝造模

        張曉龍

        (南京中醫(yī)藥大學(xué),江蘇南京 210023)

        肝郁證實質(zhì)的實驗研究概述

        張曉龍

        (南京中醫(yī)藥大學(xué),江蘇南京 210023)

        目前,現(xiàn)代科學(xué)對于肝郁證實質(zhì)的實驗研究涉及免疫、生殖、神經(jīng)內(nèi)分泌、血液、消化等多系統(tǒng),但仍未能明確闡釋肝郁證的實質(zhì)。肝郁證的研究,應(yīng)在中醫(yī)基本理論的指導(dǎo)下,充分利用現(xiàn)代科技手段,方有可能取得突破,推動臨床診斷和治療更好地向前發(fā)展。

        肝郁證 實驗研究 綜述

        中醫(yī)學(xué)認(rèn)為,肝主疏泄,體陰用陽,喜條達(dá)而惡抑郁。當(dāng)下社會、家庭生活壓力增大,使肝氣郁結(jié)證型發(fā)病率日益增高,成為最常見的中醫(yī)證型之一[1]。而肝氣郁結(jié)又常作為氣滯、痰濁、水飲、濕熱、血瘀、氣火等病理因素生成的先決條件,從而使疾病變癥叢生,為臨床治療帶來很大困難。為此,對肝郁證實質(zhì)的研究也成為了日益迫切的一項課題,然而中醫(yī)肝郁證的概念是抽象的,它僅是一組臨床癥狀的概括,而且大多以病人主觀不適為表現(xiàn),故要探求肝郁證的實質(zhì)是一項艱巨的任務(wù)。為此部分學(xué)者努力尋找與肝郁證有關(guān)的微觀改變,現(xiàn)將肝郁證實質(zhì)的實驗研究進(jìn)展概述如下。

        1 對免疫系統(tǒng)的影響

        嚴(yán)燦等[2]使用夾尾激怒法制備肝郁證大鼠模型,發(fā)現(xiàn)大鼠出現(xiàn)明顯的免疫抑制并伴有血漿皮質(zhì)酮水平升高,提示肝郁證大鼠免疫抑制與下丘腦-垂體-腎上腺軸(HPAA)興奮性升高有關(guān)。趙益業(yè)[3]使用束縛四肢法制作肝郁證模型,并測定溶血素、脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率、白細(xì)胞介素2作為免疫功能評價指標(biāo),結(jié)果發(fā)現(xiàn)三項指標(biāo)均降低,表明模型動物免疫功能受到抑制。陳松等[4]使用夾尾激怒結(jié)合腎上腺素注射法制作肝郁證模型,觀察T、B淋巴細(xì)胞活性變化以及血液IgG、IgM的水平,結(jié)果發(fā)現(xiàn)模型大鼠T、B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率顯著升高,IgM水平顯著降低,提示肝郁證與機體免疫力下降有非常密切的聯(lián)系。李家邦等[5-6]運用夾尾激怒結(jié)合腎上腺素注射法制作肝郁證模型,觀察肝郁證模型大鼠活化的T細(xì)胞核因子c mRNA及蛋白質(zhì)的表達(dá)水平,以及柴胡疏肝散對其的干預(yù)情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn)肝郁組NF-ATc mRNA及蛋白質(zhì)表達(dá)明顯降低,用柴胡疏肝散治療后,肝郁組NF-ATc mRNA及蛋白質(zhì)表達(dá)上調(diào),基本恢復(fù)到正常水平。李艷彥等[7]聯(lián)合慢性束縛應(yīng)激、過度疲勞、飲食失節(jié)的方法復(fù)制肝郁證模型,觀察肝郁大鼠體重、脾和胸腺的重量及脾、胸腺指數(shù),以及血清IL-1β、IL-2、IL-6、TNF。結(jié)果發(fā)現(xiàn)模型大鼠體重及胸腺、脾重量顯著減輕,血清IL-1β、IL-6、IL-2和TNF發(fā)生明顯改變,提示該肝郁脾虛證模型存在免疫功能的紊亂。

        2 對循環(huán)系統(tǒng)的影響

        李松濱等[8]采用夾尾激怒法制備肝郁證大鼠模型,觀察模型大鼠血液流變學(xué)改變,發(fā)現(xiàn)其全血黏度與血漿黏度及細(xì)胞聚集指數(shù)均明顯增高,這與郁怒傷肝、氣滯血瘀的理論相吻合。李艷彥等[9]聯(lián)合慢性束縛應(yīng)激、過度疲勞、飲食失節(jié)法建立大鼠肝郁脾虛證模型,造模后測定大鼠血液流變學(xué)改變和血漿TXB2、PGFla含量,結(jié)果發(fā)現(xiàn)肝郁脾虛證大鼠存在血液高黏和血栓易形成狀態(tài),恢復(fù)期血液高黏同時伴有擴血管因素的加強。提示肝郁脾虛證有血流變的異常和血漿TXA2-PGI2的平衡失調(diào)。

        3 對生殖系統(tǒng)的影響

        3.1 性行為魯明等[10]應(yīng)用夾尾激怒法復(fù)制肝郁證模型,觀察大鼠交配試驗,發(fā)現(xiàn)模型大鼠爬背潛伏期縮短,次數(shù)增加,但插入、射精潛伏期延長,次數(shù)減少,插入與爬背次數(shù)比值下降。并制備大鼠腦干及陰莖組織勻漿,發(fā)現(xiàn)模型組大鼠腦干NA、5-HT及陰莖NA含量明顯升高,提示肝郁證動物模型性行為的改變與中樞及外周單胺類遞質(zhì)的紊亂有關(guān)。

        3.2 子宮、卵巢、性激素水平于水瀾等[11]使用夾尾激怒法制作肝郁證模型,并設(shè)立疏肝健脾活血中藥組,應(yīng)用光鏡觀察組織學(xué)改變并測定子宮重量,觀察雌二醇、孕酮的變化,結(jié)果發(fā)現(xiàn)模型組子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞呈立方型,腺體數(shù)量較少,排列不整齊;中藥高劑量組與模型組比較,子宮/體重指數(shù)增高,雌二醇及孕酮水平明顯升高,差異有顯著性意義,從數(shù)值分析中藥高劑量組效果優(yōu)于中藥對照組。

        4 對神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的影響

        4.1 中樞神經(jīng)遞質(zhì)毛海燕等[12]使用帶枷法制備肝郁證模型,造模結(jié)束后將大鼠快速斷頭處死,分離大腦半球、間腦和腦干并制備組織勻漿,檢測勻漿中去甲腎上腺素、多巴胺、5-羥色胺以及5-羥吲哚乙酸。結(jié)果顯示:造模1周時,DA和NE含量均減少,而4周時5-HT、DA和NE均顯著增高。各種遞質(zhì)的變化以DA的變化最為顯著,因此,DA可能是引起機體情志變化的主要因素。高蕭楓等[13]應(yīng)用四肢束縛法復(fù)制肝郁癥候模型,造模結(jié)束后取腦組織,制備勻漿,熒光分光光度法測腦內(nèi)NE、DA含量。結(jié)果顯示肝郁證模型組大鼠腦內(nèi)NE與 DA水平明顯下降,逍遙散治療組大鼠腦內(nèi)NE與DA水平明顯提升。大鼠腦內(nèi)NE和DA水平明顯降低可能是肝郁證發(fā)生的物質(zhì)基礎(chǔ)。

        4.2 對下丘腦-垂體-腎上腺素(HPA)軸的作用朱清靜等[14-15]使用慢性束縛法制作肝郁證模型,于造模后測定實驗大鼠對葡萄糖水的攝取量以及血清ACTH、皮質(zhì)酮、β-內(nèi)啡肽含量,并在造模后用柴胡舒肝散進(jìn)行干預(yù)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)柴胡疏肝散能增加大鼠對糖水的攝取量,降低應(yīng)激導(dǎo)致的大鼠促腎上腺皮質(zhì)激素、β-EP,使大鼠下丘腦β-EP陽性細(xì)胞的表達(dá)減少。提示肝郁證大鼠HPA軸的功能失調(diào),并且疏肝解郁代表方柴胡舒肝散在一定程度上調(diào)節(jié)了慢性束縛應(yīng)激模型大鼠的行為表現(xiàn)和功能紊亂。李艷彥等[16]聯(lián)用慢性束縛應(yīng)激、過度疲勞、飲食失節(jié)的方法復(fù)制肝郁證模型,造模后觀察腎上腺、腎上腺指數(shù)、下丘腦組織CRH、血漿ACTH、血漿CORT,結(jié)果提示造模后的大鼠HPA軸功能減低,提示這可能是肝郁證發(fā)病的關(guān)鍵。鄧青秀等[17]應(yīng)用束縛加浸水法復(fù)制肝郁證模型,造模后給藥組予四逆散干預(yù),檢測胃腸激素含量,電鏡觀察胃腸組織形態(tài),結(jié)果發(fā)現(xiàn)四逆散能恢復(fù)應(yīng)激刺激對實驗大鼠胃腸道組織引起的病理改變且能提高血清中胃泌素、血漿中胃動素和血管活性腸肽的含量,降低血漿中生長抑素的含量。

        4.3 對下丘腦-垂體-卵巢(HPO)軸的作用黃保民等[18]使用夾尾激怒法復(fù)制肝郁證模型,造模后發(fā)現(xiàn)模型大鼠下丘腦垂體NE減少,DA、5-HT及5-HIAA含量增加,血清FSH、LH、E2、P降低,NE、DA、5-HT、5-HIAA及T水平升高,說明心理應(yīng)激狀態(tài)下肝郁證雌性大鼠的神經(jīng)生殖內(nèi)分泌功能紊亂。并在造模后對給藥組予疏肝補腎中藥,給藥后發(fā)現(xiàn)給藥組大鼠上述指標(biāo)均有明顯改善,說明舒肝補腎中藥有改善應(yīng)激大鼠HPO軸的作用。

        4.4 對海馬內(nèi)基因表達(dá)的影響孛立甲等[19]應(yīng)用慢性應(yīng)激刺激法復(fù)制肝郁證模型,并對海馬內(nèi)差異表達(dá)明顯的片段進(jìn)行生物信息學(xué)分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)代表GSK3b與St3gal5的這兩個基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物差異表達(dá),提示這兩個基因產(chǎn)物可能與肝郁證的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。杜雅薇等[20]運用模具束縛結(jié)合孤養(yǎng)的方法制備肝氣郁結(jié)證候動物模型,并檢測大鼠腦海馬PDE4A、PDE4B及PDE4D表達(dá)以及柴胡舒肝散干預(yù)后的影響。結(jié)果顯示模型組大鼠腦海馬該三組基因的mRNA表達(dá)較正常組降低,而柴胡疏肝散組的表達(dá)較模型組升高。提示可通過上調(diào)大鼠腦海馬PDE及其亞型的mRNA的表達(dá)來治療肝郁證。于琦等[21]應(yīng)用慢性應(yīng)激刺激制作肝郁證模型,用RT-PCR方法檢測海馬5-HT1AR mRNA表達(dá),結(jié)果顯示肝郁模型大鼠海馬5-HT1AR mRNA表達(dá)降低,四逆散和逍遙散可以對抗這種降低,這項發(fā)現(xiàn)一方面進(jìn)一步支持該模型為肝郁模型的推論,并提示肝郁證發(fā)生、發(fā)展機制及疏肝方劑的作用原理可能與海馬5-HT1AR基因表達(dá)變化密切相關(guān)。

        4.5 對外側(cè)膝狀體NMDAR1基因表達(dá)的影響蘇娜娜等[22]應(yīng)用慢性應(yīng)激刺激制作肝郁證模型,并運用原位雜交法檢測實驗大鼠外側(cè)膝狀體中NMDAR1基因表達(dá)情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)模型組大鼠該基因表達(dá)面積、平均光密度、積分光密度均顯著增高。提示肝郁是導(dǎo)致外側(cè)膝狀體損傷的重要因素,這為從肝論治視路疾病提供了理論依據(jù)。

        5 對消化系統(tǒng)的影響

        毛海燕等[23]采用帶枷造模法制作肝郁證模型,造模4周后發(fā)現(xiàn)造模大鼠血清胃動素增多而胃泌素顯著減少,提示情志刺激可引起大鼠的消化功能紊亂。杜雅薇等[24]采用模具束縛結(jié)合孤養(yǎng)的方法制備肝郁證模型,并觀察肝郁證模型大鼠行為學(xué)改變以及血清胃泌素和血漿胃動素含量的影響,并應(yīng)用柴胡舒肝散對造模大鼠進(jìn)行干預(yù)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)柴胡疏肝散可縮短肝郁證大鼠的強迫游泳中不動時間,升高血清GAS和血漿MTL的水平。提示柴胡舒肝散可改善肝氣郁結(jié)所致胃腸道動力不足。

        6 肝組織的過氧化損傷

        劉建鴻等[25]使用帶枷單籠喂養(yǎng)法復(fù)制肝郁證模型,造模后取大鼠肝組織并制備勻漿,檢測活性氧、丙二醛水平。結(jié)果顯示肝臟組織內(nèi)OFR、MDA水平增高,說明肝臟組織有明顯過氧化損傷。呂志平[26]應(yīng)用束縛四肢法復(fù)制肝郁證模型,結(jié)果顯示肝郁模型大鼠過氧化作用增強,消除自由基能力下降,肝細(xì)胞受損。提示脂質(zhì)過氧化增強、肝細(xì)胞的破壞可能是肝郁證重要的病理基礎(chǔ)。

        7 其他

        徐舒等[27-28]采用慢性束縛的方法造成肝郁證模型,并使用代謝組學(xué)的分析方法,將對照組與模型組對比,結(jié)果顯示血漿中葡萄糖和肌酸的含量明顯偏高,而3-羥基丁酸、谷氨酰胺、磷脂酰膽堿、磷酸膽堿和不飽和脂肪酸的含量明顯偏低,這些小分子物質(zhì)組的不同有可能代表肝郁證的物質(zhì)基礎(chǔ)。

        8 結(jié)語

        肝主疏泄,是調(diào)整人體氣機最主要的臟腑之一,肝氣郁結(jié),常常導(dǎo)致郁火、痰濁、濕熱、瘀血、食積等病理因素的生成,使疾病變癥叢生,給治療帶來麻煩。《丹溪心法·六郁》有云:“氣血沖和,萬病不生,一有怫郁,諸病生焉。故人生諸病,多生于郁。”可見肝氣郁結(jié)在許多疾病的發(fā)生發(fā)展中具有舉足輕重的作用,所以探求肝郁證的實質(zhì)是解決許多臨床問題的重要切入點。

        綜上所述,現(xiàn)代科學(xué)對于肝郁證實質(zhì)的實驗研究涉及多個系統(tǒng)、多個方面,包括:免疫系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、血液系統(tǒng)、消化系統(tǒng)等,雖然進(jìn)行了多年的研究,并且發(fā)現(xiàn)了許多可能成為肝郁證本質(zhì)的物質(zhì),如激素、cAMP、cGMP、神經(jīng)遞質(zhì)、細(xì)胞因子等,但仍未能明確闡釋肝郁證的實質(zhì)。筆者認(rèn)為,目前對于肝郁證實質(zhì)的研究尚存在以下幾方面的不足:(1)判定肝郁證的指標(biāo)較多,且特異性和敏感性均不高,例如肝郁患者存在血液流變學(xué)改變,而這種改變又是血瘀證的重要指征,這樣的指標(biāo)對肝氣郁結(jié)證而言就缺乏特異性。(2)肝郁證的動物模型尚缺乏統(tǒng)一性,并且一些造模結(jié)果與肝郁證的實質(zhì)不夠統(tǒng)一。在對于肝郁證的研究過程中,必須要有一種為大眾公認(rèn)的造模方法,即所謂標(biāo)準(zhǔn)化動物模型,這樣的研究結(jié)果才有可比性。(3)中醫(yī)講究方證結(jié)合,以方測證,以方驗證。目前絕大部分對于肝郁證候的研究僅局限于該證型本身,而很少有以方驗證的環(huán)節(jié)。筆者認(rèn)為應(yīng)在肝氣郁結(jié)證的研究中,加入藥物的干預(yù)研究,通過觀察治療前、中、后癥狀的改變以及實驗指標(biāo)的動態(tài)變化,分析證-效-指標(biāo)的相關(guān)關(guān)系,從而篩選出較為符合肝郁證實質(zhì)的指標(biāo),為中醫(yī)辨證治療肝氣郁結(jié)證的作用機理、作用部位、作用靶點提供依據(jù)。(4)肝氣郁結(jié)證作為肝郁證的核心證候,其實在發(fā)生和發(fā)展中并不是單純的,如前所述,在臨床上,肝郁證的變化紛繁復(fù)雜,病人的表現(xiàn)也不盡相同,所以從肝郁證這個較大的范疇中去尋求其真諦,往往很難找到其共性的機制。所以對于肝郁證的研究,除了應(yīng)考慮到肝氣郁結(jié)之本證外,還應(yīng)當(dāng)作一些細(xì)分,如兼有血瘀者,可以從血液系統(tǒng)探求其本質(zhì);如兼有火郁者,可以從神經(jīng)系統(tǒng)探求其本質(zhì);如兼有性功能障礙或不孕者,可以從生殖系統(tǒng)探求本質(zhì);如兼有脾虛者,可嘗試從消化系統(tǒng)探求其本質(zhì)……共性寓于個性之中,要善于從個性之中去發(fā)現(xiàn)共性,從而達(dá)到“殊途同歸”的效果。不論是人還是動物,都應(yīng)考慮到個體差異,同樣的造模方法,對于不同的個體,也會出現(xiàn)不同的表現(xiàn),根據(jù)中醫(yī)理論,應(yīng)時刻不忘辨證論治的精神,既然“有是證,用是藥”,那就應(yīng)該“有是癥,辨是證”,有的放矢,有條不紊,才能真正弄清中醫(yī)各證型的本質(zhì)??偠灾?,對于肝郁證的研究而言,應(yīng)在中醫(yī)基本理論的指導(dǎo)下,充分利用現(xiàn)代科技手段,方有可能取得突破,推動臨床診斷和治療更好地向前發(fā)展。

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        編輯:傅如海

        習(xí)近平見證中澳中醫(yī)合作協(xié)議簽署

        11月17日,澳大利亞首都堪培拉國會大廈,在國家主席習(xí)近平與澳大利亞總理阿博特的共同見證下,北京中醫(yī)藥大學(xué)校長徐安龍和西悉尼大學(xué)校長格羅夫代表雙方所在機構(gòu),簽署在澳洲建立中醫(yī)中心的合作協(xié)議。

        該中心的建立,旨在發(fā)揮北京中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)醫(yī)療、教育、科研的優(yōu)勢和西悉尼大學(xué)中醫(yī)藥研究澳洲第一的地位作用,建立集中醫(yī)醫(yī)療服務(wù)、教育、研究與文化交流為一體的綜合平臺,以實現(xiàn)臨床醫(yī)療與基礎(chǔ)科學(xué)研究相結(jié)合、臨床醫(yī)療與教育相結(jié)合、中醫(yī)與西醫(yī)相結(jié)合、中西文化相結(jié)合,開展臨床研究,提供特色鮮明、效果顯著的健康服務(wù),培養(yǎng)醫(yī)學(xué)人才,傳播中醫(yī)藥文化,探索中醫(yī)藥走向世界的合作模式,展示和輸出我國文化軟實力,也是落實習(xí)近平關(guān)于要讓世界人民分享中華智慧文明成果講話精神的重要舉措。

        (摘自《中國中醫(yī)藥報》)

        R256.49

        :A

        :1672-397X(2014)12-0087-03

        張曉龍(1989-),男,碩士研究生,研究方向:中醫(yī)內(nèi)科學(xué)-肝臟病研究。326310506@qq.com

        2014-09-25

        江蘇省中醫(yī)藥局科技立項項目——柴胡疏肝散對肝郁模型鼠胃腸動力作用及機制研究(LZ13009)

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