劉 誼，馮建遠(yuǎn)，李燕春，劉莉莉，祁 騰，周子人

小腸結(jié)腸炎耶爾森菌是一種腸道致病菌，在世界范圍內(nèi)常有報(bào)道它污染食品和水的案例[1]。在臨床上會(huì)引起腹瀉、小腸結(jié)腸炎、腸系膜淋巴腺炎、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、結(jié)節(jié)性紅斑和霉菌性動(dòng)脈瘤[2-3]。上個(gè)世紀(jì)80年代中國(guó)爆發(fā)過(guò)2次超過(guò)500人的小腸結(jié)腸炎耶爾森菌感染事件[4]。其存在廣泛的動(dòng)物宿主，豬是人類最普遍的感染源[5-8]。小腸結(jié)腸炎耶爾森菌有很多動(dòng)物宿主，包括豬、牛、山羊、狗和老鼠，致病的血清型只有O∶3 和O∶9[9]。小腸結(jié)腸炎耶爾森菌在四川省的感染情況如何，研究報(bào)道卻較少。為此，我們于2010-2011年對(duì)四川省家豬、腹瀉病人等樣品進(jìn)行了專項(xiàng)監(jiān)測(cè)，發(fā)現(xiàn)1例幼兒小腸結(jié)腸炎耶爾森菌感染病例，其病原特點(diǎn)與病患老家豬分離株顯示了較高的同源性，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1標(biāo)本來(lái)源 腹瀉病人來(lái)源于郫縣監(jiān)測(cè)哨點(diǎn)醫(yī)院，共150例，豬咽拭子222份采集于綿陽(yáng)市。

1.2主要儀器試劑 PCR儀(美國(guó)ABI公司)，脈沖場(chǎng)電泳儀(BIORAD)，凝膠成像儀(BIORAD)，改良磷酸鹽緩沖液(PBS)(北京陸橋)，耶爾森菌選擇瓊脂(CIN)(美國(guó)BD公司)，尿素培養(yǎng)基(日本榮研化學(xué)株式會(huì)社)，API 20E(梅里埃)。

1.3方法 樣品通過(guò)PBS緩沖液4 ℃增菌20 d，利用CIN選擇培養(yǎng)基和API 20E分離鑒定細(xì)菌，通過(guò)PCR方法[10]鑒定ail、ystA、ystB(位于染色體)[9]、yadA、virF(位于質(zhì)粒)[12]、rfbc(位于wbb基因簇)[13]、foxA[14]等毒力基因。利用脈沖場(chǎng)凝膠電泳(PFGE)對(duì)分離到的小腸結(jié)腸炎耶爾森菌進(jìn)行分子分型[11]。

2 結(jié) 果

2.1腹瀉病人檢測(cè) 2010-2011年從郫縣150例腹瀉病人中分離到Y(jié).e3株，其中1株血清型為O∶3，生物型為3型，該菌株是2011年1月12日從一幼兒體內(nèi)分離到的，經(jīng)過(guò)5個(gè)月時(shí)間連續(xù)采集大便樣，在1月12日和3月24日的樣品中分別分離到O∶3血清型小腸結(jié)腸炎耶爾森菌(見(jiàn)表1)。在5月18日和6月15日樣品中沒(méi)有分離到Y(jié).e，并且這2次樣本PCR檢測(cè)也為陰性。分離株的毒力基因結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 小腸結(jié)腸炎耶爾森菌毒力基因檢測(cè)結(jié)果

2.2溯源研究 經(jīng)流行病學(xué)調(diào)查，該患兒老家在四川綿陽(yáng)市，發(fā)病前10 d回過(guò)綿陽(yáng)老家，剛好我省2010年在綿陽(yáng)市進(jìn)行了畜間小腸結(jié)腸炎耶爾森菌感染情況調(diào)查，2010年9月在綿陽(yáng)市采集豬咽拭子99份，分離到菌株9株，12月綿陽(yáng)市采集豬咽拭子123份，分離到菌株5株，血清型都是O∶3，生物型都是3型，毒力基因檢測(cè)結(jié)果ail、ystA、yadA、virF、rfbc、foxA都是陽(yáng)性，ystB陰性，這與幼兒體內(nèi)分離到的Y.e毒力基因一致。脈沖場(chǎng)凝膠電泳結(jié)果表明從該幼兒體內(nèi)分離到的Y.e與四川省綿陽(yáng)市家豬體內(nèi)分離到的2株Y.e完全同源，PFGE基因型沒(méi)有差異，與另外12株菌同源性大于93%(見(jiàn)圖1)。

圖1 小腸結(jié)腸炎耶爾森菌脈沖場(chǎng)電泳(PFGE)結(jié)果

3 討 論

郫縣幼兒在2011年元旦節(jié)回到綿陽(yáng)市農(nóng)村老家，接觸過(guò)家豬，在1月12日患水便樣腹瀉。我們?cè)?月24日、5月18日和6月15日連續(xù)采集幼兒糞便。特別是從3月24日這次的樣品分離到小腸結(jié)腸炎耶爾森菌，說(shuō)明了該幼兒去醫(yī)院治愈腹瀉后的一段時(shí)間內(nèi)，Y.e還是存在于他的體內(nèi)，通過(guò)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可以看出這個(gè)時(shí)間至少有2個(gè)月，表明小腸結(jié)腸炎耶爾森菌會(huì)存在于治愈病人的體內(nèi)，而不會(huì)引起宿主的腹瀉癥狀。

從患兒大便中分離到的小腸結(jié)腸炎耶爾森菌不管是血清型、生物型還是毒力基因(表1)都跟豬體內(nèi)分離到的Y.e都一樣，通過(guò)PFGE試驗(yàn)也表明從幼兒體內(nèi)分離到的2株小腸結(jié)腸炎耶爾森菌與綿陽(yáng)家豬分離到的2株小腸結(jié)腸炎耶爾森菌完全同源(圖1)。因而推測(cè)，人通過(guò)接觸，家豬將小腸結(jié)腸炎耶爾森菌傳染給了人，同時(shí)流行病學(xué)上調(diào)查結(jié)果也得到佐證，解釋了這個(gè)病例的傳染來(lái)源。

因此，該病例是很特殊并且很有價(jià)值。我們證實(shí)了小腸結(jié)腸炎耶爾森菌從家豬傳染給人的過(guò)程，且小腸結(jié)腸炎耶爾森菌會(huì)存在于治愈患兒的體內(nèi)，而不會(huì)引起宿主的腹瀉，至于成人會(huì)不會(huì)也有這種情況尚不得而知。對(duì)于小腸結(jié)腸炎耶爾森菌存在于治愈患兒體內(nèi)但又不會(huì)引起腹瀉的原因及機(jī)理，需要在以后的工作中進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)：

[1]Wang X, Li Y, Jing HQ, et al. Complete genome sequence of aYersiniaenterocolitca“old world” (3/O∶9) strain and comparison with the "new world" (1B/O∶8) strain[J]. J Clin Microbiol, 2011, 49: 1251-1259. DOI: 10.1128/JCM.01921-10

[2]Bottone EJ.Yersiniaenterocolitica: the charisma continues[J]. Clin Microbiol Rev, 1997, 10(2): 257-276.

[3]Cover TL, Aber RC.Yersiniaenterocolitica[J]. N Engl J Med, 1989, 321(1): 16-24.

[4]Wang X, Qiu H, Jin D, et al. O∶8 serotypeYersiniaenterocoliticastrains in China[J]. Int J Food Microbiol, 2008, 125(3): 259-266. DOI: 10.1016/j.ijfoodmicro.2008.04.016

[5]Horisaka T, Fujita K, Iwata T, et al. Sensitive and specific detection ofYersiniapseudotuberculosisby loop-mediated isothermal amplification[J]. J Clin Microbiol, 2004, 42: 5349-5352. DOI: 10.1128/jcm.42.11.5349-5352.2004

[6]Jones TF. From pig to pacifier: chitterling-associatedyersiniosisoutbreak among black infants[J]. Emerg Infect Dis, 2003, 9: 1007-1009. DOI:10.3201/eid0908.030103

[7]Nesbakken T, Iversen T, Lium B. Pig herds free form human pathogenicYersiniaenterocolitca[J]. Emerg Infect Dis, 2007, 13: 1860-1864. DOI:10.3201/eid1312.070531

[8]Rasmussen HN, Rasmussen OF, Christensen H, et al. Detection ofYersiniaenterocolitcaO∶3 in faecal samples and tonsil swabs from pigs using IMS and PCR[J]. J Appl Bacteriol, 1995, 78: 563-568. DOI: 10.1111/j.1365-2672.1995.tb03100.x

[9]Wang X, Cui Z, Jin D, et al. Distribution of pathogenicYersiniaenterocolitcain China[J]. Eur J Clin Microbiol Infect Dis, 2009, 28: 1237-1244. DOI: 10.1007/s10096-009-0773-x

[10]Wang X, Qiu H, Jin D, et al. O∶8 serotypeYersiniaenterocoliticastrains in China[J]. Int J Food Microbiol, 2008, 125(3): 259-266. DOI: 10.1007/s10096-009-0773-x

[11]Bottone EJ.Yersiniaenterocolitica: a panoramic view of a charismatic microorganism[J]. CRC Crit Rev Microbiol, 1977, 5(2): 211-241. DOI: 10.3109/10408417709102312

[12]Thoerner P, Bin Kingombe CI, Bogli-Stuber K, et al. PCR detection of virulence genes inYersiniaenterocoliticaandYersiniapseudotuberculosisand investigation of virulence gene distribution[J]. Appl Environ Microbiol, 2003, 69: 1810-1816. DOI: 10.1128/aem.69.3.1810-1816.2003

[13]Weynants V, Jadot V, Denoel PA, et al. Detection ofYersiniaenterocoliticaserogroup O∶3 by a PCR method[J]. J Clin Microbiol, 1996, 34: 1224-1227.

[14]Huang Y, Wang X, Cui Z, et al. Possible use of ail andfoxA polymorphisms for detecting pathogenicYersiniaenterocolitica[J]. BMC Microbiol, 2010, 10: 211. DOI: 10.1186/1471-2180-10-211