易荊麗, 趙永恒, 周毅生, 王 嵩, 林麗微

（廣東藥學院中藥學院, 廣東 廣州 510006）

5，7，3'，4'，5'-五甲氧基黃酮的鎮(zhèn)痛抗炎作用研究

易荊麗, 趙永恒, 周毅生*, 王 嵩, 林麗微

（廣東藥學院中藥學院, 廣東 廣州 510006）

目的 研究 5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黃酮的鎮(zhèn)痛抗炎作用。 方法 本實驗采用熱板法和冰醋酸扭體法觀察鎮(zhèn)痛作用， 采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹法和冰醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性增高法觀察抗炎作用。 結(jié)果 5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黃酮中、 高劑量組均能明顯延遲小鼠舔后足時間 （P＜0.05）， 并能減少冰醋酸引起的小鼠扭體反應(yīng)， 抑制率分別為 50.94%、 64.55%; 且該化合物中、 高劑量組對冰醋酸誘發(fā)小鼠腹腔毛血管通透性增高的抑制率分別為38.81%、 49.70%; 對二甲苯誘發(fā)的小鼠耳廓腫脹有明顯的抑制率分別為 45.00%、 65.27%。 結(jié)論 5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黃酮不具有物理及化學刺激具有鎮(zhèn)痛作用，對急性炎癥有明顯抑制作用。

5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黃酮; 鎮(zhèn)痛; 抗炎

5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黃酮是從豆科蘇木亞科羊蹄甲屬植物龍須藤 Bauhinia championii（ Benth.） Benth.的干燥藤莖中提取分離出的化合物。龍須藤又稱為過崗圓龍、九龍?zhí)?、羊蹄藤、梅花入骨丹等，味甘、微苦，性溫，具有祛風除濕、 行氣活血的功效［1］， 主治風濕痹痛， 中風癱瘓，胃脘脹痛， 跌打損傷， 小兒疳積等癥［2］。 該藥在我國多個少數(shù)民族有悠久的用藥歷史［3］。 目前國內(nèi)外對龍須藤的研究主要集中在化學成分方面［4-7］， 關(guān)于龍須藤的藥效研究鮮見報道，已有的藥效研究主要是用龍須藤的提取物來完成的［8-10］。 本課題旨在考察從龍須藤中分離得到的高 純度 5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黃酮在鎮(zhèn)痛抗炎方面的作用， 為龍須藤的進一步研究提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 實驗動物 清潔級昆明小鼠， 體質(zhì)量 18 ～22 g， 由廣州中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供， 合格證號為 scxk （粵）2008-0020。 動物的 喂養(yǎng)條 件: 清 潔 通風環(huán)境， 相 對濕度（50 ±5）%， 室溫 （23 ±1） ℃， 光照周期為 12 h。

1.2 藥品與試劑 5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黃酮 （按文獻所述方法［11］制備龍須藤乙酸乙酯浸膏， 將得到的浸膏進行反復硅膠、凝膠柱層析，得到目標化合物結(jié)晶并進行1H-NMR、13C-NMR、 IR鑒定）， 純度 96%以上， 臨用時以10%丙二醇生理鹽水溶解。 羅通定片 （四川康福來藥業(yè)集團有限公司， 批號 110501）; 吲哚美辛 （臨汾奇林藥業(yè)有限公司， 批號 1307111）; 生理鹽水 （東莞市普濟藥業(yè)有限公司， 批號 12022902）; 伊文斯藍 （國藥集團化學試劑有限公司生產(chǎn)， 批號 WC201109010）， 冰醋酸、 二甲苯等試劑均為分析純。

1.3 儀器 UV-2450 紫外可見分光光度計 （ 日本島津）; AY120 電子天平 （日本島津）; 打孔器;501 型超級恒溫水浴 （金壇市宏華儀器廠制造）。

2 方法與結(jié)果

2.1 鎮(zhèn)痛作用

2.1.1 小鼠熱板法致痛試驗 取健康雌性小鼠于 （55 ± 0.5）℃熱板上， 選取不跳躍、 5 ～30 s內(nèi)舔后足的小鼠 50只， 隨機分為空白對照組 （10%丙二醇生理鹽水）、 陽性對照組 （劑量以羅通定計算， 0.04 g/kg）、 5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黃酮低、 中、 高 （劑量以 5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黃酮計算， 0.04、 0.08、 0.16 g/kg） 3 個劑量組共 5 組， 每組10 只。 重復2次測其正常痛閾值， 并以平均值作為該鼠給藥前痛閾值。 各組小鼠均灌胃給藥3 d， 每天1次， 給藥劑量 20 mL/kg， 末次給藥 30、 60、 90、 120 min 后分別測小鼠痛閾值。結(jié)果如表1所示，與空白對照組比較，中、高劑量組均能顯著抑制熱板刺激誘導的小鼠疼痛反應(yīng)，且中劑量組持續(xù)時間長。表現(xiàn)為痛閾值升高，與空白對照組、給藥前比較均有統(tǒng)計學意義 （P＜0.05）。

2.1.2 對冰醋酸誘發(fā)的小鼠扭體反應(yīng)的影響 取健康小鼠50 只， 雌雄各半， 分組情況及給藥方法同 “2.1.1” 項。于末次給藥 30 min 后， 每只小鼠均腹腔注射 0.6%冰醋酸（10 mL/kg）。 立即觀察并記錄注射冰醋酸 20 min 內(nèi)各組小鼠出現(xiàn)扭體 （腹部收縮內(nèi)凹、 伸展后肢、 臀部抬高、 蠕行） 的次數(shù)， 并計算各藥抑制率［13］。 結(jié)果如表 2 所示， 5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黃酮中、 高劑量組對冰醋酸引起的小鼠扭體反應(yīng)均有明顯的抑制作用，與空白對照組比較有統(tǒng)計學意義 （P＜0.05）， 表明 5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黃酮對醋酸引起的疼痛有一定的鎮(zhèn)痛作用。

表 1 5，7，3'，4'，5'-五甲氧基黃酮對小鼠熱板法致痛的影響 （， n=10）

表 1 5，7，3'，4'，5'-五甲氧基黃酮對小鼠熱板法致痛的影響 （， n=10）

注:與空白對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01;與給藥前痛閾值比較，△P＜0.05，△△P＜0.01

給藥后不同時間痛閾值/s 30min 60 min 90 min 120 min空白對照組 ——組別 劑量/（g·kg-1）給藥前痛閾值/ s 21.07 ±2.80 22.43 ±5.69 18.58 ±4.47 21.15 ±6.38 18.18 ±5.22低劑量組 0.04 22.32 ±2.87 22.80 ±4.76 24.33 ±5.03 21.50 ±5.53 16.38 ±3.88中劑量組 0.08 21.15 ±2.27 31.30 ±6.92 35.02 ±5.70**△ 34.70 ±5.13*△ 32.83 ±6.70*△高劑量組 0.16 22.88 ±2.31 31.95 ±6.39*△ 36.38 ±6.70**△△ 36.78 ±7.88**△△ 30.28 ±7.88羅通定組 0.04 20.15 ±2.37 36.42 ±7.11**△△ 32.13 ±5.50**△26.55 ±4.30 28.55 ±6.20

表 2 5，7，3'，4'，5'-五甲氧基黃酮對冰醋酸致小鼠疼痛的影響（，n=10）

表 2 5，7，3'，4'，5'-五甲氧基黃酮對冰醋酸致小鼠疼痛的影響（，n=10）

注:與空白對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組 別 劑量 /（ g·kg-1） 扭體次 數(shù) /次 抑 制率 /%空白對照組 —— 28.21 ±4.81——低劑量組 0.04 20.80 ±5.13 26.27中劑量組 0.08 13.84 ±3.29* 50.94高劑量組 0.16 10.00 ±3.17** 64.55羅通定組 0.04 8.13 ±2.1**71.18

2.2 抗炎作用

2.2.1 對二甲苯誘導小鼠耳腫脹的影響 取健康小鼠 50只，雌雄各半，隨機分為空白對照組（10%丙二醇生理鹽水） 、陽 性對照組 （ 劑 量 以 吲 哚 美 辛 計 算 ，0.007 5 g/kg） 、5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黃酮低、中、高（ 劑量以 5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黃酮計算，分別為 0.04、0.08、0.16 g/kg）3 個劑 量組共 5 組，每組 10 只。 陽性藥物僅第 3 天給藥，其余各組均連續(xù)給藥 3 d，每 日 1 次， 末 次 給 藥 60 min 后， 在 小 鼠 右 耳 正 反面均勻涂抹二甲苯 20 μL/只致炎，左耳不涂作為正常耳，30 min 后 脫 頸椎處死 小 鼠，沿耳廓 基 線 剪 下 雙 耳 ，用 直 徑 9 mm的打孔器在左右耳相同位置打下圓耳片，稱量左右耳的質(zhì)量并計算其差值（ 腫脹度） 及抑制率［14］。 結(jié)果 如表 3 所 示，5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黃酮中、高劑量組及陽性對照組均能顯著抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹率，與空白對照組比較有統(tǒng)計學意義（P＜0.05） ，表明 5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黃酮可對抗二甲苯所致的急性炎癥反應(yīng)，具有抗炎作用。

表 3 5，7，3'，4'，5'-五甲氧基黃酮對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響（，n=10）

表 3 5，7，3'，4'，5'-五甲氧基黃酮對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響（，n=10）

注: 與空白對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組 別 劑量 /（ g·kg-1） 腫脹 度 /mg 抑 制率 /%空白對照組 —— 9.30 ±2.60——低劑量組 0.04 7.53 ±2.46 19.00中劑量組 0.08 5.12 ±1.31* 45.00高劑量組 0.16 3.23 ±0.90* 65.27吲哚美辛組 0.007 5 2.30 ±0.80**75.27

2.2.2 小鼠腹腔毛細血管通透性的測定 取健康小鼠 50只， 雌雄各半， 分組情況及給藥方法同 “2.2.1” 項， 于末次給藥 1 h 后， 尾靜脈注射 0.5%伊文斯藍生理鹽水溶液10mL/kg， 5min 后腹腔注射 0.6%冰醋酸生理鹽水溶液 10 mL/kg， 20 min 后脫頸椎處死小鼠， 剖腹， 用 6 m L生理鹽水分數(shù)次沖洗腹腔， 收集沖洗液于10 mL離心管中， 離心，取上清液， 用 UV-2450 紫外可見分光光度計于波長 590 nm處測定吸光度［15］。 結(jié)果如表 4 所示， 與空白對照組比較，5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黃酮中高劑量組能顯著降低冰醋酸所引起的小鼠腹腔毛細血管通透性升高 （P＜0.05）， 顯示了 5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黃酮具有較好的抗炎效果。

表 4 5，7，3'，4'，5'-五甲氧基黃酮對小鼠腹腔毛細血管通透性的影響 （， n=10）

表 4 5，7，3'，4'，5'-五甲氧基黃酮對小鼠腹腔毛細血管通透性的影響 （， n=10）

注: 與空白對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組 別 劑量 /（ g·kg-1） A 抑制 率 /%空白對照組 —— 0.505 ±0.18——低劑量組 0.04 0.324 ±0.13* 35.91中劑量組 0.08 0.309 ±0.15* 38.81高劑量組 0.16 0.254 ±0.16** 49.70吲哚美辛組 0.0075 0.227 ±0.13**55.05

3 討論

本實驗采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹法及冰醋酸致小鼠毛細血管通透性增高兩種急性炎癥模型觀察了 5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黃酮對急性炎癥的實驗性滲出、 腫脹的影響，并采用熱板法及冰醋酸扭體法觀察 5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黃酮對疼痛的抑制作用。

結(jié)果表明， 5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黃酮可抑制炎癥早期的水腫與滲出，同時對化學物質(zhì)引起的小鼠扭體反應(yīng)及熱板法致痛反應(yīng)也有較好的抑制作用。 本實驗為開發(fā) 5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黃酮化合物的臨床應(yīng)用提供了藥理學實驗依據(jù)。

風濕性關(guān)節(jié)炎是一種常見的急性或慢性結(jié)蹄組織炎癥，臨床以關(guān)節(jié)和肌肉游走性酸楚、疼痛為特征，屬變態(tài)反應(yīng)性疾病。炎癥因子在風濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用， 因此 5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黃酮的鎮(zhèn)痛抗炎的作用機制——能否抑制炎癥因子 （如前列腺素、 白三烯等）的產(chǎn)生，阻斷或抑制由它們所介導和激發(fā)的炎癥過程，是否為龍須藤藥材中治療風濕性關(guān)節(jié)炎的主要有效成分還有待進一步研究。

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R285.5

:B

1001-1528（2014）12-2609-03

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.12.038

2013-09-11

易荊麗 （1986—）， 女， 碩士， 主要從事藥物新技術(shù)與新劑型研究。 Tel: （020） 39352168 ， E-mail:yijingli2008@163.com

*通信作者: 周毅生 （1957 —） ， 男， 教授， 碩士生導師， 從事藥物新劑型與新技術(shù)的研究。 Tel: （020 ） 39352168， E-mail:yishzhou @aliyun.com