劉國偉，邱 鋼，張 萍 (廣東省深圳市龍崗區(qū)橫崗人民醫(yī)院，廣東 深圳 518115)

乳腺癌作為女性排名第一的常見惡性腫瘤，其對女性的健康造成了嚴(yán)重的影響［1］。BRMS1對腫瘤的形成與生長不會造成影響，但其能夠有效地抵制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移［2］。本研究就針對50例結(jié)腸癌患者，采用免疫組化二步法，對結(jié)腸癌組織中BRMS1蛋白的表達(dá)進(jìn)行檢測，并綜合相關(guān)研究資料分析BRMS1在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)意義。現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料:資料選自2005年1月～2012年12月在深圳市橫崗人民醫(yī)院病理科保存的經(jīng)手術(shù)切除結(jié)腸癌50例患者的石蠟包埋標(biāo)本，其中，男27例，女23例;年齡28～71歲，平均(42±5.64)歲;患者在結(jié)腸癌術(shù)前，均未行放療、化療及靶向治療等。按照2000年WHO結(jié)腸腫瘤組織學(xué)類型的修訂方案，對50例結(jié)腸癌患者的標(biāo)本進(jìn)行分類，其中14例為黏液腺癌，36例為腺癌;并有37例未出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，13例出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。同期選擇50例癌旁正常結(jié)腸組織標(biāo)本(距腫瘤邊緣≤5 cm)，作為對照組。

1.2 方法

1.2.1 檢測試劑:采用藍(lán)基生物技術(shù)開發(fā)公司供應(yīng)的DAB顯示試劑盒;采用武漢博士德公司供應(yīng)的BRMS1免抗人單克隆抗體，使用濃度為1∶100;采用福州邁新公司供應(yīng)的即用型非生物素免疫組化EliVisionTM plus檢測試劑盒［3］。

1.2.2 檢測方法:所有標(biāo)本均由濃度為10%的福爾馬林固定，并經(jīng)常規(guī)脫水后，采用石蠟包埋。標(biāo)本切片厚度4 μm，根據(jù)免疫組化試劑盒說明書，嚴(yán)格按照正確步驟進(jìn)行操作。并設(shè)陰性與陽性對照，將PBS代替一抗的結(jié)腸組織免疫組化染色結(jié)果作為陰性對照，再將已知的結(jié)腸癌陰性片作為陽性對照［4］。

1.3 評定標(biāo)準(zhǔn):染色主要位于細(xì)胞胞漿或(和)細(xì)胞核內(nèi)，根據(jù)許良中等［5］關(guān)于基因或抑癌基因的判斷標(biāo)準(zhǔn)，對陽性表達(dá)進(jìn)行判斷，以陽性細(xì)胞的著色深度(著色深度以背景著色進(jìn)行對比)以及細(xì)胞數(shù)進(jìn)行計分。具體評分標(biāo)準(zhǔn)為:⑴染色強(qiáng)度。棕褐色－3分，棕黃色－2分，淡黃色－1分，基本不著色或無色－0分;⑵細(xì)胞所占百分比。以隨機(jī)模式對每例計數(shù)5個高倍鏡(×400)視野，并確定每個視野的陽性率，取其平均數(shù)值。＞50%:－2分，10%－50%:－1分，＜10%:－0分。再將染色強(qiáng)度與細(xì)胞所占百分比評分相加，若總評分≥3分，即可判斷為陽性;若總評分＜3分，即可判斷為陰性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法:所有數(shù)據(jù)均用SPSS 18.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計分析處理，一般資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(s)表示，計量資料采用t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗，當(dāng)P＜0.05時，表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 BRMS1在結(jié)腸癌中的表達(dá)情況:研究組細(xì)胞癌組織中的BRMS1蛋白陽性表達(dá)率為38.00%，明顯低于對照組結(jié)腸癌旁正常組織84.00%，組間比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，如表1所示。

表1 結(jié)腸癌及結(jié)腸癌旁組織中BRMS1基因蛋白表達(dá)情況［例(%)］

2.2 BRMS1表達(dá)與結(jié)腸癌臨床病理學(xué)特征的關(guān)系:BRMS1表達(dá)蛋白陽性率為53.60%，明顯高于腫塊大于5 cm者的BRMS1表達(dá)蛋白陽性率18.20%，兩者比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，如表2所示。

表2 BRMS1表達(dá)與結(jié)腸癌臨床病理學(xué)特征的關(guān)系(例)

3 討論

惡性腫瘤轉(zhuǎn)移主要是指惡性腫瘤從原發(fā)部位經(jīng)由血液、淋巴、體腔等途徑，播散到身體其他部位的一種過程。在惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移中，其轉(zhuǎn)移抵制基因起到的作用十分關(guān)鍵，當(dāng)這類基因的表達(dá)下降或者缺失時，則有可能會誘導(dǎo)腫瘤進(jìn)行轉(zhuǎn)移［6－7］。

在 2000年，Samant等［7］在研究惡性腫瘤過程中，將BRMS1轉(zhuǎn)染到高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞MDA－MB－435中，通過觀察發(fā)現(xiàn)，其轉(zhuǎn)移潛能會降低70%－90%左右。在此研究的基礎(chǔ)上，Cicek等［8］于2004年對BRMS1傳染的乳腺癌細(xì)胞MDA－MB－435與高轉(zhuǎn)移乳腺癌細(xì)胞MDA－MB－435進(jìn)比較，發(fā)現(xiàn)其轉(zhuǎn)移潛能會降低50%～90%左右，這與2000年Samant等人的研究相近。而在Saunders等［9－10］的研究中顯示，BRMS1抵制腫瘤轉(zhuǎn)移的機(jī)制有間隙連接蛋白組成變化、間隙連接信息交通等方面參與。BRMS1的轉(zhuǎn)移抵制部分，有可能是經(jīng)由修復(fù)間隙連接蛋白表達(dá)和間隙連接信息交通而實(shí)現(xiàn)的［11－12］。

Meehan等［13］發(fā)現(xiàn)BRMS1集中于細(xì)胞核，并且其也有可能包含幾塊蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)相互作用區(qū)和一塊轉(zhuǎn)錄子激活區(qū)，因此，推測BRMS1可能與轉(zhuǎn)錄子復(fù)合物調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)聯(lián)。在近年的研究中顯示，BRMS1的作用也可能與雌激素受體(ER)有關(guān)系，ER作為一種新型的雌激素受體，其主要是通過由配基激活的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子經(jīng)由招募共激活因子或是共抵制因子，來調(diào)動啟動子區(qū)域含有雌激素應(yīng)答元件的基因轉(zhuǎn)錄［14－16］。因此表明，雌激素受體為相應(yīng)的轉(zhuǎn)錄應(yīng)答、信號分子等提供了直接的聯(lián)系，也表明BRMS1行使癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移抵制的功能，也有可能與雌激素受體有關(guān)系［17］。

而通過本次研究發(fā)現(xiàn)，研究組結(jié)腸癌組織中BRMS1蛋白的表達(dá)水平，明顯要低于對照組結(jié)腸癌旁正常組織;并且有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織的BRMS1表達(dá)水平也要明顯低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的組織(P＜0.05)。而患者的性別、年齡、分化程度、病理組織學(xué)分類等指標(biāo)與BRMS1蛋白表達(dá)無明顯關(guān)系(P＞0.05)，并與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、腫瘤的大小等有關(guān)系(P＜0.05)，由此而推測BRMS1的表達(dá)下降或缺失，有可能參與了結(jié)腸癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。

綜上所述，乳腺癌轉(zhuǎn)移抵制基因1(BRMS1)不僅在乳腺癌中發(fā)揮了抵制惡性腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的有效作用，也在結(jié)腸癌等惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移抵制中發(fā)揮良好的作用。通過檢測對結(jié)腸癌組織中BRMS1蛋白的表達(dá)，有助于預(yù)后的判斷。

［1］ Seraj MJ，Samant RS，Verderame MF，et al.Functional evidence for a novel human breast carcinoma metastasis suppressor，BRMS1，encoded at chromosome 11q13［J］.Cancer Res，2000，60 (11):2764.

［2］ Shevde LA，Samant RS，Goldberg SF，et al.Suppression of human melanoma metastasis by the metastasis suppressor gene，BRMS1［J］.Exp Cell Res，2002，273(2):229.

［3］ Zhang S，Lin QD，DI W.Suppression of human ovarian carcinoma metastasis by the metastasis－suppressor gene，BRMS1［J］.Int J Gynecol Cancer，2006，16(2):522.

［4］ Seraj MJ，Harding MA，Gildea JJ，et al.The relationship of BRMS1 and RhoGDI2 gene expression to metastatic potential in lineage related human bladder cancer cell lines［J］.Clin Exp Metastasis，2000，18(6):519.

［5］ 許良中，楊文濤.免疫組織化學(xué)反應(yīng)結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)［J］.中國癌癥雜志，1996，6(4):229.

［6］ Debies MT，Welch DR.Genetic basis of human breast cancer metastasis［J］.J Mammary Gland Biol Neoplasia，2001，6(4) 441.

［7］ Samant RS，Seraj MJ，Saunders MM，et al.Analysis of mechanisms underlying BRMS1 suppression of metastasis［J］.Clin Exp Metastasis，2000，18(8):683.

［8］ Cicek M，Samant RS，Kinter M，et al.Identification of metastasis－associated proteins through protein analysis of metastatic MDA －MB －435 and metastasis－suppressed BRMS1 transfected－MDA－MB－435 cells［J］.Clin Exp Metastasis，2004，21(2):149.

［9］ Saunders MM，Seraj MJ，Li ZY，et al.Breast cancer metastatic potential correlates with a breakdown in homospecific and heterospecific gap junctional intercellular communication［J］. Cancer Res，2001，61(5):1765.

［10］ Locke D.Gap junctions in normal and neoplastic mammary gland［J］.J Pathol，1998，186(4):343.

［11］ Locke D，Perusinghe N，Newman T，et al.Developmental expression and assembly of connexins into homomeric and heteromeric gap junction hemichannels in the mouse mammary gland［J］.J Cell Physiol，2000，183(2):228.

［12］ Phillips KK，Welch DR，Miele ME，et al.Suppression of MDA－MB－435 breast carcinoma cell metastasis following the introduction of human chromosome 11［J］.Cancer Res，1996，56 (6):1222.

［13］ Meehan WJ，Samant RS，Hopper JE，et al.Breast cancer metastasis suppressor 1(BRMS1)forms complexes with retinoblastoma－binding protein 1(RBP1)and the mSin3 histone deacetylase complex and represses transcription［J］.J Biol Chem，2004，9;279(2):1562.

［14］ Robinson－Rechavi M，Escriva GH，Laudet V.The nuclear receptor superfamily［J］.Journal of Cell Science，2003，116(4): 585.

［15］ Sáez JC，Berthoud VM，Branes MC，et al.Plasma membrane channels formed by connexins:their regulation and functions［J］.Physiol Rev，2003，83(4):1359.

［16］ Kelly LM，Buggy Y，Hill A，et al.Expression of the breast cancer metastasis suppressor gene，BRMS1，in human breast carcinoma:lack of correlation with metastasis to axillary lymph nodes［J］.Tumour Bio，2005，26(4):213.

［17］ 翟 羽，歐周羅，邵志敏.BRMS1抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用及其機(jī)制研究進(jìn)展［J］.中國腫瘤雜志，2009，18(8):648.