侯曉蘋 王滬榮 宋長軍 陜西渭南職業(yè)技術(shù)學(xué)院(渭南714000)

△西北大學(xué)(西安710069)

中藥復(fù)方是中醫(yī)審因辨證確定治法之后，選取適宜藥物，酌定用量，按組成原則妥善配伍而成的一組方劑。中藥復(fù)方隨癥加減，變化無窮，體現(xiàn)中醫(yī)辨證論治的特色，是中醫(yī)用藥優(yōu)勢所在。但也因其組分復(fù)雜、藥理作用多樣，干擾因素眾多，因而現(xiàn)代化研究難度頗大。多年來，揭示中藥復(fù)方蘊(yùn)含的“七情合和”科學(xué)規(guī)律及其效應(yīng)物質(zhì)基礎(chǔ)，一直是復(fù)方配伍研究的核心內(nèi)容。在此，就近些年中藥復(fù)方配伍研究中的創(chuàng)新思維、方法及成果作以綜述，以供參考。

1 復(fù)方藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究中的多元化整體思維模式

1.1 有效成分群分析 羅國安等［1］提出將復(fù)方藥物作為一個(gè)整體，從中分離出不同有效部位(如皂苷類、黃酮類、生物堿類等)，并采用多種色譜方法定性鑒別出各有效部位，得到特征圖譜;再進(jìn)行藥效學(xué)及指標(biāo)成分定量分析研究，從而闡明復(fù)方起效物質(zhì)及配伍規(guī)律。

1.2 有效成分組學(xué) 杜冠華等［2］提出可先快速分離得到中藥復(fù)方中各種組分，再采用高通量篩選技術(shù)評價(jià)分析各種組分的生物活性，從中篩選出全部有效物質(zhì)。并建立了檢測α-葡萄糖苷酶活性的比色測定法及其體外高通量篩選模型，對72個(gè)清熱解表中藥樣品進(jìn)行了高通量篩選。發(fā)現(xiàn)鴨跖草、山慈菇和桑葉等提取物中含有相關(guān)活性物質(zhì)［3］。高通量活性藥物篩選技術(shù)快速、高效，符合中藥復(fù)方多成分、多靶點(diǎn)治療的特點(diǎn)，有助于復(fù)方現(xiàn)代研究與中醫(yī)配伍理論的結(jié)合。

1.3 分子中藥組學(xué) 馬增春等［4］認(rèn)為，復(fù)方中的化學(xué)成分相互組合會(huì)影響到機(jī)體內(nèi)部信號分子重排，使處于紊亂的信號網(wǎng)絡(luò)趨于平衡，從而達(dá)到療“證”和治病的作用;并設(shè)想提出“證候-作用通路-信號分子-分子網(wǎng)絡(luò)”的證候本質(zhì)圖譜，從復(fù)方、有效部位、有效成分、成分組合等水平考察圖譜的變化及影響。此方法從分子水平研究復(fù)方的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)理，使傳統(tǒng)中藥從宏觀認(rèn)識向微觀世界接近。李鷹飛等［5］應(yīng)用此法對四物湯進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn):川芎嗪、阿魏酸、多糖及芍藥苷是四物湯補(bǔ)血的主要物質(zhì)基礎(chǔ)，他們通過影響造血相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)而促成補(bǔ)血機(jī)制。

1.4 劉建勛［6］認(rèn)為復(fù)方的物質(zhì)基礎(chǔ)是“證”、“病”相結(jié)合的有效成分，建議建立動(dòng)物-器官-細(xì)胞模型，做以深入研究，以此闡明復(fù)方起效的物質(zhì)基礎(chǔ)。

1.5 方劑組織藥理學(xué)及代謝物組學(xué)假說 唐文富等［7-8］提出可使用藥理學(xué)方法來研究中藥或方劑的有效組分對病變靶組織的影響及其作用機(jī)制。運(yùn)用色譜、光譜等方法采集各組方在不同疾病病變組織內(nèi)的成分譜、濃度變化、作用位點(diǎn)或受體、有效組分和組織之間的相互作用及量效關(guān)系，借以闡明各方劑的作用物質(zhì)基礎(chǔ)及過程。

2 復(fù)方配伍規(guī)律研究中的多學(xué)科方法的運(yùn)用 主要探討配伍關(guān)系與體內(nèi)過程的關(guān)聯(lián)性。

2.1 中藥藥效學(xué)基本方法 探討復(fù)方效應(yīng)物質(zhì)與起效機(jī)制。

2.1.1 藥對研究:藥對是復(fù)方的最基本單元，常由兩種臨床常用且相對固定的中藥組合而成，符合”七情合和”配伍原則，研究藥對的配伍規(guī)律可幫助闡明復(fù)方配伍組方的科學(xué)性。梁日欣等［9］以高脂血癥大鼠為模型，以抗氧化、降脂、以及對血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響作用為指標(biāo)，對川芎-赤芍藥對進(jìn)行研究，結(jié)果顯示:兩藥合用或單用均能顯著降低致病鼠血清中膽固醇、低密度脂蛋白、甘油三酯水平，表明兩藥在降脂方面并不協(xié)同。但兩藥合用后能降低血清脂質(zhì)過氧化物-丙二醛水平，增加NO釋放。表明在抗氧化及保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能方面，兩藥產(chǎn)生協(xié)同作用。

2.1.2 拆方分析:將復(fù)方拆成各子方及子方組，研究其功效及配伍規(guī)律。拆方研究可以精簡方劑、尋找最佳藥物組合、確定主要藥物或活性物質(zhì)來源。也是全方作用機(jī)制的一個(gè)窗口，有助于闡明復(fù)方的作用機(jī)制及配伍規(guī)律。熊倩等［10］對麻黃湯不同配伍對大鼠發(fā)汗作用的影響作了定量評價(jià)，采用正交模擬與非線性混合模型，在復(fù)方背景下分析各組分的重要程度和相互作用。結(jié)果表明:各組分對大鼠發(fā)汗作用的藥效貢獻(xiàn)排序?yàn)楣鹬?、麻黃、杏仁和甘草，藥效最佳組合為麻黃+桂枝，最弱組合為杏仁+甘草。結(jié)論:對麻黃湯發(fā)汗作用貢獻(xiàn)最大的為麻黃、桂枝，且發(fā)揮最佳發(fā)汗作用須兩藥合用。

2.2 藥動(dòng)學(xué)方法 研究復(fù)方中成分的體內(nèi)代謝動(dòng)力學(xué)過程。定時(shí)測定生物樣本中的藥物濃度，擬定濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)模型，得到藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，對藥物體內(nèi)吸收、分布、代謝及消除進(jìn)行評價(jià)。

2.3 藥動(dòng)學(xué)(PK)融合藥效學(xué)(PD)方法(PK-PD結(jié)合模型)通過定時(shí)測定血液、尿液等中的藥物及其代謝物或相互作用后綜合效應(yīng)物的濃度，擬定濃度-時(shí)間-效應(yīng)數(shù)據(jù)模型，得到PK-PD參數(shù)，探討方中各主要活性成分在體內(nèi)的動(dòng)態(tài)變化及藥效消長，對活性藥物體內(nèi)過程進(jìn)行評價(jià)。此法可進(jìn)行同步平行觀測多個(gè)藥物效應(yīng)，有助于對復(fù)方的體內(nèi)過程進(jìn)行客觀分析及正確評價(jià)。甘洪全等［12］采用高效液相法對健康男性志愿者口服冠心Ⅱ號湯劑后血清中的阿魏酸濃度進(jìn)行檢測，并觀察其無創(chuàng)傷性冠脈血流動(dòng)力學(xué)，得到符合一室開放模型的藥-時(shí)曲線數(shù)據(jù)。陳淵成等［13］提出間接的藥動(dòng)-藥效模型參數(shù)計(jì)算程序，能準(zhǔn)確估算PK-PD參數(shù)。周京滋等［14］研究了四逆湯、附子的抗炎、鎮(zhèn)痛藥效動(dòng)力學(xué)，結(jié)果表明不同的效應(yīng)則藥動(dòng)學(xué)參數(shù)不同。因此可知復(fù)方在體內(nèi)存在兩個(gè)或者多個(gè)藥動(dòng)學(xué)特征。

2.4 中藥血清藥理學(xué)及血清藥物化學(xué)法 血清藥理學(xué)采用含藥血清代替煎劑或粗提物進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)，研究藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。莫紅纓等［15］研究含雙黃連或其拆方的大鼠血清對抗呼吸道合胞病毒(RSV)的抑制作用。結(jié)果顯示雙黃連全方具有明顯抗RSV的作用，并優(yōu)于各拆方;復(fù)方及拆方的體外和血清藥效學(xué)結(jié)果具有一定的相關(guān)性。馬峻等［16］以抑制血小板釋放5-HT作用(14C-5HT釋放法)為藥效指標(biāo)進(jìn)行頭風(fēng)飲的藥動(dòng)學(xué)研究，由計(jì)算得到的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，得出頭風(fēng)飲屬于一級動(dòng)力學(xué)清除的房室模型。此法中同批分離得到的含藥血清可以同步觀測多項(xiàng)藥理效應(yīng)，有助于全面考察中藥復(fù)方的藥物作用。血清藥物化學(xué)主要檢查并觀測血清中外源性生物活性物質(zhì)及其作用和代謝規(guī)律。王喜軍等［17］采用超高效液相色譜聯(lián)合紫外光譜及飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)，對茵陳蒿湯及其不同配伍的樣品進(jìn)行大鼠體內(nèi)血清藥物化學(xué)分析，結(jié)果鑒定出大鼠血中出現(xiàn)移形成分21個(gè)，其中8個(gè)只在全方配伍的情況下才出現(xiàn)，而在單味或任意組合藥對中均未出現(xiàn)，并且這8個(gè)成分大都具較強(qiáng)的保肝利膽活性。

2.5 計(jì)算機(jī)性味量化研究 張冉、蔣永光［18］等提出復(fù)方配伍的實(shí)質(zhì)即方-方、方-藥、藥-藥、藥-量，及方-藥、藥-證之間的關(guān)聯(lián)與對應(yīng)，分析這些關(guān)系變化特征，即可揭示復(fù)方的配伍規(guī)律。并采用現(xiàn)代數(shù)據(jù)處理技術(shù)(數(shù)據(jù)挖掘、知識發(fā)現(xiàn))，針對復(fù)方蘊(yùn)含的方、藥、證等信息，進(jìn)行相應(yīng)的關(guān)聯(lián)、對應(yīng)等量化分析，以揭示復(fù)方的配伍規(guī)律。

2.6 中藥化學(xué)成分免疫分析法 屈會(huì)化等［20］提出藥物配伍與其體內(nèi)代謝過程密切相關(guān)，可制備出中藥活性小分子單克隆抗體，利用免疫分析方法實(shí)現(xiàn)同時(shí)檢測復(fù)方中多成分在多器官或組織樣品中的含量或存在，尤其是微量或痕量成分，借此來闡明中藥的體內(nèi)代謝及相互作用，闡明復(fù)方配伍的科學(xué)內(nèi)涵。免疫分析法特異性強(qiáng)、靈敏度高，方便快捷，是復(fù)方配伍機(jī)理研究的新思路。并已建立了人參皂苷、黃芩苷、甘草酸［21］等的人工抗原的合成、單克隆抗體的制備及生物樣品的免疫檢測方法。

3 其它新技術(shù)3.1 生物芯片、蛋白組學(xué)技術(shù) 顯示中藥作用的所有靶基因，并把中藥的性味主治和其對特定疾病相關(guān)蛋白的表達(dá)與調(diào)控相關(guān)聯(lián)，從分子水平上詮釋傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論及其作用機(jī)制。

3.2 代謝組學(xué)、系統(tǒng)生物學(xué)技術(shù) 分析確定生物體系統(tǒng)生化譜圖和功能調(diào)控規(guī)律，對某一生物或細(xì)胞所有低相對分子質(zhì)量代謝產(chǎn)物定性、定量分析，可應(yīng)用于復(fù)方有效成分的篩選、以及作用機(jī)理等而發(fā)揮重要作用。

展望 中藥的復(fù)方配伍研究龐大復(fù)雜，涉及中藥、藥理、分子生物等多學(xué)科的融合交叉，而目前研究仍以臨床療效觀察為主，實(shí)驗(yàn)藥理學(xué)也多未展開分子、細(xì)胞水平上的深入系統(tǒng)研究。相信隨著相關(guān)學(xué)科更多高新技術(shù)的應(yīng)用，復(fù)方研究會(huì)日漸深入，其科學(xué)內(nèi)涵將日益明了，有望將復(fù)方的研究與應(yīng)用推向新的高度，從而推動(dòng)中醫(yī)藥現(xiàn)代化產(chǎn)業(yè)進(jìn)程，更好地服務(wù)于人類健康。

［1］羅國安，王義明.中藥復(fù)方有效部分研究方法以及理論初探［J］.中成藥，1997，19(8):44-45.

［2］杜冠華.中藥復(fù)方有效成分組學(xué)研究［J］.中成藥，2002，24(11):878-880.

［3］張 冉，劉 泉，杜冠華，等 應(yīng)用 α-葡萄糖苷酶抑制劑高通量篩選模型篩選降血糖中藥［J］.中國藥學(xué)雜志，2007，42.(10):740-743.

［4］馬增春，高月，譚洪玲，等 用分子中藥組學(xué)技術(shù)研究四物湯補(bǔ)血的作用機(jī)理［J］.世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2005，7(3):24-28.

［5］李鷹飛，佟 麗，梁乾德，等.四物湯化學(xué)成分組合對人骨髓基質(zhì)細(xì)胞系HFCL細(xì)胞增殖及造血相關(guān)基因表達(dá)的影響［J］.中草藥，2005，36(3):386-389.

［6］劉建勛，任鈞國.中藥復(fù)方作用物質(zhì)基礎(chǔ)研究探討［J］.中藥研究與信息，2004，6(12):8-11.

［7］唐文富，萬美華，黃 熙.方劑組織藥理學(xué)新假說［J］.中草藥，2005，36(1):1-3.

［8］唐文富，陳光遠(yuǎn)，黃 熙 方劑代謝物組學(xué)新假說［J］.中草藥，2007，38(6):801-803.

［9］梁日欣，黃璐琦.藥對川芎和赤芍對高脂血癥大鼠降脂，抗氧化及血管內(nèi)皮功能的實(shí)驗(yàn)觀察［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志 ，2002，8(1):432-451.

［10］熊 倩，張 密，鄭青山.麻黃湯不同配伍對大鼠發(fā)汗作用的定量評價(jià)［J］.中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2011，14(7):763-768.

［11］甘洪全，梅其炳，黃 熙.冠心Ⅱ號的藥動(dòng)學(xué)2藥效學(xué)研究［D］.中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文，2004.87.

［12］陳淵成，曹彥光，郝 琨，等.間接藥動(dòng)-藥效模型參數(shù)的計(jì)算程序［J］.中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，38(1):55-59.

［13］周京滋，陳長勛，蘇健美，等.附子、四逆湯鎮(zhèn)痛、抗炎作用的藥效動(dòng)力學(xué)研究［J］.中國中藥雜志，1992，(2):42.

［14］莫紅纓，賴克方，鐘南山，等.雙黃連及其拆方抗呼吸道合胞病毒作用的藥效學(xué)研究［J］.中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志2005，11.3:194-196.

［15］馬 駿，唐 燦，李增強(qiáng)，等.中藥血清藥理學(xué)的方法學(xué)研究在中藥復(fù)方藥物動(dòng)力學(xué)研究中的應(yīng)用［J］.中藥藥理與臨床，1999，15(3):44.

［16］王喜軍，孫文軍，孫 暉，等.茵陳蒿湯不同配伍變化對大鼠血中移形成分的影響［J］.中國天然藥物，2008，6(1):43.

［17］蔣永光，胡 波，劉 娟，等.中藥復(fù)方性味的量化處理與表達(dá)初探［J］.江蘇中醫(yī)藥2005，26(2):36.

［18］屈會(huì)化，趙 琰，王慶國.基于中藥活性小分子單克隆抗體的復(fù)方配伍機(jī)理研究新思路［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2012 ，10(32):1416-1418.

［19］張 越，屈會(huì)化，吳婷婷，等.甘草酸單克隆抗體的制備與鑒定［J］.藥物分析雜志2013，33.(5):770-774.

［20］周紅光，陳海彬，王瑞平，等.代謝組學(xué)在中藥復(fù)方研究中的應(yīng)用［J］.中國藥理學(xué)通報(bào)，2013，29(2):161-165.