石緒根，李 娟，張紀利，鄭賢賢，熊件妹

（1.江西農業(yè)大學 農學院，江西 南昌 330045；2.江西農業(yè)大學 國土資源與環(huán)境學院，江西 南昌330045）

0 引 言

螺螨酯（spirodiclofen），商品名螨危（envidor），是德國拜耳公司研制開發(fā)的第一個螺環(huán)季酮酸類殺螨劑，其作用機制獨特，通過阻止乙酰輔酶A羧化酶的作用（該酶在害螨的生長過程中輔助合成重要的脂肪酸），進而抑制害螨的脂肪合成，阻斷能量代謝而達到殺死害螨的目的[1]。同時，螺螨酯具有殺螨譜廣、適應性強、兼殺卵和幼螨、在不同氣溫條件下對作物安全、對人畜低毒等優(yōu)點，已在農業(yè)生產中廣泛使用[2]。自2004年進入中國市場以來，螺螨酯的銷售額逐年上升，至2008年，螺螨酯的銷售額已在殺螨劑中占據首位，且其專利保護期已過，國內已有10余家企業(yè)登記上市了該產品，其應用范圍必將進一步擴大[3]。

因螺螨酯與傳統(tǒng)殺螨劑有著完全不同的作用機制，與其它類殺螨劑基本不存在交互抗性，且持效期長，目前廣泛用于控制柑桔、葡萄等果樹和茄子、辣椒、番茄等茄科作物上的害螨。此外，螺螨酯對梨木虱、榆蠣盾蚧以及葉蟬類等害蟲有很好的兼治效果[4]。然而隨著螺螨酯應用范圍的不斷擴大和使用頻率的不斷增加，勢必會因為高選擇壓而使害蟲產生抗藥性問題。目前已有很多室內試驗證明，害螨可對螺螨酯產生極高水平抗性，同時國內外田間抗藥性監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，柑橘全爪螨已對螺螨酯產生了較高水平的抗性。筆者對近年來二斑葉螨、柑橘全爪螨及蘋果全爪螨對螺螨酯的抗藥性現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢、抗藥性機理研究現(xiàn)狀等進行了概述。

1對螺螨酯的抗藥性現(xiàn)狀

1.1 二斑葉螨

拜耳作物科學公司的Rauch等[5]在室內對采自意大利的二斑葉螨（Tetranychus urticae）田間種群進行了連續(xù)37代，時間超過21個月的抗性選育，結果該種群對螺螨酯的抗性僅發(fā)展至13倍，抗性發(fā)展速度緩慢。比利時的Van Pottelberge[6]于至少10年未用過殺蟲劑的根特大學附近的一個花園采集了大約5 000頭二斑葉螨幼蟲作為敏感種群開始進行抗性汰選，并保持每代的存活率在10%~20%，經過連續(xù)12個月的選育，該種群對螺螨酯的抗性水平上升為敏感種群的274倍；而后，Demaeght等[7]對該抗性種群繼續(xù)進行室內抗性選育，最終獲得了對螺螨酯抗性超過680倍的二斑葉螨品系。周玉書[8]在室內用螺螨酯對采自甘肅天水的二斑葉螨相對敏感種群進行了30代的抗性汰選，抗性僅發(fā)展至6.59倍，發(fā)展速度緩慢。張志剛[9]以采自甘肅蘭州國家自然保護區(qū)興隆山的二斑葉螨作為敏感種群，用螺螨酯對該種群進行了連續(xù)26代的抗性汰選。篩選過程中發(fā)現(xiàn)：前期抗性培育中，抗性發(fā)展極為緩慢，中期漸趨穩(wěn)定，后期逐漸加快；篩選至26代時，其抗性指數達到58.83。目前，尚未發(fā)現(xiàn)有關二斑葉螨田間種群對螺螨酯產生抗藥性的報道。

1.2 柑橘全爪螨

Yu等[10]采用螺螨酯對自1998年起未接觸過任何藥劑的實驗室飼養(yǎng)柑橘全爪螨品系進行了連續(xù)42代的抗性汰選，獲得了抗性達103倍的高抗品系。汰選過程中發(fā)現(xiàn)：前27代抗性發(fā)展趨勢較為平緩，而30代以后抗性發(fā)展速度明顯加快。Hu等[11]持續(xù)監(jiān)測了中國南方四個省份的六個柑橘全爪螨高發(fā)地區(qū)的柑橘全爪螨種群對螺螨酯的抗性發(fā)展速度，結果發(fā)現(xiàn)：2006年采回的所有種群對螺螨酯均處于敏感水平，而螺螨酯對2009年采集的各種群的LC50值最低為3.29mg/L，最高為418.24mg/L，已經存在127倍的敏感性差異；其中福建省福州、平和地區(qū)的柑橘全爪螨種群對螺螨酯的抗性水平與敏感種群相比分別達到了90.8倍和50倍。2012年，D?KER等[12]在土耳其進行抗性調查時發(fā)現(xiàn)，采自Karadut市的柑橘全爪螨雌成蟲對螺螨酯的抗性已達70.3倍，而該種群的卵對螺螨酯的抗性僅為19倍。本項目組2013年對江西省贛南個別地區(qū)柑橘全爪螨種群進行了初步的抗藥性調查，結果顯示該螨已對螺螨酯產生了較高的抗性（10~40倍）。

1.3 蘋果全爪螨

Kramer等[13]對采自歐洲各地區(qū)的蘋果全爪螨種群進行了抗性測定后發(fā)現(xiàn)，雖然大部分蘋果全爪螨種群已對螺螨酯產生了中等水平的抗性，但它們的卵卻均對螺螨酯敏感；選取一抗性較高的田間種群進行了室內選育，最終獲得了對螺螨酯抗性大于7 000倍的抗性種群，但該品系的卵對螺螨酯卻只產生了56倍的抗性。

2 和其他類型殺螨劑交互抗性關系

與傳統(tǒng)殺螨劑不同，螺螨酯的作用機制新穎，故與其它類殺螨劑基本不存在交互抗性。Rauch等[5]通過室內測定發(fā)現(xiàn)螺螨酯在二斑葉螨上與有機磷類、線粒體電子傳遞抑制劑、噻螨酮和阿維菌素均不存在交互抗性。張志剛以二斑葉螨為實驗對象，進行了螺螨酯與其他幾種藥劑的交互抗性測定實驗，結果表明：二斑葉螨抗螺螨酯種群對甲氰菊酯、氯氰菊酯存在明顯的交互抗性；對苯丁錫、四螨嗪、苦皮藤生物堿、阿維菌素、三氟氯氰菊酯、噠螨·四螨嗪、噠·水胺硫磷、三唑錫、三氯殺螨醇、噠螨靈、氧樂果無交互抗性；對瀏陽霉素、毒死蜱、噻螨酮、唑螨酯、柴油·噠螨靈可能存在負交互抗性[9]。盡管對其他種類的殺螨劑基本不存在交互抗性，但螺甲螨酯和螺蟲乙酯與螺螨酯同屬季酮酸類殺蟲殺螨劑，具有相同的作用機制，因此，螺甲螨酯和螺蟲乙酯也存在較大的抗性風險。Hu等[11]人發(fā)現(xiàn)，福州地區(qū)對螺螨酯抗性達90.8倍的柑橘全爪螨種群，對螺蟲乙酯的交互抗性達22倍，但該地區(qū)從未將螺蟲乙酯用于柑橘全爪螨的防治。Yu等[10]通過柑橘全爪螨敏感品系室內選育獲得了對螺螨酯抗性為103倍的抗性品系，室內交互抗性試驗發(fā)現(xiàn)，該品系對螺蟲乙酯的交互抗性已達29倍。Kramer等[13]通過對抗性達7 000倍的蘋果全爪螨品系進行交互抗性測定后發(fā)現(xiàn)，該品系對螺甲螨酯的交互抗性達到了4倍，同時對螺蟲乙酯產生了3倍的交互抗性。

3 抗性機理

目前，相關領域的學者普遍認為，害螨對季酮酸類藥劑的抗性機理是細胞色素P450單加氧酶（P450s）、酯酶（EST）和谷胱甘肽-S-轉移酶（GSTs）活性的提高，其中大多數學者認為P450s在抗性產生中發(fā)揮了最為重要的作用。Rauch等[14]發(fā)現(xiàn)，對螺螨酯抗性為13倍的室內選育二斑葉螨品系體內的P450s（2.1倍）、EST（1.2倍）和GSTs（1.2倍）活性相對敏感品系均有一定程度的升高，同時同位素示蹤試驗發(fā)現(xiàn)，酯鍵斷裂和氧化代謝是C14螺螨酯降解的主要途徑，且抗性品系體內代謝速度明顯加快，這一結果證實解毒酶活性增強確為該抗性產生的原因。Van Pottelberge等[6]通過對螺螨酯抗性達274倍的二斑葉螨抗性品系進行了增效實驗和酶活性測定后發(fā)現(xiàn)：多功能氧化酶（MFO）、酯酶和谷胱甘肽-S-轉移酶（GST）均參與了螺螨酯的代謝解毒，但MFO應該發(fā)揮了最重要的作用；而在測定了螺螨酯對二斑葉螨卵的毒性后發(fā)現(xiàn)，該抗藥性顯著下降，表明靶標抗性在該種群中幾乎是不可能存在的。Yu等[10]通過對抗性為103倍的柑橘全爪螨抗性品系進行增效實驗后發(fā)現(xiàn)，抗性品系的MFO、酯酶和GST均參與了螺螨酯的代謝，而該現(xiàn)象在敏感品系中則未發(fā)現(xiàn)。Kramer等[13]對抗性大于7 000倍的蘋果全爪螨品系進行了增效實驗，結果發(fā)現(xiàn)MFO抑制劑PBO將螺螨酯對抗性種群的毒力提高了3倍，而DEF和DEM則未能提高螺螨酯對抗性種群的毒力，因此作者推斷，MFO應該在柑橘全爪螨對螺螨酯的抗性產生中發(fā)揮了重要作用。

目前已有許多文獻[15-16]證明，對殺蟲劑產生抗性的柑橘全爪螨種群體內解毒酶活性的上升與相關基因的過量表達有直接關系，而P450蛋白的表達量與眾多CYP基因轉錄水平的提高更是密不可分[17]。Ding等[18]以亞致死劑量的螺螨酯處理柑橘全爪螨24h后發(fā)現(xiàn)，該品系體內P450單加氧酶活性相比對照提高了2.23倍；提取其總RNA并克隆獲得了兩個P450單加氧酶基因（CYP4CF1和CYP4CL2），熒光定量分析發(fā)現(xiàn)，螺螨酯能夠顯著的誘導CYP4CL2基因過量表達；據此，作者推測CYP4CL2基因很可能與螺螨酯在柑橘全爪螨體內的代謝有關。Demaeght等[7]為檢測對螺螨酯抗性超過680倍的二斑葉螨品系是否出現(xiàn)了靶標突變，克隆并測序了敏感與抗性品系的ACCase基因，比對后并未發(fā)現(xiàn)非同義突變，且兩品系ACCase基因的表達量經測定后同樣未發(fā)現(xiàn)明顯差異；而測定了細胞色素單加氧酶（P450s）基因在兩品系中的表達水平后發(fā)現(xiàn)，CYP392E7和CYP392E10基因的表達量在抗性品系體內過量表達，尤其是CYP392E10基因的表達水平可被螺螨酯強烈誘導；進一步的基因功能表達研究證明，CYP392E10基因的確可以代謝螺螨酯，同時還可以降解螺甲螨酯，但對螺蟲乙酯沒有作用，而CYP392E7基因則沒有此功能；因此作者推斷，CYP392E10基因的過量表達很可能是二斑葉螨對螺螨酯產生抗性的機制。

同時，也有學者認為，GSTs在害螨對螺螨酯的抗藥性產生過程中發(fā)揮了更為重要的作用。段辛樂等[19]對抗性達77.92倍的二斑葉螨品系進行了增效實驗，結果顯示DEM對二斑葉螨抗性品系的抗敏增效比大于TPP和PBO，故推測二斑葉螨對螺螨酯抗性的產生與GSTs和EST活性增強有關。呂娟娟等[20]近期研究表明，抗螺螨酯二斑葉螨種群體內的GST基因TuGSTd1和TuGSTd2相比敏感品系分別高出了5.60和3.75倍，該結果表明GST基因的過量表達可能與二斑葉螨對螺螨酯抗藥性的增加有關。

4 對螺螨酯抗性的發(fā)展趨勢及治理對策

就現(xiàn)有報道來看，二斑葉螨、蘋果全爪螨田間種群對螺螨酯的抗藥性發(fā)展較為緩慢，但室內抗性選育試驗發(fā)現(xiàn)，二斑葉螨和蘋果全爪螨均能對螺螨酯產生成百上千倍的極高抗性；而我國已有柑橘全爪螨田間種群對螺螨酯產生了90倍以上的抗藥性，室內也選育也使其獲得了超過100倍的抗性。因此，如果持續(xù)的無限制的使用螺螨酯防治上述三種害螨，勢必會對其抗藥性的形成產生了很大的選擇壓力。為保證螺螨酯等季酮酸類殺蟲殺螨劑的防治效果，延長其使用壽命，必須采取行之有效的措施來延緩抗藥性的產生。建議在1個生長季節(jié)內最好只施用1次螺螨酯，并注意與其他殺螨劑輪換使用，降低產生抗性的風險；同時還可以將其與不同殺蟲機制的農藥混合施用，或再加入少量增效劑，既能提高農藥的防治效果，又能克服或延緩抗藥性的產生；另外還需采取正確的施藥技術，選用技術人員推薦的施用濃度及方法等，這提高防效、延緩抗藥性產生也有一定的效果。

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