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        2009-2011年環(huán)洞庭湖區(qū)主要活禽批發(fā)市場低致病禽流感監(jiān)測情況

        2014-04-02 05:44:12黃建龍王昌建鄧國華范仲鑫何世成朱春霞汪洪冰劉道新
        中國人獸共患病學(xué)報 2014年10期
        關(guān)鍵詞:水禽活禽批發(fā)市場

        黃建龍,王昌建 ,鄧國華,譚 丹,,范仲鑫,何世成,朱春霞,汪洪冰,劉道新

        禽流感是由正黏病毒科流感病毒屬A型流感病毒引起的一種禽類(家禽和野禽)傳染病,迄今為止,共有16種HA(H1-H16)亞型和9種NA(N1-N9)亞型被鑒定,根據(jù)禽流感病毒致病性和毒力的不同,將禽流感分為高致病性、低致病性和非致病性禽流感。高致病性禽流感的危害很大,大家對其高度關(guān)注,但近年來不斷有國家和地區(qū)有低致病性禽流感疫情的報道[1-6],其流行和傳播呈上升趨勢。很多報道顯示H9亞型禽流感是影響我國養(yǎng)禽業(yè)的主要禽流感病毒亞型,且對禽的危害越來越嚴(yán)重,除引起上呼吸道感染、產(chǎn)蛋量嚴(yán)重下降外,個別毒株可引發(fā)較大的死亡。近年來我國南方地區(qū)和香港均出現(xiàn)了人感染H9N2亞型AIV的病例[7]。有報道稱H6亞型禽流感病毒不僅可以向H5亞型高致病性禽流感病毒和H9N2亞型禽流感病毒提供內(nèi)部基因片段,而且還可以感染鼠、水貂和人[8-9]。

        為了加強(qiáng)活禽經(jīng)營市場管理,規(guī)范活禽經(jīng)營行為,為了解環(huán)洞庭湖地區(qū)主要活禽批發(fā)市場低致病性禽流感病毒的分布和流行情況,從而有效預(yù)防和控制禽流感,保護(hù)人體健康和公共衛(wèi)生安全。2009-2011年冬春季節(jié),我們對環(huán)洞庭湖活禽批發(fā)市場家禽進(jìn)行低致病性禽流感監(jiān)測,為該地區(qū)活禽批發(fā)市場低致病性禽流感的防控措施提供一些依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1樣品采集 按隨機(jī)抽樣的方法,每年的冬季和春季到每個市場抽取10個經(jīng)營戶,每戶采10對咽喉拭子和泄殖腔拭子,采樣時詳細(xì)記錄家禽產(chǎn)地、日齡、采樣數(shù)量等信息。

        1.2主要試劑 Taq DNA聚合酶、dNTPs和分子量Marker均購自寶生物工程(大連)有限公司;反轉(zhuǎn)錄酶、LS TRIzol RNA提取試劑購自Invitrogen公司。

        1.3雞胚 SPF雞胚購自哈爾濱獸醫(yī)研究所實驗動物中心。

        1.4病原分離和鑒定 拭子樣品1 000 r/min離心5 min,吸取上清液,以每胚0.2 mL的注射劑量由尿囊腔接種9~10 d齡SPF雞胚,每個樣品接種2~3枚SPF雞胚,37 ℃孵育,每天觀察2次,棄去24 h內(nèi)死亡的雞胚,及時收集之后死亡雞胚,至96 h收集所有雞胚,置于4 ℃過夜,收獲雞胚尿囊液,用血凝試驗(HA)測定,陰性者再盲傳1代,如果HA認(rèn)為陰性,則終定為陰性樣品。對HA測定有滴度的再進(jìn)行血凝抑制試驗(HI)和RT-PCT方法相結(jié)合鑒定病毒的亞型。

        2 結(jié) 果

        2.1總體檢測情況 2009-2011年,對環(huán)洞庭湖區(qū)主要活禽批發(fā)市場禽流感進(jìn)行監(jiān)測,共采集2 819對拭子,經(jīng)病原分離和鑒定發(fā)現(xiàn),有627對拭子為低致病性禽流感陽性拭子,總的分離率為22.2%,其中鴨拭子低致病性禽流感的分離率最高為24.6%,其次是雞拭子,達(dá)21.5%,鵝拭子為11%,見表1。

        表1 總體檢測結(jié)果

        2.2各個活禽批發(fā)市場低致病性禽流感分離率 在所監(jiān)測的5家活禽批發(fā)市場中都檢出陽性樣品,其中益陽市學(xué)門口市場、長沙市石馬家禽批發(fā)市場和岳陽市楓橋胡蛋禽批發(fā)市場低致病性禽流感分離率較高,分別為27.4%、27.3%和23.0%。

        2.3不同HA亞型低致病性禽流感分離率 3年的持續(xù)監(jiān)測過程中,在活禽批發(fā)市場的禽拭子中分離出了6種亞型的低致病性禽流感病毒,有H3亞型、H4亞型、H6亞型、H9亞型、H10亞型和H11亞型。其中H9亞型、H6亞型和H4亞型比較高,其分離率分別可達(dá)到11%、6.3%和3.4%。

        2.4活禽批發(fā)市場低致病性禽流感隱性帶毒種群分布情況 在對所采集的雞、鴨、鵝拭子中都檢測到禽流感病毒。在鴨拭子中可以分離到有H3、H4、H6、H9、H10和H11等6種亞型的低病性禽流感病毒,并且AIV H6亞型隱性帶毒率最高,達(dá)到10.2%。在雞拭子中可以分離到有H3、H4、H6和H9型等4種低病性禽流感病毒,其AIV H9亞型隱性帶毒率最高,達(dá)到15.1%。在鵝拭子中可以分離到有H4、H6和H9等3種亞型低病性禽流感病毒,見圖1。

        圖1活禽批發(fā)市場中雞、鴨、鵝不同HA亞型低致病性禽流感分離率

        Fig.1PositiverateofdifferentHAsubtypesoflowpathogenicavianinfluenzainchickens,ducksandgeeseinlivepoultrywholesalemarket

        3 討 論

        這3年的持續(xù)監(jiān)測過程中,每年環(huán)洞庭湖區(qū)主要活禽批發(fā)市場低致病性禽流感病毒分離率都不低。并在所監(jiān)測的5家活禽批發(fā)市場中都分離到低致病性禽流感病毒,分離出有H3、H4、H6、H9、H10型和H11等6種亞型的禽流感病毒。表明在活禽批發(fā)市場中低致病性禽流感隱性帶毒的情況普遍存在,活禽批發(fā)市場發(fā)生禽流感疫情的威脅比較大。目前,我們市場的禽流感檢疫水平不是很高,這就需要我們加強(qiáng)對活禽批發(fā)市場中家禽特別是水禽的病原學(xué)監(jiān)測和家禽的抗體水平監(jiān)測。

        水禽特別是家鴨是禽流感病毒的儲存庫和傳染源,由于家鴨經(jīng)常同時被多個亞型的禽流感病毒混合感染,這為各亞型的基因重組提供了很好的載體,禽流感病毒在水禽與陸禽間傳播,可加快表面蛋白的變異,不斷豐富內(nèi)部基因的重配,并加速了種間傳播的機(jī)會[10-11]。因此,其在流感病毒的進(jìn)化和生態(tài)分布的重要地位已經(jīng)得到廣泛認(rèn)可。在對洞庭湖區(qū)活禽批發(fā)市場所采集的雞、鴨、鵝拭子檢測中發(fā)現(xiàn),鴨拭子低致病性禽流感的分離率最高,達(dá)到24.6%,并且在鴨拭子中可以檢測到的低致病性禽流感病毒亞型最多,有H3、H4、H6、H9、H10和H11等6種亞型。通過問卷調(diào)查發(fā)現(xiàn)省內(nèi)低致病性禽流感隱性帶毒鴨拭子主要來源于長沙、益陽、岳陽和常德,表明洞庭湖區(qū)的水禽低致病性禽流感隱形帶毒是很高的,從而較大地威脅該地區(qū)發(fā)生禽流感疫情。因此,必須盡量防止野生水禽、家養(yǎng)水禽及其它野鳥與陸禽間的相互接觸,在市場禽流感的防控方面,水禽和其它禽類應(yīng)分別建立市場,獨立經(jīng)營。

        在雞拭子中可以檢測到有5種亞型低致病性禽流感病毒,這說明雞低致病性禽流感隱性帶毒也是很嚴(yán)重的。根據(jù)我們的調(diào)查和分析,活禽批發(fā)市場上的雞低致病性禽流感隱性帶毒如此之高,原因可能有以下2個方面:第一,市場上的淘汰蛋雞比較多,蛋雞感染H9亞型的幾率比較大,有些養(yǎng)殖場的雞可能感染了H9亞型禽流感導(dǎo)致產(chǎn)蛋下降而緊急淘汰這部分蛋雞;第二,有些雞可能來源于運(yùn)輸過程中的感染或市場內(nèi)陽性帶毒鴨把病毒傳播給雞的。有專家預(yù)測H9N2亞型禽流感病毒可能成為毒力較強(qiáng)的毒株,成為下次流感大流行的亞型[12]。

        本次監(jiān)測中,鵝拭子的監(jiān)測數(shù)量不是很多,但是在鵝拭子中檢測到有H4、H6和H9等3種亞型低病性禽流感病毒,說明鵝在流感病毒的進(jìn)化和生態(tài)分布的作用同樣不可忽視,須繼續(xù)加強(qiáng)和重視對各種家禽禽流感的監(jiān)測。

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