劉 誼，馮建遠(yuǎn)，李燕春，劉莉莉，祁 騰，周子人

小腸結(jié)腸炎耶爾森菌是一種腸道致病菌，在世界范圍內(nèi)常有報(bào)道它污染食品和水的案例[1]。在臨床上會(huì)引起腹瀉、小腸結(jié)腸炎、腸系膜淋巴腺炎、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、結(jié)節(jié)性紅斑和霉菌性動(dòng)脈瘤[2-3]。上個(gè)世紀(jì)80年代中國爆發(fā)過2次超過500人的小腸結(jié)腸炎耶爾森菌感染事件[4]。其存在廣泛的動(dòng)物宿主，豬是人類最普遍的感染源[5-8]。小腸結(jié)腸炎耶爾森菌有很多動(dòng)物宿主，包括豬、牛、山羊、狗和老鼠，致病的血清型只有O∶3 和O∶9[9]。小腸結(jié)腸炎耶爾森菌在四川省的感染情況如何，研究報(bào)道卻較少。為此，我們于2010-2011年對(duì)四川省家豬、腹瀉病人等樣品進(jìn)行了專項(xiàng)監(jiān)測(cè)，發(fā)現(xiàn)1例幼兒小腸結(jié)腸炎耶爾森菌感染病例，其病原特點(diǎn)與病患老家豬分離株顯示了較高的同源性，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1標(biāo)本來源 腹瀉病人來源于郫縣監(jiān)測(cè)哨點(diǎn)醫(yī)院，共150例，豬咽拭子222份采集于綿陽市。

1.2主要儀器試劑 PCR儀(美國ABI公司)，脈沖場(chǎng)電泳儀(BIORAD)，凝膠成像儀(BIORAD)，改良磷酸鹽緩沖液(PBS)(北京陸橋)，耶爾森菌選擇瓊脂(CIN)(美國BD公司)，尿素培養(yǎng)基(日本榮研化學(xué)株式會(huì)社)，API 20E(梅里埃)。

1.3方法 樣品通過PBS緩沖液4 ℃增菌20 d，利用CIN選擇培養(yǎng)基和API 20E分離鑒定細(xì)菌，通過PCR方法[10]鑒定ail、ystA、ystB(位于染色體)[9]、yadA、virF(位于質(zhì)粒)[12]、rfbc(位于wbb基因簇)[13]、foxA[14]等毒力基因。利用脈沖場(chǎng)凝膠電泳(PFGE)對(duì)分離到的小腸結(jié)腸炎耶爾森菌進(jìn)行分子分型[11]。

2 結(jié) 果

2.1腹瀉病人檢測(cè) 2010-2011年從郫縣150例腹瀉病人中分離到Y(jié).e3株，其中1株血清型為O∶3，生物型為3型，該菌株是2011年1月12日從一幼兒體內(nèi)分離到的，經(jīng)過5個(gè)月時(shí)間連續(xù)采集大便樣，在1月12日和3月24日的樣品中分別分離到O∶3血清型小腸結(jié)腸炎耶爾森菌(見表1)。在5月18日和6月15日樣品中沒有分離到Y(jié).e，并且這2次樣本PCR檢測(cè)也為陰性。分離株的毒力基因結(jié)果見表1。

表1 小腸結(jié)腸炎耶爾森菌毒力基因檢測(cè)結(jié)果

2.2溯源研究 經(jīng)流行病學(xué)調(diào)查，該患兒老家在四川綿陽市，發(fā)病前10 d回過綿陽老家，剛好我省2010年在綿陽市進(jìn)行了畜間小腸結(jié)腸炎耶爾森菌感染情況調(diào)查，2010年9月在綿陽市采集豬咽拭子99份，分離到菌株9株，12月綿陽市采集豬咽拭子123份，分離到菌株5株，血清型都是O∶3，生物型都是3型，毒力基因檢測(cè)結(jié)果ail、ystA、yadA、virF、rfbc、foxA都是陽性，ystB陰性，這與幼兒體內(nèi)分離到的Y.e毒力基因一致。脈沖場(chǎng)凝膠電泳結(jié)果表明從該幼兒體內(nèi)分離到的Y.e與四川省綿陽市家豬體內(nèi)分離到的2株Y.e完全同源，PFGE基因型沒有差異，與另外12株菌同源性大于93%(見圖1)。

圖1 小腸結(jié)腸炎耶爾森菌脈沖場(chǎng)電泳(PFGE)結(jié)果

3 討 論

郫縣幼兒在2011年元旦節(jié)回到綿陽市農(nóng)村老家，接觸過家豬，在1月12日患水便樣腹瀉。我們?cè)?月24日、5月18日和6月15日連續(xù)采集幼兒糞便。特別是從3月24日這次的樣品分離到小腸結(jié)腸炎耶爾森菌，說明了該幼兒去醫(yī)院治愈腹瀉后的一段時(shí)間內(nèi)，Y.e還是存在于他的體內(nèi)，通過實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可以看出這個(gè)時(shí)間至少有2個(gè)月，表明小腸結(jié)腸炎耶爾森菌會(huì)存在于治愈病人的體內(nèi)，而不會(huì)引起宿主的腹瀉癥狀。

從患兒大便中分離到的小腸結(jié)腸炎耶爾森菌不管是血清型、生物型還是毒力基因(表1)都跟豬體內(nèi)分離到的Y.e都一樣，通過PFGE試驗(yàn)也表明從幼兒體內(nèi)分離到的2株小腸結(jié)腸炎耶爾森菌與綿陽家豬分離到的2株小腸結(jié)腸炎耶爾森菌完全同源(圖1)。因而推測(cè)，人通過接觸，家豬將小腸結(jié)腸炎耶爾森菌傳染給了人，同時(shí)流行病學(xué)上調(diào)查結(jié)果也得到佐證，解釋了這個(gè)病例的傳染來源。

因此，該病例是很特殊并且很有價(jià)值。我們證實(shí)了小腸結(jié)腸炎耶爾森菌從家豬傳染給人的過程，且小腸結(jié)腸炎耶爾森菌會(huì)存在于治愈患兒的體內(nèi)，而不會(huì)引起宿主的腹瀉，至于成人會(huì)不會(huì)也有這種情況尚不得而知。對(duì)于小腸結(jié)腸炎耶爾森菌存在于治愈患兒體內(nèi)但又不會(huì)引起腹瀉的原因及機(jī)理，需要在以后的工作中進(jìn)一步研究。

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