畢鐵強(qiáng)，周 軍，梁文學(xué)，劉 毅，李淑琴，高希濤，沈 俊，王培順

全球每年約120萬(wàn)婦女患乳腺癌，50萬(wàn)左右死于乳腺癌。北美、西歐乳腺癌發(fā)病率占女性腫瘤首位，我國(guó)乳腺癌發(fā)病率逐年上升，沿海大城市的發(fā)病率較內(nèi)陸地區(qū)為高，已成為城市女性的“第一殺手”。大部分乳腺癌患者在就診時(shí)已非早期，手術(shù)后輔以化放療，治療效果欠佳。腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移是影響乳腺癌患者術(shù)后生存的主要因素。因此，尋找對(duì)乳腺癌浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移有價(jià)值的檢測(cè)指標(biāo)，將有助于乳腺癌患者的預(yù)后評(píng)估，從而及時(shí)采取進(jìn)一步治療措施，提高患者的無(wú)病生存率和總生存率。

煙酰胺磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶(Nampt)是細(xì)胞內(nèi)煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)生物合成的限速酶，具有多種生物效應(yīng)。在煙酸胺合成NAD的過(guò)程中，Nampt催化5-磷酸核糖基-1-焦磷酸鹽(PRPP)轉(zhuǎn)移磷酸核糖基團(tuán)給煙酸胺形成煙酰胺單核苷酸 (NMN)和焦磷酸鹽(PPi)。然后NMN再通過(guò)煙酰胺單核苷酸腺苷酰轉(zhuǎn)移酶(Nmnat)催化生成NAD[1](圖1)。

圖1 煙酰胺(nicotinamide)生物合成煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)

Nampt是一種具有多種功能的蛋白質(zhì)，目前對(duì)其多種生物學(xué)功能，特別是在腫瘤發(fā)生發(fā)展、抗凋亡機(jī)制等方面的研究尚處于起步階段[2]。2007年，Yang等[3]在《Cell》上發(fā)表的一篇著重于研究營(yíng)養(yǎng)影響線粒體NAD水平與細(xì)胞生存關(guān)系的論文中，用甲磺酸甲脂(一種DNA烷化劑)和依托泊甙(拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ抑制劑)分別處理Nampt高表達(dá)的和Nampt敲除的纖維肉瘤細(xì)胞以及胚腎細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)Nampt高表達(dá)的細(xì)胞凋亡減少，提示Nampt高表達(dá)能抵抗DNA損傷所引起的細(xì)胞死亡。Folgueira 等[4]在阿霉素治療乳腺癌的耐藥基因篩選中，發(fā)現(xiàn)3個(gè)基因與阿霉素耐藥有關(guān)，其中一個(gè)就是Nampt。

我們的前期研究發(fā)現(xiàn)Nampt在胃癌等多種惡性腫瘤中高表達(dá)，與惡性腫瘤生物學(xué)行為密切相關(guān)，且可能與腫瘤細(xì)胞對(duì)某些藥物的化療耐藥有關(guān)[5-6]。本研究中，通過(guò)探討乳腺癌組織中Nampt的表達(dá)與臨床病理特征及患者預(yù)后的關(guān)系，以期為乳腺癌患者臨床治療、預(yù)后評(píng)估提供新的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 病理組織來(lái)源 采集2006年1月至2008年12月間83例我院手術(shù)治療且隨訪資料完整的乳腺癌患者癌組織標(biāo)本及對(duì)應(yīng)的癌旁正常乳腺組織標(biāo)本。患者均為女性，年齡29～66歲，平均年齡47歲。所有患者術(shù)前未經(jīng)放療或化療。乳腺癌TNM分期采用AJCC標(biāo)準(zhǔn)(2009年版)。

1.2 免疫組化方法 標(biāo)本經(jīng)35%甲醛水溶液固定，石蠟包埋，切成3 μm厚組織切片，附于玻片上，采用免疫組化SP法染色。應(yīng)用圖像信號(hào)采集與分析儀對(duì)所有切片進(jìn)行圖像采集。免疫組織化學(xué)染色后的切片按陽(yáng)性率進(jìn)行判斷：Nampt陽(yáng)性染色定位于細(xì)胞質(zhì)，以見(jiàn)棕黃色或者棕褐色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞。每張切片按陽(yáng)性細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的百分比定量評(píng)為1～4分：≤25%為1分；26%～50%為2分；51%～75%為3分；≥76%為4分。1～2分歸為低表達(dá)，3～4分歸為高表達(dá)。由兩名病理科醫(yī)師獨(dú)立判定每一個(gè)樣本，少數(shù)不統(tǒng)一的結(jié)果進(jìn)行重新評(píng)估，取協(xié)商后一致的意見(jiàn)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，Nampt在組織中表達(dá)的差異及與臨床病理學(xué)特性的關(guān)系采用χ2檢驗(yàn)，Nampt表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，曲線之間的差異采用Log-rank檢驗(yàn)評(píng)價(jià)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Nampt在乳腺癌組織及正常乳腺組織中的表達(dá)(圖1) 48.19%(40/83)的乳腺癌組織標(biāo)本中Nampt高表達(dá)，51.81%(43/83)的乳腺癌組織標(biāo)本中Nampt低表達(dá)。正常乳腺組織中Nampt均幾無(wú)表達(dá)。

2.2 Nampt表達(dá)與乳腺癌臨床病理間的關(guān)系及與ER、PR、Her-2表達(dá)的相關(guān)性 由表1可見(jiàn)，Nampt的表達(dá)與患者年齡、腫瘤部位及組織分化程度無(wú)關(guān)，與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期有關(guān)(P<0.05)。Nampt表達(dá)與ER、PR的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，而與Her-2的表達(dá)之間沒(méi)有顯著相關(guān)性。

表1 Nampt表達(dá)與乳腺癌臨床病理間的關(guān)系及與ER、PR、Her-2表達(dá)的相關(guān)性

2.3 Nampt的表達(dá)與乳腺癌患者預(yù)后的關(guān)系 將Nampt高表達(dá)和低表達(dá)患者的同期生存率相比較后發(fā)現(xiàn)，Nampt高表達(dá)患者的5年無(wú)病生存率和總生存率低于低表達(dá)者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(圖2、圖3)。

圖2 Nampt表達(dá)與乳腺癌患者5年無(wú)病生存率關(guān)系曲線

圖3 Nampt表達(dá)與乳腺癌患者5年總生存率關(guān)系曲線

3 討論

Nampt與腫瘤之間的關(guān)系正逐漸引起研究者們的興趣。研究證實(shí)Nampt在多種惡性腫瘤中高表達(dá)。多項(xiàng)研究檢測(cè)Nampt在相關(guān)腫瘤性疾病中血清水平和(或)組織水平的表達(dá)均得到了陽(yáng)性結(jié)果，認(rèn)為其可作為相關(guān)腫瘤的分子標(biāo)記物[2]。Nakajima等[7-8]對(duì)胃癌及結(jié)腸癌患者血清中的多種因子進(jìn)行檢測(cè)和分析后認(rèn)為，Nampt可作為診斷進(jìn)展期胃癌和結(jié)腸癌的一種新的生物標(biāo)記物。Wang等[9]發(fā)現(xiàn)Nampt在前列腺癌中高表達(dá)，其抑制劑能有效抑制前列腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)和侵襲。Bajrami等[10]在近期通過(guò)裸鼠實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，Nampt抑制劑聯(lián)合PARP抑制劑對(duì)三陰性乳腺癌有明顯的治療作用。

一種經(jīng)化學(xué)方法新篩選出的小分子化合物FK866(APO866)，能通過(guò)抑制Nampt引起NAD耗竭導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞凋亡。FK866能抑制煙酰胺合成NAD以阻斷腫瘤細(xì)胞賴以生存的途徑，而對(duì)正常細(xì)胞影響很小，因此其有望成為一種新的抗癌藥物[11]。

我們的研究發(fā)現(xiàn)，Nampt在乳腺癌中高表達(dá)，其表達(dá)程度與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期有關(guān)。隨著乳腺癌惡性程度及分期的增高，Nampt的表達(dá)也隨之增加，這表明Nampt可能參與了乳腺癌的發(fā)展和轉(zhuǎn)移過(guò)程，是乳腺癌進(jìn)展過(guò)程中的重要蛋白，可用來(lái)輔助判定乳腺癌的分期或惡性程度。本研究還表明，與乳腺癌組織中Nampt低表達(dá)的患者相比較，Nampt高表達(dá)的患者術(shù)后無(wú)病生存率及總生存率低，提示Nampt可用來(lái)預(yù)測(cè)乳腺癌患者的預(yù)后和指導(dǎo)臨床治療，特別是在結(jié)合TNM分期及受體表達(dá)時(shí)，可能對(duì)預(yù)后的判斷更為準(zhǔn)確。

綜上所述，Nampt在乳腺癌組織中呈高表達(dá)狀態(tài)，參與乳腺癌的發(fā)展和轉(zhuǎn)移過(guò)程，不僅可用于評(píng)估乳腺癌患者的預(yù)后，而且可作為乳腺癌潛在的治療靶點(diǎn)，為開發(fā)新的治療藥物提供思路。

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