劉銳越　劉濤　周華容

[摘要] 目的 檢測變應(yīng)性鼻炎患者鼻黏膜組織中TLR5的表達(dá)。方法 采用免疫組織化學(xué)SABC法檢測30例變應(yīng)性鼻炎患者（試驗(yàn)組）和25例非變應(yīng)性鼻炎患者（對照組）鼻黏膜組織中TLR5的表達(dá)。結(jié)果 TLR5在試驗(yàn)組的陽性表達(dá)率（83.3%）明顯高于對照組（8.0%），x2=30.965，P<0.05。結(jié)論 TLR5在變應(yīng)性鼻炎患者鼻黏膜組織中高表達(dá)。

[關(guān)鍵詞] TLR5；變應(yīng)性鼻炎；鼻黏膜

[中圖分類號] R765.21 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B [文章編號] 2095-0616（2014）03-58-03

過敏性鼻炎（allergic rhinitis，AR）是耳鼻咽喉科常見病之一，現(xiàn)多稱變應(yīng)性鼻炎，目前國內(nèi)發(fā)病率約20%～30%之間。其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，目前多認(rèn)為該病為IgE介導(dǎo)的I型變態(tài)反應(yīng)，多種免疫細(xì)胞如T、B淋巴細(xì)胞、肥大細(xì)胞等及多種細(xì)胞因子均參與其發(fā)病的復(fù)雜機(jī)制[1]。臨床上以連續(xù)陣發(fā)性噴嚏、大量水樣鼻涕、鼻癢及鼻塞為主要癥狀，部分患者伴有嗅覺減退，嚴(yán)重影響患者的學(xué)習(xí)、工作和生活，目前已成為全球性的健康問題。

TOLL樣受體（Toll-like receptors，TLRs）是1997年發(fā)現(xiàn)的機(jī)體對病原體侵襲產(chǎn)生先天性免疫應(yīng)答信號通路中的一類受體，通過監(jiān)視和識別不同的病原相關(guān)分子模式（PAMP）激發(fā)機(jī)體的免疫反應(yīng)[2]。TLR5作為家族中的一員，細(xì)菌鞭毛蛋白是其唯一配體。近來研究發(fā)現(xiàn)TLR5是唯一具有免疫負(fù)調(diào)節(jié)作用的分子，可直接間接地參與免疫疾病的發(fā)病過程[3]。有資料顯示，TLR5在變應(yīng)性鼻炎患者鼻

黏膜組織中的表達(dá)確實(shí)與普通患者存在顯著差異。為了了解在變應(yīng)性鼻炎患者鼻黏膜組織中TLR5的表達(dá)情況，通過以下試驗(yàn)進(jìn)行研究。

1 材料與方法

1.1 材料

取2013年4月～2013年7月山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院耳鼻咽喉科住院行鼻內(nèi)鏡手術(shù)的變應(yīng)性鼻炎伴下鼻甲肥大或伴鼻息肉患者30例為試驗(yàn)組，手術(shù)過程中嚴(yán)格無菌操作取鼻黏膜，同時選取鼻中隔偏曲并下鼻甲肥大而行部分下鼻甲切除術(shù)患者的下鼻甲黏膜組織25例作為對照，-70℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

試驗(yàn)組患者變應(yīng)性鼻炎的診斷參照2004年蘭州會議診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]。

1.2 主要試劑

兔抗人TLR5多克隆抗體（博士德），兔多聚體二抗（博士德），DAB顯色試劑盒（博士德）。

1.3 TLR5蛋白檢測方法

采用免疫組織化學(xué)SABC法，操作步驟嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行，所采用石蠟標(biāo)本均以4?m厚度連續(xù)切片。試驗(yàn)組和對照組一抗稀釋濃度均為1∶100。

1.4 結(jié)果判定

試驗(yàn)結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)參考許良中等[5]的方法。電子顯微鏡下觀察切片，每張切片隨機(jī)選取5個高倍視野進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)，陽性細(xì)胞數(shù)量的百分比和陽性細(xì)胞染色強(qiáng)度作為評分依據(jù)。染色強(qiáng)度：無色0分，淺黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分；陽性細(xì)胞數(shù)量百分比：無陽性細(xì)胞計0分，陽性細(xì)胞數(shù)≤10%計1分，～50%計2分，～75%計3分，>75%計4分；2者相乘得分0～3分為陰性（-），>3分為陽性（+）。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，定性資料采用率來表示，兩組間TLR5的表達(dá)率比較采用x2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

由表1可知，試驗(yàn)組TLR5表達(dá)的陽性率為83.3%，明顯高于對照組的8.0%（x2=30.965，P<0.05），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。TLR5蛋白主要表達(dá)于鼻黏膜上皮細(xì)胞的胞漿中，部分表達(dá)于胞核，呈棕黃色顆粒。

3 討論

變應(yīng)性鼻炎患者發(fā)作期癥狀明顯且可能伴有嗅覺減退，嚴(yán)重影響了患者正常的學(xué)習(xí)、工作和生活，是一個刻不容緩的全球性健康問題。近年來國內(nèi)外均有資料顯示，TLRs必然直接或間接地參與了變應(yīng)性鼻炎的發(fā)病過程[6]。研究已經(jīng)確認(rèn)，在不同的組織環(huán)境中，TLRs的表達(dá)情況各異。例如骨髓來源的樹突狀細(xì)胞表達(dá)高水平的TLR4[7]，而固有層的樹突狀細(xì)胞不表達(dá)TLR4，而表達(dá)TLR5，并可以高效的對其配體做出免疫應(yīng)答[8]。

查閱文獻(xiàn)得知，TLR5在HP感染患者的胃黏膜組織中高表達(dá)，主要表達(dá)在細(xì)胞質(zhì)和（或）細(xì)胞膜，其原因在于表達(dá)于胃上皮細(xì)胞中的TLR5與HP相互作用，啟動一系列炎癥因子介導(dǎo)的級聯(lián)反應(yīng)[9]。對于以上文獻(xiàn)資料結(jié)合本次試驗(yàn)研究結(jié)果，做進(jìn)一步以下討論。

本試驗(yàn)的研究結(jié)果表明，變應(yīng)性鼻炎患者鼻黏膜組織中高表達(dá)TLR5蛋白，推測人體對變應(yīng)原的免疫反應(yīng)至少有一部分是通過激活該受體引起的。雖然目前尚不清楚變應(yīng)性鼻炎患者鼻黏膜中TLR5高表達(dá)的具體機(jī)制，但結(jié)合TLR5在胃腸道組織內(nèi)的表達(dá)情況，可以對其機(jī)制做進(jìn)一步推測。有研究已經(jīng)確認(rèn)，變應(yīng)性鼻炎患者鼻黏膜中TNF-α、IFN-γ、IL-8等細(xì)胞因子量明顯增加[10]，推測是由于變應(yīng)原刺激致使宿主對TLR5高表達(dá)，啟動一系列由炎癥信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的級聯(lián)反應(yīng)，引起多種炎癥因子的“洪水式“釋放，激發(fā)炎癥反應(yīng)，產(chǎn)生大量的細(xì)胞因子，而細(xì)胞因子又可以反饋調(diào)控TLR5的表達(dá)，從而在炎癥反應(yīng)中，TLR5蛋白-細(xì)胞因子之間形成一個相互調(diào)控的復(fù)雜關(guān)系，這種關(guān)系決定炎癥反應(yīng)的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸。今后進(jìn)一步的研究必將會逐步探明這種相互作用的關(guān)系，一旦闡明這種機(jī)制，必將對變應(yīng)性鼻炎的發(fā)病機(jī)制有更為深入的認(rèn)識，從而為變應(yīng)性鼻炎的治療方向提供理論依據(jù)，減輕患者的痛苦。

綜上所述，TLR5在變應(yīng)性鼻炎患者鼻黏膜組織中高表達(dá)，提示TLR5直接或間接參與了變應(yīng)性鼻炎的發(fā)病過程。本試驗(yàn)中，對照組有極少量的陽性表達(dá)可能是由于該組織切片來源的患者患有變應(yīng)性鼻炎，但并未處在發(fā)作期，造成一定的誤差。

[參考文獻(xiàn)]endprint

[1] 魏欣.變應(yīng)性鼻炎的發(fā)病機(jī)制[J].海南醫(yī)學(xué)，2011，22（10）：8-12.

[2] 常曉彤，輦曉峰，王振輝.Toll 樣受體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑研究進(jìn)展[J].生理科學(xué)進(jìn)展，2011，42（5）：340-346.

[3] 楊昱，徐劍鋮.Toll樣受體5在機(jī)體免疫反應(yīng)中的作用[J].重慶醫(yī)學(xué)，2006，35（13）：1231-1233.

[4] 周兵，王向東，魏均民.2004 年全國變應(yīng)性鼻炎與哮喘關(guān)系專題學(xué)術(shù)會議紀(jì)要[J].中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2005， 40（3）：181.

[5] 許良中，楊文濤.免疫組織化學(xué)反應(yīng)結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)[J].中國癌癥雜志，1996，6（4）：229-231.

[6] Underhill DM，Ozinsky A.Toll-like receptors：key mediators of microbe detection[J].Current opinion in immunology，2002，14（1）：103-110.

[7] Tallant T，Deb A，Kar N，et al.Flagellin acting via TLR5 is the major activator of key signaling pathways leading to NF-κB and proinflammatory gene program activation in intestinal epithelial cells[J].BMC microbiology，2004，4（1）：33.

[8] Feng T，Cong Y，Alexander K，et al.Regulation of Toll-like receptor 5 gene expression and function on mucosal dendritic cells[J].PloS one，2012，7（4）：e35918.

[9] 刁云輝，張建立，馮百歲.幽門螺桿菌感染患者胃黏膜組織中 TLR2，TLR5 的表達(dá)[J].鄭州大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版）， 2009，5：38.

[10] 劉日明.Toll 樣受體與變態(tài)反應(yīng)關(guān)系研究進(jìn)展[J].國外醫(yī)學(xué)（免疫學(xué)分冊），28（4）：220-223.

（收稿日期：2013-12-16）endprint

[1] 魏欣.變應(yīng)性鼻炎的發(fā)病機(jī)制[J].海南醫(yī)學(xué)，2011，22（10）：8-12.

[2] 常曉彤，輦曉峰，王振輝.Toll 樣受體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑研究進(jìn)展[J].生理科學(xué)進(jìn)展，2011，42（5）：340-346.

[3] 楊昱，徐劍鋮.Toll樣受體5在機(jī)體免疫反應(yīng)中的作用[J].重慶醫(yī)學(xué)，2006，35（13）：1231-1233.

[4] 周兵，王向東，魏均民.2004 年全國變應(yīng)性鼻炎與哮喘關(guān)系專題學(xué)術(shù)會議紀(jì)要[J].中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2005， 40（3）：181.

[5] 許良中，楊文濤.免疫組織化學(xué)反應(yīng)結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)[J].中國癌癥雜志，1996，6（4）：229-231.

[6] Underhill DM，Ozinsky A.Toll-like receptors：key mediators of microbe detection[J].Current opinion in immunology，2002，14（1）：103-110.

[7] Tallant T，Deb A，Kar N，et al.Flagellin acting via TLR5 is the major activator of key signaling pathways leading to NF-κB and proinflammatory gene program activation in intestinal epithelial cells[J].BMC microbiology，2004，4（1）：33.

[8] Feng T，Cong Y，Alexander K，et al.Regulation of Toll-like receptor 5 gene expression and function on mucosal dendritic cells[J].PloS one，2012，7（4）：e35918.

[9] 刁云輝，張建立，馮百歲.幽門螺桿菌感染患者胃黏膜組織中 TLR2，TLR5 的表達(dá)[J].鄭州大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版）， 2009，5：38.

[10] 劉日明.Toll 樣受體與變態(tài)反應(yīng)關(guān)系研究進(jìn)展[J].國外醫(yī)學(xué)（免疫學(xué)分冊），28（4）：220-223.

（收稿日期：2013-12-16）endprint

[1] 魏欣.變應(yīng)性鼻炎的發(fā)病機(jī)制[J].海南醫(yī)學(xué)，2011，22（10）：8-12.

[2] 常曉彤，輦曉峰，王振輝.Toll 樣受體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑研究進(jìn)展[J].生理科學(xué)進(jìn)展，2011，42（5）：340-346.

[3] 楊昱，徐劍鋮.Toll樣受體5在機(jī)體免疫反應(yīng)中的作用[J].重慶醫(yī)學(xué)，2006，35（13）：1231-1233.

[4] 周兵，王向東，魏均民.2004 年全國變應(yīng)性鼻炎與哮喘關(guān)系專題學(xué)術(shù)會議紀(jì)要[J].中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2005， 40（3）：181.

[5] 許良中，楊文濤.免疫組織化學(xué)反應(yīng)結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)[J].中國癌癥雜志，1996，6（4）：229-231.

[6] Underhill DM，Ozinsky A.Toll-like receptors：key mediators of microbe detection[J].Current opinion in immunology，2002，14（1）：103-110.

[7] Tallant T，Deb A，Kar N，et al.Flagellin acting via TLR5 is the major activator of key signaling pathways leading to NF-κB and proinflammatory gene program activation in intestinal epithelial cells[J].BMC microbiology，2004，4（1）：33.

[8] Feng T，Cong Y，Alexander K，et al.Regulation of Toll-like receptor 5 gene expression and function on mucosal dendritic cells[J].PloS one，2012，7（4）：e35918.

[9] 刁云輝，張建立，馮百歲.幽門螺桿菌感染患者胃黏膜組織中 TLR2，TLR5 的表達(dá)[J].鄭州大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版）， 2009，5：38.

[10] 劉日明.Toll 樣受體與變態(tài)反應(yīng)關(guān)系研究進(jìn)展[J].國外醫(yī)學(xué)（免疫學(xué)分冊），28（4）：220-223.

（收稿日期：2013-12-16）endprint