張武崗， 張小娟， 陳海芳， 宋永貴,， 馮育林,*， 楊世林,

( 1.中藥固體制劑制造技術(shù)國(guó)家工程研究中心，江西 南昌 330006; 2.江西中醫(yī)藥大學(xué)，江西 南昌 330006)

舒胸滴丸是由《中國(guó)藥典》收載舒胸片改制而來(lái)，由三七、川芎和紅花三味中藥組成，具有活血、祛瘀、止痛之功效，臨床主要用于冠心病、心絞痛、心律失常、軟組織損傷等疾病[1-2]。舒胸滴丸以舒胸片組方為基礎(chǔ)，將三七、川芎和紅花三味藥材的提取物制成的治療冠心病心絞痛的速效制劑。已有報(bào)道證實(shí)三七、紅花和川芎三味中藥有效成分組與舒胸片原方具有相似的藥理效應(yīng)[3]。滴丸與片劑相比具有生物利用度高、流動(dòng)性好、釋藥穩(wěn)定、起效快的特點(diǎn)[4]。目前舒胸滴丸的文獻(xiàn)報(bào)道集中在提取[2,5]、制劑處方[4,6]研究方面，因此本實(shí)驗(yàn)參考文獻(xiàn)[7-10]，采用HPLC 法同時(shí)測(cè)定舒胸滴丸中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb13種有效成分的量，以能更全面評(píng)價(jià)舒胸滴丸的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津LC-10ATVP 高效液相色譜儀(SPD-M10Avp 檢測(cè)器、CLASS-VP 軟件)；島津AUW220D型十萬(wàn)分之一電子天平。

1.2 試藥 人參皂苷Rg1(批號(hào)110703-201019)、人參皂苷Rb1(批號(hào)110704-201117)、三七皂苷R1(批號(hào)110745-200912)以上均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。舒胸滴丸自制(30 mg/丸，批號(hào)分別為110601、110602、110603)。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液配制

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1對(duì)照品適量，加甲醇制成每1.0 mL含三七皂苷R1為0.123 mg、人參皂苷Rg1為0.31 mg、人參皂苷Rb1為0.48 mg的混合液，即得。

2.1.2 供試品溶液制備 取舒胸滴丸約0.64 g，研細(xì)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理(功率250 W，頻率50 kHz)20 min，放冷，密塞，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.1.3 陰性供試品溶液的制備 三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1均為三七提取物中成分，故按處方比例制備缺三七提取物的陰性樣品，按“2.1.2”項(xiàng)下操作，即得陰性供試品溶液。

2.2 色譜條件 Hypersil ODS2,C18色譜柱(250 mm× 4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相為乙腈-水(25∶75)洗脫；體積流量1 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)203 nm；柱溫25 ℃；進(jìn)樣量20 μL。

2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 分別吸取對(duì)照品貯備液、陰性樣品溶液和供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖(見(jiàn)圖1)。結(jié)果表明，三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1的保留時(shí)間分別為28.0 min、32.5 min、62.5 min，且各色譜峰均達(dá)到基線分離，分離度均大于1.5。理論塔板數(shù)按三七皂苷R1計(jì)算不低于8000。樣品中其他成分對(duì)3個(gè)待測(cè)成分的測(cè)定無(wú)干擾。

圖1 混合對(duì)照品(A)、舒胸滴丸中樣品(B)、陰性樣品(C)HPLC圖譜

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性范圍 分別精密吸取上述混合對(duì)照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0 mL，置5 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照上述色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖。以質(zhì)量濃度X(μg/mL) 為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)作圖，得回歸方程。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1線性關(guān)系結(jié)果

2.4.2 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品(批號(hào)：110601) 6 份，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備成供試品溶液，在上述色譜條件下分別進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果樣品中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1平均含有量(n=6)分別為7.33、29.33、35.00 mg/g，RSD分別為1.0%、1.3%、0.75%，表明方法重復(fù)性良好。

2.4.3 精密度試驗(yàn) 按“2.1.2”項(xiàng)制備一份供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6針，在上述色譜條件下分別進(jìn)樣測(cè)定。三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1峰面積的RSD分別為1.9%、0.92%、1.2%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 按“2.1.2”項(xiàng)制備一份供試品溶液，分別于0、2、4、8、16、24 h后進(jìn)樣，在上述色譜條件下分別進(jìn)樣測(cè)定。三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1峰面積的RSD分別為1.8%、1.2%、1.1%，結(jié)果表明供試品溶液有很好的穩(wěn)定性，在24 h內(nèi)較穩(wěn)定。

2.4.5 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含有量的舒胸滴丸樣品(批號(hào)：110601)6份，分別置50 mL量瓶中，按80%、100%、120%的量各加入三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1對(duì)照品，按“2.1.2”項(xiàng)方法制備溶液，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1平均回收率(n=6)分別為99.04%、100.79%、99.97%，RSD分別為1.62%、1.32%、2.60%。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 3個(gè)成分回收率考察

2.4.6 樣品測(cè)定 取3 個(gè)批號(hào)的舒胸滴丸樣品，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定各成分的峰面積，代入各自的線性方程，計(jì)算三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1的量，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 舒胸滴丸中3種成分的測(cè)定結(jié)果(mg·g-1)

3 討論

3.1 樣品提取方法考察 實(shí)驗(yàn)中考察了超聲和加熱回流2 種提取方法，結(jié)果表明超聲提取所得的樣品中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1的量均高于加熱回流提取。在超聲提取方法中，考察了超聲10、20、30、40、50、60 min不同時(shí)間的提取效果，結(jié)果表明在超聲提取20 min后三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1的量無(wú)顯著變化，因此選取超聲20 min。

3.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 利用高效液相色譜儀中二極管陣列檢測(cè)器的波長(zhǎng)掃描功能，進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，得到人參皂苷Rg1對(duì)照品、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的紫外吸收光譜，結(jié)果表明其吸收波長(zhǎng)僅在末端，最大吸收為203 nm。

3.3 結(jié)論 本實(shí)驗(yàn)建立的HPLC 測(cè)定舒胸滴丸中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1含量的方法，針對(duì)3 個(gè)指標(biāo)成分進(jìn)行分析，專屬性強(qiáng)，簡(jiǎn)便可靠，為舒胸滴丸質(zhì)量控制提供了科學(xué)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì)． 中華人民共和國(guó)藥典: 2010 年版一部[S]． 北京: 中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010: 1166.

[2] 張武崗,馮育林,宋永貴,等.舒胸滴丸中紅花和川芎混合提取物純化工藝[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2012,23(12):2977-2979.

[3] 魏 巍,傅繼華,張 拓,等.有效成分組替代舒胸片原復(fù)方可行性的藥效學(xué)探討[J].中成藥,2008,30(12):1748-1753.

[4] 楊麗麗,劉 康,黃羅生,等.舒胸滴丸的處方篩選及藥效學(xué)研究[J].海峽藥學(xué),2012,24(8):35-39.

[5] 蔣珍藕,黃明桂,鄧聿胤.舒胸滴丸提取純化工藝的研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2007,13(3):29-31.

[6] 顧燕飛,黃羅生,趙浩如.舒胸滴丸制劑處方及制備工藝研究[J].海峽藥學(xué),2010,22(2):12-15.

[7] 汪 霞. RP-HPLC 法測(cè)定舒胸膠囊中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1的含量[J].中國(guó)藥事,2011,25(3):289-291.

[8] 李 欣,陳曉輝,齊丹丹,等. HPLC法同時(shí)測(cè)定舒胸片中三七皂苷R1和人參皂苷Rg1的含量[J].藥物分析雜志, 2005, 25(6): 648- 650.

[9] 張漢杰,邱明豐,謝國(guó)祥,等. HPLC測(cè)定舒胸滴丸中人參皂苷Rg1的含量[J].中成藥,2007,27(5):附10-12.

[10] 張漢杰,吳建兵,邱明豐,等.HPLC測(cè)定舒胸滴丸中阿魏酸的含量[J].中國(guó)中藥雜志,2007,32(1):78-79.