王麗峰，張思培，曹穎，國大亮

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)實驗教學(xué)部，天津 300193；2.天津中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，天津 300193）

鹽酸小檗堿鼻用凝膠的研究

王麗峰1，張思培2，曹穎1，國大亮2

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)實驗教學(xué)部，天津 300193；2.天津中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，天津 300193）

[目的]小檗堿具有神經(jīng)保護作用，特別對神經(jīng)退行性疾病具有良好的治療效果，鼻腔給藥為一種向腦輸送藥物的新途徑，藥物滴人鼻腔后能傳人腦脊液達到治療神經(jīng)的目的，設(shè)計一種鹽酸小檗堿鼻用凝膠劑，并對其進行體外擴散評價。[方法]以卡伯姆-980為凝膠基質(zhì)，以丙三醇為潛溶劑，用三乙醇胺調(diào)節(jié)pH和黏度，采用正交設(shè)計對處方進行優(yōu)化，用紫外分光光度法測定體外溶出，并溶出數(shù)據(jù)進行Weibull概率擬合。[結(jié)果]鹽酸小檗堿鼻用凝膠最佳處方為卡波姆-980濃度0.2%，載藥量1%，pH在6.0～7.0范圍內(nèi)，平均黏度約為1 000～1 200 mPa·s，體外溶出結(jié)果經(jīng)Weibull概率模型擬合，其Td值為104.8 min。[結(jié)論]以生物黏附性材料卡波姆-980為基質(zhì)制備鹽酸小檗堿鼻用凝膠，處方簡單，質(zhì)量穩(wěn)定，藥物釋放平穩(wěn)。

鹽酸小檗堿；卡波姆；鼻用凝膠；藥物釋放

小檗堿，又名黃連素，除黃連外，也是小檗科植物小檗、蕓香科植物黃柏的主要藥效成分，在防已科、鼠李科、罌粟科等某些植物中也含有小檗堿。小檗堿最初作為清熱解毒藥和抗菌藥應(yīng)用于臨床，但現(xiàn)代研究表明小檗堿還具有抗菌、降血糖、治療心血管系統(tǒng)疾病、抗腫瘤等多種藥理活性，特別在神經(jīng)退行等疾病方面具有良好治療效果[1-3]。經(jīng)鼻給藥是藥物透過血腦屏障的捷徑，藥物主要以擴散原理經(jīng)嗅神經(jīng)進入腦[4]。本文基于小檗堿的神經(jīng)保護作用及鼻腦給藥系統(tǒng)原理，利用具有生物膜黏附性的卡波姆為基質(zhì)，制備鹽酸小檗堿鼻用凝膠，并考察其體外釋藥性能，以期獲得用藥方便、生物利用度高的腦神經(jīng)保護制劑。

1 儀器與材料

紫外可見分光光度計（上海光譜儀器有限公司，SP-2102UV型），高剪切分散乳化機（上海弗魯克流體機械制造有限公司，F(xiàn)A25-25G），PH5-3C型酸度計（蕭山市分析儀器廠），旋轉(zhuǎn)式黏度計（上海平軒科學(xué)儀器廠，NDJ-79），TN-100B型托盤天平（上海精科天平），恒溫磁力加熱攪拌器（江蘇省金壇市榮華機器制造有限公司，85-2型），精密電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司，F(xiàn)A1004N），智能藥物溶出儀（天津精密儀器廠，ZRS-8G）。

鹽酸小檗堿（天津中醫(yī)藥大學(xué)藥劑實驗室提供，純度99%），卡波姆-980（美國諾譽化工上海有限公司，CP2010），鹽酸小檗堿對照品（中國藥品生物制品檢定所，110713-200208），甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 實驗方法與結(jié)果

2.1 鹽酸小檗堿的測定參照文獻[5]方法。

2.1.1 線性關(guān)系考察取約10 mg，105℃干燥5 h的鹽酸小檗堿對照品，精密稱定，加蒸餾水稀釋至刻度，超聲助溶，冷卻至室溫，搖勻，得鹽酸小檗堿儲備液。分別精密吸取鹽酸小檗堿儲備液0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、3.5、4.0 mL，置50 mL量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，得質(zhì)量濃度分別為1.96、3.92、5.88、7.84、11.76、13.72、15.68 μg/mL的鹽酸小檗堿溶液，以蒸餾水為空白，于344 nm處測定吸光度，以質(zhì)量濃度為橫坐標（X），吸光度為縱坐標（Y）進行線回歸，得回歸方程=0.062 1X-0.044，r2=0.999 5，結(jié)果表明鹽酸小檗堿在1.96～15.68 μg/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.1.2 精密度分別取濃度為5.88、11.76、15.68 μg/mL的鹽酸小檗堿溶液，以蒸餾水為空白，于344 nm處測定吸光度5次，高、中、低3個濃度吸光度的RSD分別為0.89%、0.25%、0.50%，精密度良好。

2.1.3 穩(wěn)定性分別取濃度為3.92、7.84、13.72μg/mL的鹽酸小檗堿溶液，于0、1、2、3、4h以蒸餾水為空白，于344 nm處測定吸光度，高、中、低3個濃度吸光度的RSD分別為1.97%、1.17%、0.66%，穩(wěn)定性良好。

2.2 鹽酸小檗堿潛溶比的測定分別配制體積比為5∶5、6∶4、7∶3、8∶2、9∶1的蒸餾水-甘油、蒸餾水-PEG400、蒸餾水-丙二醇溶液，加入過量鹽酸小檗堿，渦旋混合30 min，靜置過夜，次日離心，精密吸取上清液1 mL，稀釋適當倍數(shù)，于344 nm下測定吸光度，外標法測定鹽酸小檗堿的飽和溶解度。結(jié)果可見，隨著多元醇類有機溶劑比例的增加，鹽酸小檗堿的溶解度也呈現(xiàn)增加趨勢，其中水與甘油等比例混合時，鹽酸小檗堿的飽和溶解度最大，達到10.588 mg/mL，因此選用甘油作為潛溶劑較合適，潛溶比為5∶5。以潛溶比為橫坐標，以飽和溶解度為縱坐標，繪制潛溶度圖，見圖1。

圖1 鹽酸小檗堿在不同混合溶劑中的飽和溶解度

2.3 鹽酸小檗堿鼻用凝膠的處方研究參照文獻[6]方法。將卡波姆-980撒入30 mL蒸餾水中，靜置過夜。將甘油與等體積水混合，加入到卡波姆溶液中，滴加10%（V/V）三乙醇胺溶液，攪拌均勻，加蒸餾水定量至50 g。按L9（34）進行正交設(shè)計，見表1。以林可霉素利多卡因凝膠為參比制劑，以旋轉(zhuǎn)式黏度計測定黏度，并用Excel 2003進行方差分析，實驗結(jié)果見表2，方差分析見表3。

正交實驗結(jié)果表明，卡波姆濃度是影響凝膠黏度的主要因素?？ú窛舛仍龃蠛螅ざ入S之增大，但是黏度過大不利于鼻腔內(nèi)涂展。以林可霉素利多卡因凝膠為參比制劑，最終擬定處方卡波姆濃度為0.2%，以三乙醇胺調(diào)pH 6.0～7.0。

2.4 鹽酸小檗堿滴鼻凝膠的制備參照文獻[7]方法。稱取1 g鹽酸小檗堿，置于乳缽中，加入10 g吐溫-80，研均，加入10 g甘油和0.1%卡波姆-980水溶液，滴加10%（V/V）三乙醇胺溶液調(diào)pH 6.0～7.0，加水定量至100 g，攪拌均勻，-0.1 mPa真空脫氣泡12 h。

表1 凝膠處方L9（34）因素水平表

表2 凝膠處方正交實驗結(jié)果

表3 凝膠處方方差分析

2.5 鹽酸小檗堿滴鼻凝膠的體外釋放取1.0 g凝膠，加于截留分子量為10 000的透析袋中，以棉線封口，置于溶出儀轉(zhuǎn)籃中，以蒸餾水為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)籃轉(zhuǎn)速為100 r/min，水溫37℃，每隔5min取樣5mL，同時補充同體積蒸餾水，溶出液以0.45 μm微孔濾膜過濾，以蒸餾水為空白，于344 nm下測定吸光度（Et）。取樣結(jié)束后，將轉(zhuǎn)籃和溶出液轉(zhuǎn)移至1 L燒杯中，加熱沸騰3 min，冷卻至室溫，于344 nm下測定吸光度（E∞）。求算各時間點相對累積溶出率（Et/E∞× 100%），以時間為橫坐標，以相對累積溶出率為縱軸，繪制累積溶出曲線[8-9]，以Excel2003軟件Weibull概率函數(shù)擬合，其Td值為104.8 min，m值為1.676。鹽酸小檗堿鼻用凝膠的累積溶出曲線見圖2。

3 討論

鼻用凝膠主要以水為溶劑，鹽酸小檗堿有一定親水性，但極性仍較小，為了增加鹽酸小檗堿的溶解度，加入了多元醇類潛溶劑，潛溶比測定結(jié)果可知選用甘油較為合適，同時甘油又可作為凝膠的保溫劑。

圖2 鹽酸小檗堿鼻用凝膠的溶出曲線

卡波姆-980是2010年版《中國藥典》最新收載的凝膠類輔料，對卡波姆-980的pH-黏度性質(zhì)尚無文獻報道，因此本課題在處方前研究中考察了不同pH值下卡波姆-980的特性黏度?？ú?980溶液在pH 4～5時即可成為凝膠態(tài)，但卡波姆的濃度增加，成為凝膠態(tài)的pH呈降低趨勢。

參比制劑林可霉素利多卡因凝膠的黏度為2 170 mPa·s，但此參比制劑為外用凝膠，如果要用于鼻腔，則凝膠應(yīng)有一定流動性，并有一定黏度，因此進行處方優(yōu)化時，將滴鼻凝膠的黏度控制在1000～1 200 mPa·s左右。鹽酸小檗堿微溶于水，因此在制備水凝膠時加入潤濕劑吐溫-80，但載藥量不宜過大，否則易有固體顆粒析出。

[1]Zhu FQ,Wu FJ,Ma Y,et al.Decrease in the production of beta-amyloid by berberine inhibition of the experssion of beta-secretaseinHEK293cells[J].BMCNeuroscience，2011, 12:125.

[2]馬麗麗,陳曉紅.小檗堿在神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的應(yīng)用進展[J].新醫(yī)學(xué)，2012,43(7):437-440.

[3]王靜,張艷軍.小檗堿對中樞神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)疾病治療研究進展[J].天津中醫(yī)藥，2011,28(2):173-174.

[4]Charlton ST,Davis SS,Illum L.Evaluation of bioadhesive polymers as delivery systems for nose to brain delivery:in vitro characterisation studies[J].J Control Release，2007, 118(2):225-234.

[5]肖學(xué)鳳,喬曉莉,高嵐,等.黃柏中鹽酸小檗堿的藥代動力學(xué)研究[J].天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2008,27(4):263-265.

[6]王穎,劉志東,曹晴,等.地榆四黃散的提取工藝優(yōu)化及凝膠劑的制備[J].天津中醫(yī)藥，2012,29(2):80-82.

[7]李琳，趙海南，李佳瑋，等.鹽酸小檗堿離子型眼用原位凝膠的研究[J].天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2011,30(4):229-231.

[8]尹忠鵬，龐曉晨，劉志東，等.4種促滲劑對痛寧凝膠中延胡索乙素離體鼠皮透過的研究[J].天津中醫(yī)藥,2013,30(3): 179-181.

[9]劉志東，尹忠鵬，龐曉晨，等.促滲劑對痛寧凝膠在體經(jīng)皮滲透性的影響[J].天津中醫(yī)藥，2013，30（10）：618-620.

Studies on nasal gel of Berberine Hydrochloride

WANG Li-feng1,ZHANG Si-pei2,CAO Ying1,GUO Da-liang2
（1.Experimental Teaching Administration Department,Tianjin University of TCM,Tianjin 300193,China;
2.College of TCM,Tianjin University of TCM,Tianjin 300193,China）

[Objective]To design a kind of nasal gel of berberine and inspect the quality of it in vitro.Nasal administration is a new way to deliver drugs to the brain.The drug can transport into cerebrospinal fluid after nasal drops to treat Neurodegenerative diseases.[Methods]In order to optimize the prescription the orthogonal design was carried out.The experiment used Cabarbopol-980 as gel base,triethanolamine as pH and viscosity adjuster,and glycerin as cosolvent.The release of berberine from nasal gel was determined by UV and the curve was fitted by Weibull model.[Results]The optimum nasal gel was made by Carbopol-980 0.1%,berberine 1%,appearance pH was adjusted to 6.0～7.0,the average viscosity was about 1 200 mPa·s.The release curve of berberine fitted by Weibull showed that Tdwas 104.8 min.[Conclusion]Using bioadhesive material carbopol-980 to make nasal gel of berberine is easy to operate and control.The release of berberine is stable.

berberine hgdrochloride;carbopol；nasal gel;drug release

R285.5

A

1673-9043（2014）01-0036-03

10.11656/j.issn.1673-9043.2014.01.12

2013-09-16）

王麗峰（1980-），女，碩士研究生，主要從事藥物制劑分析方面的工作。

國大亮，E-mail:13920632603@126.com。