單 萌, 馬桂芝, 羅 茜, 李 巖, 于富生, 滕 亮, 程雪梅, 王長虹*

（1.新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院, 新疆 烏魯木齊 830011； 2.新疆華圣元醫(yī)藥科技有限公司, 新疆 烏魯木齊830011； 3.新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部, 新疆 烏魯木齊 830011； 4.上海中醫(yī)藥大學(xué)中藥研究所；中藥標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；中藥新資源與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)綜合評(píng)價(jià)國家中醫(yī)藥管理局重點(diǎn)研究室；上海市復(fù)方中藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 上海,201210）

駱駝蓬籽中脂肪酸定量分析的甲酯化條件優(yōu)選

單 萌1, 馬桂芝1, 羅 茜1, 李 巖1, 于富生2, 滕 亮3,4*, 程雪梅4, 王長虹4*

（1.新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院, 新疆 烏魯木齊 830011； 2.新疆華圣元醫(yī)藥科技有限公司, 新疆 烏魯木齊830011； 3.新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部, 新疆 烏魯木齊 830011； 4.上海中醫(yī)藥大學(xué)中藥研究所；中藥標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；中藥新資源與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)綜合評(píng)價(jià)國家中醫(yī)藥管理局重點(diǎn)研究室；上海市復(fù)方中藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 上海,201210）

目的 優(yōu)選駱駝蓬籽中脂肪酸定量分析的甲酯化條件。 方法 以5種脂肪酸 （油酸、 亞油酸、 亞麻酸、 棕櫚酸、花生酸）的總量、甲酯化峰個(gè)數(shù)及百分峰面積的綜合評(píng)分為優(yōu)選指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)分別對4種甲酯化過程進(jìn)行條件優(yōu)選， 并通過橫向比較確定合適的脂肪酸甲酯化條件。 結(jié)果 1%H2SO4-甲醇回流法更適合用于駱駝蓬籽中脂肪酸的甲脂化， 優(yōu)選條件為醇油體積比 4 ∶1， 催化劑與油的體積比 2 ∶1， 反應(yīng)溫度為 80 ℃， 回流時(shí)間為 30 min。 結(jié)論驗(yàn)證試驗(yàn)表明優(yōu)選出的甲酯化工藝穩(wěn)定性好、反應(yīng)時(shí)間短，可作為氣相色譜法的前處理方法，用于駱駝蓬籽中脂肪酸含量測定。

駱駝蓬籽;脂肪酸;甲酯化;正交試驗(yàn)

駱 駝 蓬 （ Peganum harmala L.） 系 蒺 藜 科（Zygophyllaceae）植物， 是維吾爾、 蒙古族民間習(xí)用藥材，已被列入維 吾 爾 藥衛(wèi)生部藥 品 標(biāo) 準(zhǔn)［1］，種子和全草均做藥用，主治咳嗽氣喘、無名腫痛等癥［2］。 駱駝蓬籽脂肪油中脂肪族化合物占絕對優(yōu)勢， 其中脂肪酸量較高［3］。駱駝蓬脂肪酸不但有重要的 經(jīng)濟(jì)價(jià)值， 而 且 具 有鎮(zhèn)痛消炎 的 作 用［3］，具有進(jìn)一步開發(fā)應(yīng)用的前景。對于大多數(shù)植物油中脂肪酸而言，氣相色譜法是其最常用的色譜分析方法［4-5］。 但脂肪 酸 本 身 極 性 大、沸點(diǎn)高， 在300 ℃以內(nèi)不易氣化，氣相色譜分析首先需要對脂肪酸進(jìn)行甲酯化處理， 有利 于氣相 色譜法分離［6-7］。 常用的甲酯化方法分為酸催化、 堿催化兩大類［6］， 各有其優(yōu)缺點(diǎn)， 且使用范圍各不相同［8］。 而文獻(xiàn)和參考資料中使用的酸堿濃度、反應(yīng)時(shí)間等也有差異。因此，測定駱駝蓬籽油中的脂肪酸，選擇甲酯化完全、快捷的甲脂化方法至關(guān)重要。

本實(shí)驗(yàn)以5種脂肪酸 （油酸、亞油酸、 亞麻酸、棕櫚酸、花生酸）的總含有量、甲酯化峰個(gè)數(shù)及百分峰面積為指標(biāo)計(jì)算綜合評(píng)分，采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分別對 4 種甲酯化方法 （ KOH-甲醇法、BF3-甲醇法、 NaOH-甲醇法及 1%H2SO4-甲醇回流法）進(jìn)行了甲酯化條件的優(yōu)選，確定了適合駱駝蓬籽中脂肪酸含量測定的甲酯化條件，為駱駝蓬籽中脂肪酸的定量分析奠定基礎(chǔ)。

1 試劑材料與儀器

1.1 試劑材料 駱駝蓬籽 （采自新疆烏魯木齊西山; 批號(hào) 120820， 上海中醫(yī)藥大學(xué)中藥研究所王長虹研究員鑒定）; 亞油酸甲脂對照品 （購自 AccuStandard， Inc.，純度 99.4%以上， 批號(hào) 23139）;亞麻酸甲脂對照品 （ 購自 AccuStandard，Inc.， 純度 99.0%以上， 批號(hào) 23038）; 油酸甲脂對照品（ 購 自 AccuStandard， Inc.， 純 度 100%， 批 號(hào)22810）; 花生酸甲酯對照品 （ 購自 AccuStandard，Inc.， 純度 99.5%以上，批號(hào) 22747） 棕櫚酸甲脂對照品 （購自 AccuStandard， Inc.， 純度 99.0%以上， 批號(hào) 5920）; 石油醚 （60 ～90 ℃， 天津富宇精細(xì)化工有限公司， 批號(hào) 20111005）; 甲醇 （天津富宇精細(xì)化工有限公司， 批號(hào) 20120314）; 正庚烷（天津富宇精細(xì)化工有限公司，批號(hào) 20110508）; NaOH （天津市盛奧化學(xué)試 劑有限 公司， 批號(hào)20111203）;14% 三 氟 化 硼 甲 醇 溶 液 （Shanghai ANPEL Scientific Instrument Co， Ltd. 批 號(hào)4.110056.0500）;NaCl（天津市福晨化學(xué)試劑廠，批號(hào) 20121220）;H2SO4（成都市科龍化工試劑廠，批號(hào):20120926）; 無水 Na2SO4（天津市天達(dá)凈化材料精細(xì)化工廠， 批號(hào) 121025）， 以上試劑均為分析純。

1.2 儀器 氣相色譜儀 （GC-2010， 日本島津）;氮?dú)淇找惑w機(jī) （NHA-500， 北京中惠普分析技術(shù)研究所）; 電子天平 （BS110S， 北京賽多利斯天平有限公司， d=0.01 mg）; 恒溫水浴鍋 （ HWS-24，上海一恒科技有限公司）;索氏提取器。

2 方法和結(jié)果

2.1 優(yōu)化指標(biāo) 以 5 種脂肪酸 （油酸、 亞油酸、亞麻酸、棕櫚酸、花生酸）的總含有量、甲酯化的峰個(gè)數(shù)、百分峰面積的綜合評(píng)分為優(yōu)化指標(biāo)。其中，峰個(gè)數(shù)主要是根據(jù)分離度來確定，分離度大于1.5 的峰計(jì)作一個(gè)有效峰; 每個(gè)峰的百分面積為扣除溶劑峰后的百分面積。按下式計(jì)算綜合評(píng)分。

中五種脂肪酸量之和的最大值”、 “試驗(yàn)中甲酯化峰個(gè)數(shù)的最大值”、 “試驗(yàn)中百分峰面積最大值”均為四種甲酯化方法各自所能達(dá)到的最大值。

2.2 外標(biāo)一點(diǎn)法測定五種脂肪酸的量

2.2.1 氣相色譜分析條件 檢測條件:PEG-20M（30 m×0.25 mm×0.25 μm） 彈性石英毛細(xì)管柱;載氣為高純氦氣 （99.99%）; 體積流量 1 mL/min，進(jìn)樣口溫度 250 ℃; 程序升溫: 色譜柱初始溫度140.0 ℃ （保持 2.00 min） ， 以 7.5 ℃ /min 升溫速率升至 170 ℃ （保持 1.0 min）， 以 2 ℃ /min 升溫速率升至 215 ℃，保持 12.0 min; 以 2 ℃ /min 升溫至 240 ℃ （保持 5.00 min）， 分流比為 50 ∶1，進(jìn)樣量為1.00 μL。 在上述色譜條件下， 5 種脂肪酸甲酯化物和供試品中其它組分色譜峰可達(dá)基線分離且分離度良好。

2.2.2 混合對照品貯備液的配制 分別精密稱取亞油酸甲脂 6.426 mg、 亞麻酸甲酯 1.015 mg、 油酸甲酯 2.080 mg、 花生酸甲酯 1.135 mg、 棕櫚酸甲酯 1.208 mg置于 10 mL量瓶中， 加正庚烷溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成含上述對照品依次為0.642 6、 0.101 5、 0.208 0、 0.113 5、 0.120 8 mg/mL的混合對照品溶液。

2.2.3 脂肪油提取及測定 稱取干燥至恒定質(zhì)量的駱駝蓬籽 （20 目）20 g， 置于索氏提取器中，加入120 mL石油醚， 80 ℃水浴回流 6 h， 提取液備用。

脂肪酸提取物按不同甲酯化條件甲酯化后，按“2.2.1” 項(xiàng)進(jìn)樣、 測定， 按外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算 5 種脂肪酸的總含量。

2.3 正交試驗(yàn)優(yōu)選 4 種甲酯化方法的甲酯化條件

文獻(xiàn)調(diào)研與預(yù)試驗(yàn)均表明影響油脂與甲醇親核酯交換催化反應(yīng)體系的主要因素為催化劑與油的體積比、醇油比、反應(yīng)溫度、反應(yīng)時(shí)間。本實(shí)驗(yàn)以綜合評(píng)分法為優(yōu)選指標(biāo)， 采用 L9（34）重復(fù)正交法考察以上影響因素對指標(biāo)的影響，并確定其甲酯化條件。2.3.1 BF3-甲醇回流法

2.3.1.1 甲酯化過程 吸取駱駝蓬籽脂肪油10.00 mL置 于 錐 形 瓶 中， 加 入 NaOH-甲 醇 溶 液（0.5 mol/L） 及沸石，水浴回流， 用移液管從上端加入 14%三氟化硼甲醇溶液于沸騰的溶液中， 繼續(xù) 煮 沸 2 min， 從 冷 凝 管 頂 端 加 入 正 庚 烷 約8.0 mL，繼續(xù)煮沸 1 min， 停止加熱， 冷卻至室溫后取下冷凝管［9］。 加入少量 NaCl飽和水溶液并輕搖錐形瓶數(shù)次， 繼續(xù)加入 NaCl飽和水溶液， 吸取上層液， 加入 3 g無水 Na2SO4， 過濾， 按 “2.2.1”項(xiàng)色譜條件測定5種脂肪酸的總含量，同時(shí)對其色譜圖進(jìn)行分析，計(jì)算其綜合評(píng)分。

2.3.1.2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及其結(jié)果 采用 L9（34）重復(fù)正交法優(yōu)選甲酯化條件。試驗(yàn)因素水平表見表1， 試驗(yàn)安排及正交結(jié)果見表 2， 直觀分析見表 2，方差分析結(jié)果見表3。

表1 因素水平Tab.1 Factors and levels

表 2 L9（34） 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案及結(jié)果 （n=27）Tab.2 L9（34） orthogonal design and its results（ n=27）

表3 綜合評(píng)分方差分析Tab.3 Variance analysis of com prehensive scores

直觀分析和方差分析均表明各因素對脂肪酸甲脂化的影響因素順序?yàn)锳＞B＞C＞D， 即醇油比 ＞催化劑與油的體積比＞反應(yīng)溫度＞回流時(shí)間; 最佳工藝為 A1B3C3D3，即醇油比 2 ∶1， 催化劑 ∶油為1.5 ∶1.0， 反應(yīng)溫度為 80 ℃， 回流時(shí)間為 60 min。方差分析結(jié)果表明4個(gè)因素對脂肪油的甲酯化效果均有顯著性影響 （P＜0.01）。

2.3.1.3 驗(yàn)證試驗(yàn) 取三批駱駝蓬籽脂肪油， 按優(yōu)選條件進(jìn)行甲酯化并測定其脂肪酸量，5種脂肪酸總質(zhì)量分?jǐn)?shù) （41.09 ±1.19） mg/g， 峰個(gè)數(shù)為（38.67 ±0.58） 個(gè)， 百 分 峰 面 積 為 （5.47% ± 0.07%）， 計(jì)算其綜合評(píng)分，所得結(jié)果為 100.03 ± 2.28。 驗(yàn)證試驗(yàn)表明優(yōu)選工藝穩(wěn)定、 可行。

2.3.2 KOH-甲醇回流法

2.3.2.1 甲 酯 化 過 程 取 駱 駝 蓬 籽 脂 肪 油10.00 mL， 置于 100 mL錐形瓶中，加入甲醇，充分混勻， 再加入 KOH（1 mol/L） 甲醇催化劑及沸石， 回流， 移至分液漏斗［10］。 用10 m L正庚烷沖洗燒瓶并將其并入分液漏斗中，加入 10 mL蒸餾水，搖勻使分層，甲酯化進(jìn)入上層液 （正庚烷層），分離出正庚烷層， 并用無水 Na2SO4干燥， 濾過， 按“2.2.1” 項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣并測定 5 種脂肪酸的量，同時(shí)對其色譜圖進(jìn)行分析，計(jì)算其綜合評(píng)分。

2.3.2.2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及其結(jié)果 采用 L9（34）重復(fù)正交法優(yōu)選甲酯化條件。試驗(yàn)因素水平表見表4， 試驗(yàn)安排及正交結(jié)果見表 5， 直觀分析見表 5，方差分析結(jié)果見表6。

表4 因素水平Tab.4 Factors and levels

表 5 L9（34） 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案及結(jié)果 （n=27）Tab.5 L9（34） orthogonal design and its results（ n=27）

表6 綜合評(píng)分方差分析Tab.6 Variance analysis of com prehensive scores

直觀分析和方差分析表明各因素對脂肪酸甲酯化的影響因素順序?yàn)镃＞B＞A＞D，即反應(yīng)溫度 ＞催化劑與油的體積比＞醇油比＞回流時(shí)間; 最佳工藝為 A2B1C1D1，即醇油比 2 ∶1， 催化劑 ∶油為1 ∶1， 反應(yīng)溫度為 40 ℃， 回流時(shí)間為 30 min。 方差分析結(jié)果表明醇油比對脂肪油的甲酯化效果均有顯著性影響 （P＜0.05）。

2.3.2.3 驗(yàn)證試驗(yàn) 取 3 批駱駝蓬籽脂肪油， 按優(yōu)選條件進(jìn)行甲酯化并測定其脂肪酸量，5種脂肪酸總質(zhì)量分?jǐn)?shù) （21.89 ±0.41） mg/g， 峰個(gè)數(shù)為（46.67 ±0.58 ） 個(gè)， 百 分 峰 面 積 為 4.46% ±0.04%， 計(jì)算其綜合評(píng)分， 所得結(jié)果為 102.09 ± 1.39。 驗(yàn)證試驗(yàn)表明優(yōu)選工藝穩(wěn)定、 可行。

2.3.3 NaOH-甲醇回流法

2.3.3.1 甲酯化過程 取 10.00 m L駱駝蓬籽脂肪油置于 100 m L錐形瓶中， 加入甲醇， 充分混勻，再加入 NaOH （0.5 mol/L） 甲醇溶液及沸石， 回流， 移至分液漏斗［3］。 用 10 mL正庚烷沖洗燒瓶并將其并入分液漏斗中， 加入20 mL蒸餾水， 搖勻使分層， 甲酯化物進(jìn)入上層液 （正庚烷層）， 分離出正庚烷層， 并用無水 Na2SO4干燥，濾過， 按“2.2.1” 項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣并測定 5 種脂肪酸的量，同時(shí)對其色譜圖進(jìn)行分析，計(jì)算其綜合評(píng)分。

2.3.3.2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及其結(jié)果 采用 L9（34）重復(fù)正交法優(yōu)選甲酯化條件。試驗(yàn)因素水平表見表7， 試驗(yàn)安排及正交結(jié)果見表 8， 直觀分析見表 8，方差分析結(jié)果見表9。

表 7 L9（34） 因素水平Tab.7 Factors and levels

表 8 L9（34） 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案及結(jié)果 （n=27）Tab.8 L9（34） orthogonal test and its results（ n=27）

表9 綜合評(píng)分方差分析Tab.9 Variance analysis of comprehensive scores

直觀分析和方差分析表明各因素對脂肪酸甲酯化的影響因素順序?yàn)锳＞C＞B＞D， 即醇油比 ＞反應(yīng)溫度 ＞催化劑與油的體積比 ＞回流時(shí)間; 最佳工藝 為 A2B1C2D2， 即 醇 油 比 4 ∶1， 催 化 劑 ∶油 為1 ∶1， 反應(yīng)溫度為 60 ℃， 回流 時(shí) 間為 40 min。 方差分析結(jié)果表明4個(gè)因素對脂肪油的甲酯化效果均有顯著性影響 （P＜0.01）。

2.3.3.3 驗(yàn)證試驗(yàn) 平行移取 3 份駱駝蓬籽脂肪油，按優(yōu)選條件進(jìn)行甲酯化并測定其脂肪酸量，5種脂肪酸總質(zhì)量分?jǐn)?shù) （28.95 ±0.56） mg/g， 峰個(gè)數(shù)為 （54.67 ±0.58） 個(gè)， 百分峰面積為 5.62% ± 0.05%， 計(jì)算其綜合評(píng)分， 所得結(jié)果為 98.67 ± 1.48。 驗(yàn)證試驗(yàn)表明優(yōu)選工藝穩(wěn)定、 可行。

2.3.4 1%H2SO4-甲醇回流法

2.3.4.1 甲酯化過程 取 10.00 mL駱駝蓬籽脂肪油置于100 mL錐形瓶中， 加入一定量的甲醇，充分混勻， 再加 1%H2SO4-甲醇于水浴鍋回流一定時(shí)間［11］， 冷卻， 加入 10 mL正庚烷， 振搖， 加蒸餾水 20 mL， 再加入無水 Na2SO4干燥， 取上清液，濾過， 按 “2.2.1” 項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣并測定 5 種脂肪酸的量，同時(shí)對其色譜圖進(jìn)行分析，計(jì)算其綜合評(píng)分。

2.3.4.2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及其結(jié)果 本實(shí)驗(yàn)采用L9（34）重復(fù)正交法優(yōu)選甲酯化條件。 試驗(yàn)因素水平表見表10， 試驗(yàn)安排及正交結(jié)果見表 11， 直觀分析見表11， 方差分析結(jié)果見表 12。

表 10 因素水平Tab.10 Factors and levels

表 11 L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案及結(jié)果（n=27）Tab.11 L9（34） orthogonal test and its results（ n=27）

表 12 綜合評(píng)分方差分析Tab.12 Variance analysis of com prehensive scores

直觀分析結(jié)果表明各因素對脂肪酸甲酯化的影響因素順序?yàn)?C＞B＞A＞D， 即反應(yīng)溫度 ＞催化劑與油的體積比 ＞醇油比 ＞回流時(shí)間;最佳工藝為A2B2C3D1， 即醇油比 4 ∶1， 催化劑 ∶油為 2 ∶1，反應(yīng)溫度為 80 ℃， 回流時(shí)間為 30 min。 方差分析結(jié)果表明3個(gè)因素對脂肪油的甲酯化效果均有顯著性影響 （P＜0.05）。

2.3.4.3 驗(yàn)證試驗(yàn) 取 3 批駱駝蓬籽脂肪油， 按優(yōu)選條件進(jìn)行甲酯化并測定其脂肪酸總含量，5種脂肪酸總質(zhì)量分?jǐn)?shù) （42.70 ±0.84） mg/g， 峰個(gè)數(shù)為 （47.67 ±0.58） 個(gè)， 百分峰面積為 （8.93% ± 0.01%）， 計(jì)算其綜合評(píng)分， 所得結(jié)果為 98.60 ± 1.38。 驗(yàn)證試驗(yàn)表明優(yōu)選工藝穩(wěn)定、 可行。

2.3.5 不同甲酯化方法的驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果比較分析

采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件 SPSS 13.0 將 4 種甲酯化條件下測定的驗(yàn)證試驗(yàn)的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析， 見表 13。1%H2SO4-甲醇回流法與其他 3 種方法比較采用Tukey法， P ＜0.05 認(rèn)為差異有顯著性，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表 13 驗(yàn)證試驗(yàn)Tab.13 Validation test

通過對以上4種甲酯化方法優(yōu)選條件的驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較， 可見 1%H2SO4-甲醇回流法更適合用于駝蓬籽中脂肪酸的甲酯化，其優(yōu)選條件為:醇油比 4 ∶1， 催化劑 ∶油為 2 ∶1， 反應(yīng)溫度為80 ℃， 回流時(shí)間為 30 min。

3 小結(jié)與討論

3.1 綜合評(píng)分體系的建立 本實(shí)驗(yàn)旨在建立一種可用于測定駱駝蓬籽中脂肪酸總含量的氣相色譜方法，需要對其關(guān)鍵的前處理步驟——甲酯化進(jìn)行條件優(yōu)選。該氣相色譜方法不僅需要準(zhǔn)確對5種脂肪酸的總含量進(jìn)行定量測定，同時(shí)需要盡可能的獲得更多的色譜峰信息，以期可以兼顧定量與定性、局部與全部信息。因此，在建立綜合評(píng)分體系時(shí)不僅考慮了5種已知脂肪酸的總含量，同時(shí)考察了甲酯化峰的個(gè)數(shù)和百分峰面積。由于5種脂肪酸是駱駝蓬脂肪油的主要成分，定量測定結(jié)果客觀、準(zhǔn)確，所以給5種已知脂肪酸的含量賦予 60 分的權(quán)重，甲酯化峰的個(gè)數(shù)和百分峰面積分別給與 20分的權(quán)重。

3.2 甲酯化方法及其條件的確定 橫向比較結(jié)果表明 1%H2SO4-甲醇回流法更適合用于駱駝蓬籽中脂肪酸的甲脂化，5種定量的脂肪酸量最高，說明甲酯化程度高于其它3種方法;且所占整個(gè)圖譜的百分峰面積也是最大的，將其氣相圖譜進(jìn)行比較，峰個(gè)數(shù)也多于其它3種方法;并且該法反應(yīng)時(shí)間短，方法快捷、 簡便。 因此， 確定 1%H2SO4-甲醇回流法作為駱駝蓬脂肪酸的甲酯化方法。

3.3 甲酯化率差異的原因分析 通過對酸、 堿催化的兩類常用的甲酯化方法進(jìn)行研究對比發(fā)現(xiàn)，堿法 KOH-甲醇回流法和 NaOH-甲醇回流法甲酯化程度相似， 且其甲酯化效率高于 BF3-甲醇回流法。而酸法 H2SO4-甲醇溶液法與堿法存 在 較大差異，甲酯化程度明顯高于堿法 KOH-甲醇回流法和NaOH-甲醇回流法。 這可能是因?yàn)閴A法甲酯化只適合于脂肪油中的結(jié)合脂肪酸， 而 1%H2SO4-甲醇酯化既適合于游離脂肪酸，又適合于結(jié)合脂肪酸，甲酯化適應(yīng)面廣。

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Selection ofmethyl esterification for quantitative analysis of fatty acids from the Seeds of Peganum harmala

SHAN Meng1， MA Gui-zhi1， LUO Xi1， LI Yan1， YU Fu-sheng2， TENG Liang3，4*， CHENG Xue-mei4， WANG Chang-hong4*
（1.College of Pharmacy， Xinjiang Medical University， Urumqi 830011， China;2.Xinjiang Huashengyuan Medical Technology Co.， Ltd.， Urumqi 830011， China;3.Pharmacy Depatment， TheFisrt Hospital Affiliated to Xinjiang MedicalUniversity， Urumqi830011， China;4.TheMOEKey Laboratory for Standardization of ChineseMedicinesand The SATCM Key Laboratory for New Resourcesand Quality Evaluation of Chinese Medicines， Instituteof Chinese Materia Medica， Shanghai University of Traditional Chinese Medicine， Shanghai Key Laboratory of Complex Prescription， Shanghai201210， China）

AIM To select the conditions ofmethyl esterification for the quantitative analysis of fatty acids from the seeds of Peganum harmala.METHODS A comprehensive scoring was taken， based on the total content of five fatty acids（ oleic acid， linoleic acid， linolenic acid， palmitic acid， and arachic acid） ， the peak num-bers and area percentage of peaks， with the orthogonal design employed to compare and figure out the optimal conditions of four differentmethyl esterifications for fatty acids.RESULTS 1%sulfuric acid-methanol refluxmethod was determined as a satisfyingmethyl esterification， which consisted of 4 ∶1 volume ratio ofmethanol to oil，2 ∶1 volume ratio of catalyst to oil， 80 ℃ reaction temperature， and 30 min reaction time.CONCLUSION The validation tests indicate that the optimum process is stable and speedy， and it lays a foundation for gas chromatography of fatty acids in P.harmala.

seeds of Peganum harmala;fatty acids;methyl esterification;orthogonal test

R284.1

:A

1001-1528（2014）12-2497-07

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.12.012

2014-05-29

國家自然基金 /新疆聯(lián)合基金重點(diǎn)項(xiàng)目 （ U1130303）; 上海市博士后基金 （13R21415800）; 烏魯木齊市科技攻關(guān)計(jì)劃（G121320004）

單 萌 （1989—）， 女， 碩士生， 研究方向: 中藥民族藥新藥研究。 Tel:15276726275， E-mail:shanmeng0206@163.com

*通信作 者: 滕 亮 （ 1975—） ， 博 士， 教 授， 碩 士 生 導(dǎo) 師， 研 究 方 向: 中 藥 民 族 藥 新 藥 研 究。 Tel: （ 0991 ） 4362483， E-mail: tl750212@126.com王長虹 （1964—）， 博士， 研究員， 博士生導(dǎo)師， 研究方向: 中藥新制劑與體內(nèi)過程研究。 Tel: （021） 51322511， E-mail:wchcxm@hotmail.com