高 森， 李正翔， 王志濤， 房志仲

（1.天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院， 天津 300052； 2.天津醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院藥劑學(xué)教研室，天津市臨床藥物關(guān)鍵技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 天津 300070）

九龍化風(fēng)丸中升麻素苷、 5-O-甲基維斯阿米醇苷、 羌活醇、 異歐前胡素和細(xì)辛脂素的 HPLC梯度洗脫法測(cè)定

高 森1， 李正翔1， 王志濤1， 房志仲2*

（1.天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院， 天津 300052； 2.天津醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院藥劑學(xué)教研室，天津市臨床藥物關(guān)鍵技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 天津 300070）

目的 采用高效液相梯度洗脫法測(cè)定九龍化風(fēng)丸 （防風(fēng)、 羌活、 細(xì)辛、 大黃、 桔梗等） 中升麻素苷、 5-O-甲基維斯阿米醇苷、 羌活醇、 異歐前胡素和細(xì)辛脂素的量。 方法 Hypersil C18色譜柱 （4.6 mm×150 mm， 5 μm） ， 體積流量 0.9 mL/min， 升麻素苷和 5-O-甲基維斯阿米醇苷的色譜條件， 流動(dòng)相 A為甲醇-乙腈 （2 ∶1）， 流動(dòng)相 B為 0.5%磷酸溶液， 檢測(cè)波長(zhǎng) 254 nm。 羌活醇和異歐前胡素的色譜條件， 流動(dòng)相 A為乙腈， 流動(dòng)相 B為 0.1%醋酸水溶液， 檢測(cè)波長(zhǎng) 310 nm， 細(xì)辛脂素的色譜條件， 流動(dòng)相為乙腈-甲醇 （85 ∶15）， 檢測(cè)波長(zhǎng) 286 nm。 結(jié)果 升麻素苷和 5-O-甲基維斯阿米醇苷分別在 0.014 6 ～0.292 0 μg（r=0.999 1）、 0.010 8 ～0.216 0 μg（r=0.999 3） 范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系， 平均加樣回收率分別為 97.55%、 97.73%， RSD（n=6） 分別為 1.46%、 1.18%； 羌活醇和異歐前胡素分別在 0.017 4 ～0.348 0 μg（r=0.999 3）、 0.012 8 ～0.256 0 μg（r=0.999 7） 范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系， 平均加樣回收率分別為 97.62%、 98.11%， RSD （n=6） 分別為 1.43%、 1.39%； 細(xì)辛脂素在 0.012 4 ～0.248 0 μg（r=0.999 2） 范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積線性關(guān)系良好， 平均加樣回收率為 97.65%， RSD （ n=6） 為1.24%。 結(jié)論 該方法測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確、 靈敏、 重復(fù)性好。

九龍化風(fēng)丸； 升麻素苷； 5-O-甲基維斯阿米醇苷； 羌活醇； 異歐前胡素； 細(xì)辛脂素； 梯度洗脫法

九龍化風(fēng)丸為中藥復(fù)方制劑，源于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十一冊(cè)，由防風(fēng)、羌活、細(xì)辛、大黃、桔梗等二十味藥物組成。具有鎮(zhèn)痙熄風(fēng)、開竅豁痰的功效，可用于小兒急驚風(fēng)、癲癇、熱病抽搐、 時(shí)氣瘴瘧等癥 的治療［1-3］。 原質(zhì) 量標(biāo)準(zhǔn)未對(duì)方中的任何藥味進(jìn)行成分定量測(cè)定，為保證產(chǎn)品質(zhì)量，確保臨床療效，本實(shí)驗(yàn)采用高效液相梯度洗脫法對(duì)防風(fēng)中升麻素苷、 5-O-甲基維斯阿米醇苷和羌活中羌活醇、異歐前胡素以及細(xì)辛中細(xì)辛脂素進(jìn)行測(cè)定方法研究，為完善該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)，能有效控制產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量，確保人民用藥安全有效。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確、可靠、方便、快速。

1 試藥與儀器

高效液相色譜儀 （日本島津 LC-10ATVP型，島津自動(dòng)進(jìn)樣器 SIL-10ADVP）； ANASTAR色譜數(shù)據(jù)工作站； SPD-1OAVP紫外可見檢測(cè)器； 升麻素苷對(duì)照品 （批號(hào)為 111522-201008）、 5-O-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品 （批號(hào)為 111523-201007）、 羌活醇對(duì)照品 （批號(hào)為 111820-201102）、 異歐前胡素對(duì)照品 （批號(hào)為 110827-200407） 和細(xì)辛脂素對(duì)照品 （批號(hào)為 111889-201001） 均購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院； 九龍化風(fēng)丸 （每丸重 2.2g； 批號(hào)為130510，130513， 130527） 購(gòu)于云南騰藥制藥股份有限公司； 磷酸 （分析純， 廣州化學(xué)試劑二廠）；冰醋酸 （色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）； 甲醇、乙腈 （色譜純， 天津市康科德科技有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 升 麻 素 苷 和 5-O-甲 基 維 斯 阿 米 醇 苷 的測(cè)定［4-9］

2.1.1 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性 Hypersil C18色譜柱 （4.6 mm×150 mm， 5 μm）； 流動(dòng)相 A為甲醇-乙腈 （2 ∶1）， 流動(dòng)相 B為 0.5%磷酸溶液， 梯度洗脫 （0 ～28 min， 65%A， 28 ～48 min， 65% →40%A， 48 ～60 min， 40%A）； 檢測(cè)波長(zhǎng) 254 nm；體積流量為 0.9 mL/min。 在此條件下升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷與其他組分分離效果良好，以升麻素苷計(jì)理論塔板數(shù)應(yīng)不低于3 500。

2.1.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 分別取升麻素苷對(duì)照品和 5-O-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品適量， 加 70%甲醇溶解制成每 1 mL含 0.04 mg的溶液， 在 200 ～400 nm波長(zhǎng)處進(jìn)行紫外掃描， 結(jié)果升麻素苷對(duì)照品和 5-O-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品均在 253 nm處有最大吸收， 同時(shí)參考 《中國(guó)藥典》 2010 年版防風(fēng)藥材含量測(cè)定項(xiàng)下檢測(cè)波長(zhǎng) 254 nm， 故將檢測(cè)波長(zhǎng)定為 254 nm。

2.1.3 對(duì)照品混合溶液的制備 精密稱取升麻素苷對(duì)照品和 5-O-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品各適量，加 70%甲醇制成對(duì)照品混合溶液 （升麻素苷為0.014 6 mg/mL， 5-O-甲基維斯阿米醇苷為 0.010 8 mg/mL）。

2.1.4 供試品溶液的配制 取本品適量， 剪碎，混勻， 取約 5.0 g， 精密稱定， 置具塞錐形瓶中，加 70%甲醇 50 mL，超聲處理 （300 W， 30 kHz）30 min，用 70%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量， 搖勻， 過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.1.5 陰性對(duì)照溶液的配制 按九龍化風(fēng)丸處方比例稱取適量除防風(fēng)的其余藥味，按九龍化風(fēng)丸的前處理和制劑生產(chǎn)工藝制成缺防風(fēng)的陰性樣品，按照上述供試品溶液的配制方法制成缺防風(fēng)的陰性對(duì)照溶液。

2.1.6 線性關(guān)系考察 精密吸取對(duì)照品混合溶液1、 5、10、15、 20 μL， 按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)， 升麻素苷、 5-O-甲基維斯阿米醇苷量為橫坐標(biāo)分別繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程。 升麻素苷 Y=4.389 1 ×106X-724.3， r= 0.999 1； 5-O-甲 基 維 斯 阿 米 醇 苷 Y=3.157 3 × 106X+376.4， r=0.999 3。 結(jié)果表明升麻素苷在0.014 6 ～0.292 0 μg進(jìn)樣量與峰面積線性關(guān)系良好； 5-O-甲基維斯阿米醇苷在 0.010 8 ～0.216 0 μg進(jìn)樣量與峰面積線性關(guān)系良好。

2.1.7 陰性對(duì)照試驗(yàn) 分別精密吸取 10 μL的供試品溶液、對(duì)照品溶液及陰性對(duì)照溶液，按“2.1.1” 項(xiàng)的色譜條件進(jìn)行色譜分析，結(jié)果供試品溶液色譜中， 在與升麻素苷對(duì)照品和 5-O-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品相同保留時(shí)間處有吸收峰，而陰性對(duì)照溶液在相同保留時(shí)間處未顯吸收峰，見圖1。

2.1.8 精密度試驗(yàn) 取對(duì)照品混合溶液重復(fù)進(jìn)樣6 次， 按 “2.1.1” 項(xiàng)的色譜條件測(cè)定升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷的峰面積， 結(jié)果表明， 儀器具有良好的精密度， 升麻素苷和 5-O-甲基維斯阿米醇苷的 RSD分別為 0.68%、 0.72%。

2.1.9 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品， 按上述方法制備 6 份供試品溶液， 分別測(cè)定， 升麻素苷和 5-O-甲基維斯阿米醇苷的 RSD分別為 0.91%、 0.58%。結(jié)果表明本方法具有良好的重復(fù)性。

2.1.10 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液， 在放置0、 1、 2、 4、 6、 8 h 后精密吸取10 μL進(jìn)樣， 測(cè)定其峰面積值， 升麻素苷和 5-O-甲基維斯阿米醇苷的 RSD分別為0.66%、 0.89%， 供試品溶液在8 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.1.11 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含有量 （升麻素苷 0.143 mg/g、 5-O-甲 基 維 斯 阿 米 醇 苷 0.097 mg/g） 的同一批樣品適量， 剪碎， 混勻， 取約 2.5 g， 精密稱定， 置具塞錐形瓶中， 分別精密加入對(duì)照品 混 合 溶 液 25 m L、 70% 甲 醇 25 mL， 按“2.1.4” 項(xiàng)方法制成加樣供試品試液。精密吸取加樣供試液 10 μL， 按上述測(cè)定方法測(cè)定其峰面積，計(jì)算回收率，結(jié)果表明本方法回收率良好，見表1。

圖 1 升麻素苷和 5-O-甲基維斯阿米醇苷的 HPLC圖Fig.1 HPLC chromatograms of prim-O-glucosylcim ifugin and 4'-O-β-D-glucosyl-5-O-meth-ylvisamm ioside

表 1 升麻素苷和 5-O-甲基維斯阿米醇苷回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab.1 Results of recovery tests for prim-O-glucosylcim ifugin and 4'-O-β-D-glucosyl-5-O-methylvisamm ioside

2.2 羌活醇和異歐前胡素的測(cè)定［10-18］

2.2.1 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性 Hypersil C18色譜柱 （4.6 mm×150 mm， 5 μm）； 流動(dòng)相 A為乙腈，流動(dòng)相 B為 0.1%醋酸水溶液， 梯度洗脫 （0 ～22 min， 30.0%A； 22 ～38 min， 30.0% →54.0%A；38 ～55 min， 54.0%A）； 體積流量為 0.9 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng) 310 nm。 在此條件下羌活醇和異歐前胡素與其他組分基線分離良好，以羌活醇計(jì)理論塔板數(shù)應(yīng)不低于 3 000。

2.2.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 分別取羌活醇和異歐前胡素對(duì)照品適量， 加甲醇溶解制成每 1 m L含 0.10 mg的溶液， 按紫外-可見分光光度法在 200 ～400 nm波長(zhǎng)處進(jìn)行紫外掃描， 結(jié)果羌活醇和異歐前胡素對(duì)照品分別在 310 nm、 312 nm處有最大吸收，同時(shí)參考 《中國(guó)藥典》 2010 年版羌活藥材含量測(cè)定項(xiàng)下檢測(cè)波長(zhǎng) 310 nm， 故檢測(cè)波長(zhǎng)定為 310 nm。

2.2.3 對(duì)照品混合溶液的制備 精密稱取羌活醇和異歐前胡素對(duì)照品適量， 置 50 mL量瓶中， 加85%甲醇溶解后稀釋至刻度， 搖勻， 即得對(duì)照品混合溶液 （羌活醇為 0.017 4 mg/mL和異歐前胡素0.012 8 mg/mL）。

2.2.4 供試品溶液的制備 取本品適量，剪碎，混勻， 取約 3.0 g， 精密稱定， 置具塞錐形瓶中，精密加入85%甲醇50 mL， 稱重， 超聲處理 （功率300W， 頻率 50 kHz） 40 min， 放冷，再稱定質(zhì)量， 用 85%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量， 搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.5 陰性對(duì)照溶液的制備 按九龍化風(fēng)丸處方比例稱取適量除羌活的其余藥味，按九龍化風(fēng)丸的前處理和制劑生產(chǎn)工藝制成缺羌活的陰性樣品，按照上述供試品溶液的配制方法制成缺羌活的陰性對(duì)照溶液。

2.2.6 線性關(guān)系考察 分別精密吸取對(duì)照品混合溶液 1、 5、 10、15、 20 μL， 按 “2.2.1” 項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行梯度洗脫，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，羌活醇、異歐前胡素量為橫坐標(biāo)分別繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線， 回歸方程為羌活醇 Y=2.656 7 ×106X-537.5， r=0.999 3； 異歐前胡素 Y=3.587 1 × 106X+671.9， r=0.999 7。 結(jié) 果 表 明 羌 活 醇 在0.017 4 ～0.348 0 μg范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積線性關(guān)系良好；異歐前胡素在 0.012 8 ～0.256 0 μg范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積線性關(guān)系良好。

2.2.7 陰性對(duì)照試驗(yàn) 分別精密吸取 10 μL的供試品溶液、對(duì)照品溶液及陰性對(duì)照溶液，按“2.2.1” 項(xiàng)的色譜條件進(jìn)行色譜分析，結(jié)果供試品溶液色譜中，在與羌活醇和異歐前胡素對(duì)照品相同保留時(shí)間處有吸收峰，而陰性對(duì)照溶液在相同保留時(shí)間處未顯吸收峰， 見圖2。

圖2 羌活醇和異歐前胡素的 HPLC圖Fig.2 HPLC chromatograms of notopterol and isoimperatorin

2.2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液， 在放置0、 1、 2、 4、 6、8 h 后精密吸取10 μL進(jìn)樣， 測(cè)定其峰面積值， 羌活醇和異歐前胡素 RSD分別為0.72%、 0.68%。 結(jié)果表明， 供試品溶液 8 h 內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.2.9 精密度試驗(yàn) 取對(duì)照品混合溶液重復(fù)進(jìn)樣6 次， 按 “2.2.1” 項(xiàng)的色譜條件測(cè)定羌活醇和異歐前胡素的峰面積，結(jié)果表明，儀器具有良好的精密度， 羌 活 醇 和 異 歐 前 胡 素 的 RSD 分 別 為0.91%、 0.59%。

2.2.10 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品， 按上述方法制備6份供試品溶液，分別測(cè)定，羌活醇和異歐前胡素的 RSD分別為 0.38%、 0.84%。 結(jié)果表明本方法具有良好的重復(fù)性。

2.2.11 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含有量 （羌活醇為 0.275 mg/g、 異歐前胡素為 0.209 mg/g） 的同一批樣品適量， 剪碎， 混勻， 取約 1.5 g， 精密稱定， 置50 m L具塞錐形瓶中， 分別精密加入對(duì)照品混合溶液 25 mL， 加 85%甲醇稀釋至刻度， 搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為加樣供試液。精密吸取加樣供試液10 μL， 按上述方法測(cè)定其峰面積， 計(jì)算回收率， 結(jié)果表明本方法回收率良好， 見表2。

表2 羌活醇和異歐前胡素回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab.2 Results of recovery tests for notopterol and isoimperatorin

2.3 細(xì)辛脂素的測(cè)定［19-21］

2.3.1 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性 Hypersil C18色譜柱 （ 4.6 mm ×150 mm， 5 μm）； 乙 腈-甲 醇（85 ∶15）為流動(dòng)相， 檢測(cè)波長(zhǎng) 286 nm， 體積流量為 0.9 mL/min。 在此條件下細(xì)辛脂素與其他組分分離效果良好，以細(xì)辛脂素計(jì)理論塔板數(shù)應(yīng)不低于3 000。

2.3.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 取細(xì)辛脂素對(duì)照品適量，加流動(dòng)相溶解制成每 1 mL含 0.01 mg的溶液， 在200 ～400 nm波長(zhǎng)處進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果細(xì)辛脂素對(duì)照品在 286 nm處有最大吸收，故將檢測(cè)波長(zhǎng)定用 286 nm。

2.3.3 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取細(xì)辛脂素對(duì)照品適量，加甲醇制成含細(xì)辛脂素 0.012 4 mg/mL的對(duì)照品溶液。

2.3.4 供試品溶液的配制 取本品適量， 剪碎，混勻， 取約 3.0 g， 精密稱定， 置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇 50 mL，稱定質(zhì)量， 超聲 （功率 300 W， 頻率 35 kHz） 處理 20min， 再稱定質(zhì)量， 用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，作為供試品溶液。

2.3.5 陰性對(duì)照溶液的配制 按九龍化風(fēng)丸處方比例稱取適量除細(xì)辛的其余藥味，按九龍化風(fēng)丸的前處理和制劑生產(chǎn)工藝制成缺細(xì)辛的陰性樣品，按照上述供試品溶液的配制方法制成缺細(xì)辛的陰性對(duì)照溶液。

2.3.6 線性關(guān)系考察 精密吸取對(duì)照品溶液 1、5、 10、 15、20 μL，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，細(xì)辛脂素量為橫坐標(biāo)分別繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程。細(xì)辛脂素：Y= 6.034 7 ×106X+837.6， r=0.999 2。 結(jié)果表明細(xì)辛脂素在 0.012 4 ～0.248 0 μg范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積線性關(guān)系良好。

2.3.7 陰性對(duì)照試驗(yàn) 分別精密吸取 10 μL的供試品溶液、對(duì)照品溶液及陰性對(duì)照溶液，按“2.3.1” 項(xiàng)的色譜條件進(jìn)行色譜分析，結(jié)果供試品溶液色譜中，在與細(xì)辛脂素對(duì)照品相同保留時(shí)間處有吸收峰，而陰性對(duì)照溶液在相同保留時(shí)間處未顯吸收峰，見圖3。

圖3 細(xì)辛脂素的 HPLC圖Fig.3 HPLC chromatogram s of asarinin

2.3.8 精密度試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液重復(fù)進(jìn)樣 6 次，按 “2.3.1” 項(xiàng)的色譜條件測(cè)定細(xì)辛脂素的峰面積，結(jié)果表明，儀器具有良好的精密度，細(xì)辛脂素RSD為 0.73%。

2.3.9 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品， 按上述方法制備6份供試品溶液，分別測(cè)定，細(xì)辛脂素RSD為 0.91%。 結(jié)果表明本方法具有良好的重復(fù)性。

2.3.10 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液， 在放置0、 1、 2、 4、 6、 8 h 后精密吸取10 μL進(jìn)樣， 測(cè)定其峰面積值， 細(xì)辛脂素 RSD為 0.57%， 供試品溶液8 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.3.11 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含有量 （細(xì)辛脂素 0.19 mg/g） 的同一批樣品適量， 剪碎， 混勻，稱取1.5 g， 精密稱定， 置具塞錐形瓶中， 精密加入對(duì)照品溶液 25 mL、甲醇 25 mL， 制成加樣供試液。 精密吸取加樣供試液 10 μL， 按上述測(cè)定方法測(cè)定其峰面積，計(jì)算回收率，結(jié)果表明本方法回收率良好，見表3。

表3 細(xì)辛脂素回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab.3 Resuts of recovery tests for asarinin

2.4 樣品測(cè)定 取 3 批樣品按 “2.1” 項(xiàng)下升麻素苷和 5-O-甲基維斯阿米醇苷測(cè)定方法、 “2.2”項(xiàng)下羌活醇和異歐前胡素測(cè)定方法和 “2.3” 項(xiàng)下細(xì)辛脂素測(cè)定方法測(cè)定本品， 結(jié)果見表4。

表4 樣品測(cè)定結(jié)果 （， n=3）Tab.4 Results of content determ ination（，n=3）

表4 樣品測(cè)定結(jié)果 （， n=3）Tab.4 Results of content determ ination（，n=3）

批 號(hào) 升麻素苷/（mg/丸）5-O-甲基維斯阿米醇苷 /（mg/丸）羌活醇/（mg/丸）異歐前胡素/（mg/丸）細(xì)辛脂素/（mg/丸）130510 0.315 ±0.004 0 0.213 ±0.002 1 0.605 ±0.010 6 0.460 ±0.007 9 0.418 ±0.002 6 130513 0.328 ±0.005 1 0.227 ±0.002 5 0.587 ±0.006 0 0.501 ±0.007 4 0.391 ±0.003 5 130527 0.303 ±0.005 1 0.237 ±0.004 2 0.622 ±0.007 8 0.436 ±0.006 7 0.430 ±0.005 0

3 討論

防風(fēng)、羌活和細(xì)辛為方中主要藥物，防風(fēng)具有祛風(fēng)解表、勝濕止痛、止痙的功效，可用于感冒頭痛、風(fēng)濕痹痛、風(fēng)濕瘙癢、破傷風(fēng)等癥的治療；羌活具有散風(fēng)寒、通鼻竅的功效，可用于風(fēng)寒頭痛、鼻塞流涕、鼻鼽、鼻淵等癥的治療；細(xì)辛具有祛風(fēng)散寒、祛風(fēng)止痛、通竅、溫肺化飲的功效，可用于風(fēng)寒感冒、頭痛、牙痛、鼻塞流涕、鼻淵、風(fēng)濕痹痛， 痰飲喘咳等癥的治療。 同時(shí)升麻素苷和 5-O-甲基維斯阿米醇苷為防風(fēng)主要成分，羌活醇和異歐前胡素為羌活主要成分，細(xì)辛脂素為細(xì)辛的主要成分，本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法對(duì)防風(fēng)中升麻素苷、 5-O-甲基維斯阿米醇苷和羌活中羌活醇、 異歐前胡素以及細(xì)辛中細(xì)辛脂素進(jìn)行定量測(cè)定方法研究，對(duì)完善本品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)具有十分重要的作用，能有效控制產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量。

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Determ ination of prim-O-glucosylcim ifugin， 4'-O-β-D-glucosyl-5-O-m ethylvisamm inol， notopterol， isoim peratorin and asarinin in Jiulong Huafeng Pills by HPLC

GAO Sen1， LIZheng-xiang1， WANG Zhi-tao1， FANG Zhi-zhong2*
（1.General Hospital， Tianjin Medical University， Tianjin 300052， China； 2.Department of Pharmacy， College of Pharmacy， Tianjin Medical University， Tianjin Key Laboratary on Technologies Enabling Development of Clinical Therapeutics and Diagnostics（ Theranostics） ， Tianjian 300070， China）

AIM To develop an HPLC method for determining the contents of prim-O-glucosylcimifugin， 4'-O-β-D-glucosyl-5-O-meth-ylvisammioside， notopterol， isoimperatorin and asarinin in Jiulong Huafeng Pills（ Saposhnikoviae Radix， Notopterygh Rhizoma et Radix， Asari Radix et Rhizoma， RheiRadix et Rhizoma，Platycodonis Radix， e tc.）.METHODS An Hypersil C18column was used as the chromatographic column，the flow rate was 0.9 mL/min.For prim-O-glucosylcimifugin and 4'-O-β-D-glucosyl-5-O-methylvisamminol， the mobile phase A consisted ofmethanol-acetonitrile（2 ∶1）， the mobile phase B consisted of 0.5%phosphoric acid solution， UV detection wavelength was set at254 nm.For notopterol and isoimperatorin， themobile phase A consisted of acetonitrile，themobile phase B consisted of0.1%acetic acid solution， the detection wavelength was set at310 nm.For asarinin， themobile phase consisted of acetonitrile-methanol（ 85 ∶15 ） ， the UV detection wavelength was set at286 nm.RESULTS There was a good linear relationship between the concentration of prim-O-glucosylcimifugin， 4'-O-β-D-glucosyl-5-O-methylvisamminol and peak area value when the concentrations of prim-O-glucosylcimifugin and 4'-O-β-D-glucosyl-5-O-meth-ylvisammioside were within the range of 0.014 6-0.292 0 μg（ r= 0.999 1）， 0.010 8-0.216 0 μg（r=0.999 3） .The average recoveries were 97.55% （ RSD=1.46%） and 97.73% （ RSD=0.1.18%） .Therewas a good linear relationship between the concentration of notopterol， isoimperatorin and peak area value when the concentrations of notopterol and isoimperatorin were within the range of 0.017 4-0.348 0 μg（ r=0.999 3）， 0.012 8-0.256 0 μg（ r=0.999 7）.The average recoveries were 97.62% （ RSD=1.43%） and 98.11% （ RSD=1.39%） .There was a good linear relationship between the concentration of asarinin and peak area value when the concentrations of asarinin was within the range of 0.012 4-0.248 0 μg（r=0.999 2）.The average recovery was97.65% （RSD=1.24%）.CONCLUSION Themethod is accurate， sensitive， reproducible andmay be used in the determination of prim-O-glucosylcimifugin， 4'-O-β-D-glucosyl-5-O-methylvisamminol， notopterol， isoimperatorin and asarinin in Jiulong Huafeng Pills.

Jiulong Huafeng Pills； prim-O-glucosylcimifugin； 4'-O-β-D-glucosyl-5-O-methylvisamminol； notopterol；isoimperatorin； asarinin； HPLC； determination

R927.2

： A

： 1001-1528（2014）03-0541-07

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.03.020

2013-06-15

高 森 （1980—） ， 男， 碩 士， 主 管 藥 師， 主 要 從 事 臨 床 藥 學(xué) 和 中 藥 質(zhì) 量 控 制。 Tel： 13920249696， E-mail： gaosenyjk @163.com.

*通信作者： 房志仲 （1959—） ， 男， 教授， 碩士生導(dǎo)師， 主要從事藥物制劑與質(zhì)量控制。 Tel：（022）23542805， E-mail： fangzhizhongtj @163.com