李天麗 衛(wèi)春曉

（河南省濟(jì)源市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南濟(jì)源 454650）

濟(jì)源市豬鏈球菌病病原的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

李天麗 衛(wèi)春曉

（河南省濟(jì)源市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南濟(jì)源 454650）

選取36家規(guī)模豬場(chǎng)疑似豬鏈球菌病豬的病料，進(jìn)行細(xì)菌分離鑒定和生化試驗(yàn)，共分離到14株細(xì)菌，其中C群獸醫(yī)鏈球菌8株，D群豬鏈球菌6株。藥敏試驗(yàn)表明，藥物最敏感的是替米考星、頭孢氨芐、阿米卡星、頭孢呋辛鈉。

豬鏈球菌??；分離；鑒定；藥敏試驗(yàn)

豬鏈球菌病是是由C、D、E及L群鏈球菌引起的豬的多種疾病的總稱。主要特征是急性出血性敗血癥、化膿性淋巴結(jié)炎、腦膜炎以及關(guān)節(jié)炎。豬鏈球菌有多種型（1～34、1/2）以及一些無(wú)法定型的菌株。目前鏈球菌屬共有30多種，比較常見的有10余種[1]。目前，濟(jì)源市規(guī)模豬場(chǎng)依然有該病發(fā)生，給養(yǎng)豬業(yè)造成重大損失。為了解該病血清型以及藥物敏感性，筆者開展了本次試驗(yàn)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

（1）病料：從濟(jì)源市承留鎮(zhèn)、大峪鎮(zhèn)、思禮鎮(zhèn)等9個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)36家規(guī)模豬場(chǎng)，無(wú)菌采集疑似豬鏈球菌病的豬關(guān)節(jié)液、心、肝、脾臟和腸系膜淋巴結(jié)病料。

（2）培養(yǎng)基、試劑和藥品：細(xì)菌微量生化試管，進(jìn)口蘭氏分群試劑盒，BHI培養(yǎng)基，血液瓊脂平板，5%綿羊血瓊脂平板，革蘭氏染色液，血清肉湯、0.1%美蘭牛乳、pH9.6肉湯、6.5%NaCl肉湯、馬尿酸鈉、葡萄糖、乳糖等各種生化培養(yǎng)基等由平頂山市重大動(dòng)物疫病防控中心自行配制；藥敏紙片購(gòu)自上海微生物試劑有限公司，替米考星、氨芐西林鈉、頭孢唑啉鈉等13種藥敏試驗(yàn)用抗生素。

1.2 方法

（1）病原菌分離鑒定：無(wú)菌采取病料，制作觸片，干燥、火焰固定后進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢。挑去疑似鏈球菌病料接種在血液瓊脂平板，24h，37℃后，取菌落接種在BHI培養(yǎng)基，24～48h，37℃進(jìn)行選擇性增菌培養(yǎng)；增菌培養(yǎng)后，劃線分離在5%綿羊血瓊脂平板，觀察菌落特征，純培養(yǎng)及生化特性檢查。

（2）生化試驗(yàn)：用分離菌純培養(yǎng)物進(jìn)行0.1%美蘭牛乳、pH9.6肉湯、6.5%NaCl肉湯、馬尿酸鈉、葡萄糖、乳糖等各種生化試驗(yàn)，參照文獻(xiàn)方法進(jìn)行[2]。

（3）菌株分群：采用進(jìn)口蘭氏分群試劑盒。

（4）藥敏試驗(yàn)：菌液的制備和抑菌圈的測(cè)定參照文獻(xiàn)的方法進(jìn)行[3]。將分離菌株均勻涂布于鮮血瓊脂平板，貼上卡那霉素、替米考星、頭孢氨芐、阿米卡星、氟哌酸、頭孢呋辛鈉、硫酸新霉素、環(huán)丙殺星、青霉素、頭孢噻肟、先鋒霉素、阿莫西林12種藥敏紙片，用游標(biāo)卡尺測(cè)量每個(gè)藥敏紙片的抑菌圈直徑，根據(jù)判定標(biāo)準(zhǔn)判定細(xì)菌對(duì)藥物的敏感性。

2 結(jié)果

2.1 病原菌分離鑒定

鏡檢可見單個(gè)、成對(duì)或短鏈或長(zhǎng)鏈排列，菌體直徑1～2μm，球形或橢圓形，革蘭氏陽(yáng)性。鏡檢結(jié)果見圖1。

2.2 分離培養(yǎng)

在鮮血平板上能長(zhǎng)成3～4mm的粘液樣大菌落，光滑、灰白色、中央隆起、邊緣整齊、圓形的菌落，完全溶血，呈典型的β溶血。

2.3 菌株分群（分C、D兩群）

能水解精氨酸，發(fā)酵乳糖、水楊苷、山梨醇產(chǎn)酸，不液化明膠，不還原硝酸鹽。另外一種是豬鏈球菌2型在鮮血平板上長(zhǎng)成1～2mm、呈淺灰色或半透明的小菌落，具α和β雙重溶血，能發(fā)酵乳糖、菊糖、海藻糖、水楊苷、棉實(shí)糖，不發(fā)酵甘露醇和山梨醇。

2.4 生化試驗(yàn)（詳見見表1）

2.5 藥敏試驗(yàn)

在12中抗生素中，豬鏈球菌對(duì)藥物最敏感的是替米考星、頭孢氨芐、阿米卡星、頭孢呋辛鈉，其次是卡那霉素、氟哌酸、青霉素、硫酸新霉素，對(duì)環(huán)丙殺星、頭孢噻肟、先鋒霉素、阿莫西林不敏感。

3 討論與小結(jié)

按照蘭氏分類，鏈球菌分為從A-V（缺少I、J）共20個(gè)群，每個(gè)群又分為若干型或者亞型，引起豬鏈球菌病主要是D群的Ⅱ型，豬鏈球菌有35個(gè)血清型。從本試驗(yàn)結(jié)果看出，濟(jì)源市規(guī)模化豬場(chǎng)豬鏈球菌的菌株主要是C獸醫(yī)鏈球菌群和D群，共14株，其中C群分離出6株，D群分離出8株。這為今后濟(jì)源市豬鏈球菌病的預(yù)防和治療提供了依據(jù)。

在豬鏈球菌病的治療中，很多養(yǎng)豬場(chǎng)戶濫用抗生素，導(dǎo)致細(xì)菌對(duì)常用抗生素耐藥性增強(qiáng)。本藥敏試驗(yàn)表明，病菌對(duì)環(huán)丙殺星、頭孢噻肟、先鋒霉素、阿莫西林不敏感，規(guī)模化養(yǎng)豬場(chǎng)重在對(duì)疾病的預(yù)防，會(huì)定期添加抗生素，這些藥物在規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)大量長(zhǎng)期使用或者不科學(xué)輪換交替使用抗生素有關(guān)。因此，建議規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)在防控該病或者其他疫病使用抗菌藥物時(shí)，禁止長(zhǎng)期添加和濫用藥物，以減少耐藥菌株大量產(chǎn)生和擴(kuò)散。有條件的豬場(chǎng)可以定期開展疫病監(jiān)測(cè)和藥敏試驗(yàn)，以便準(zhǔn)確使用抗生素。

[1] 杜小平，鄭俊梅.豬鏈球菌病研究進(jìn)展淺談[J].國(guó)外畜牧學(xué)（豬與禽），2009，（3）：77-78.

[2] 姚火春.獸醫(yī)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2002：36-42．

[3] 吳 靜，賈桂珍.豬鏈球菌病病原的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39（6）：349-351．