張小方，宋俊香，王 靜，云 鷹

(1.黃淮學(xué)院，河南駐馬店 463000;2.首都醫(yī)科大學(xué)附屬?gòu)?fù)興醫(yī)院，北京 100038)

丹參注射液為中藥制劑，是治療系膜增生性胃炎(MsPGN)常用的活血化瘀藥，臨床應(yīng)用取得了一定的效果。目前，對(duì)丹參治療MsPGN的研究多局限于血液指標(biāo)的異常，而針對(duì)腎臟組織病理影響的研究報(bào)道較少。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)抗Thy-1系膜增生性腎炎大鼠動(dòng)物模型，從腎臟病理和分子水平初步探討丹參注射液治療MsPGN抗凝以外的療效機(jī)制，為丹參注射液用于臨床提供更多的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康雄性SD大鼠45只 (由河南省動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供)，清潔級(jí)，體質(zhì)量(130±20)g。

1.1.2 藥物及試劑 丹參注射液由正大青春寶藥業(yè)有限公司提供 (規(guī)格10 mL/支)，肝素鈉購(gòu)自常州千紅生化制藥有限公司 (每支規(guī)格2 mL/12500單位)。IV-C放射免疫試劑盒購(gòu)自上海海軍醫(yī)學(xué)生物技術(shù)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 分組及造模 大鼠購(gòu)回后適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，測(cè)定尿潛血及蛋白定性為陰性，隨機(jī)取9只為空白組。按文獻(xiàn)資料制備兔抗大鼠胸腺細(xì)胞免疫血清 (ATS)［1］，另外36只均給大鼠尾靜脈一次性注射ATS(8 mL/kg)，將已成模大鼠隨機(jī)分為模型組、肝素組、丹參注射液高劑量組 (丹高組)、丹參注射液低劑量組 (丹低組)，每組9只。

1.2.2 給藥 自MsPGN模型制備第1天起，肝素組予肝素鈉注射液200 u/(kg·d)，丹高組、丹低組分別予丹參注射液5.6、1.4 mL/(kg·d)，腹腔注射，每日一次，連用14 d。

1.2.3 IV-C的水平測(cè)定 造模前及造模后第7天、第14天使用代謝籠收集大鼠12 h尿液標(biāo)本，放免法測(cè)定尿IV-C的水平。

1.2.4 腎標(biāo)本病理學(xué)檢查及圖像分析 造模后第14天處死大鼠，切除腎組織。腎臟病理切片采用蘇木素－伊紅(HE)、糖原 (PAS)染色，光學(xué)顯微鏡觀察，計(jì)算腎小球系膜細(xì)胞 (GMC)數(shù)。將圖像輸入HPIAS-1000高清晰醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)，鼠標(biāo)圈定系膜區(qū)，計(jì)算ECM陽(yáng)性面積比值 (陽(yáng)性面積/腎小球總面積)。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠尿IV-C水平的變化 造模后一周，各防治組及模型組大鼠尿IV-C水平明顯高于空白組 (P＜0.01)，但模型組、丹高組、丹低組、肝素組之間沒(méi)有差異，提示造模后一周尿IV-C水平雖有明顯升高，但一周時(shí)各用藥組尚不能降低尿IV-C水平。造模后兩周，丹高組、肝素組尿IV-C水平明顯低于模型組 (P＜0.05)，但肝素組與丹高組之間沒(méi)有差異，說(shuō)明高劑量丹參注射液用藥兩周后雖未能使尿IV-C水平降至正常，但可明顯降低尿IV-C水平。見(jiàn)表1。

2.2 丹參注射液對(duì)模型大鼠GMC及ECM的影響 模型組GMC數(shù)及系膜基質(zhì) (ECM)面積比值明顯高于空白組(P＜0.01)，而丹高組、肝素組明顯低于模型組 (P＜0.01)，提示高劑量丹參注射液與肝素可明顯改善腎臟病理，療效相當(dāng)。見(jiàn)表2。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)采用目前國(guó)內(nèi)外公認(rèn)的抗Thy-1系膜增生性腎炎模型，病理切片觀察示模型組及各防治組與空白組相比GMC數(shù)明顯增多，ECM增加，同時(shí)實(shí)驗(yàn)大鼠尿檢示IV-C水平明顯高于空白組，造模后兩周達(dá)高峰。這一結(jié)果，與國(guó)內(nèi)外研究［2-7］報(bào)道一致，即系膜增生性腎炎時(shí)，尿中IVC水平隨著GMC增殖、ECM積聚程度而遞增。以上說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)建立的抗Thy-1系膜增生性腎炎模型符合實(shí)驗(yàn)要求。

表1 各組大鼠尿IV-C水平的變化 (ng/mL，)

表1 各組大鼠尿IV-C水平的變化 (ng/mL，)

注:與空白組相比，▲▲ P ＜0.01;與模型組相比，★P ＜0.05，★★P ＜0.01

造模前 造模后一周 造模后兩周空白組 9 47.65±19.35 44.61±23.23★★ 43.67±22.34組別 動(dòng)物數(shù)/個(gè)★★模型組 9 50.53±26.57 89.83±36.59▲▲ 116.92±36.93▲▲丹高組 9 49.61±20.34 95.49±24.38▲▲ 82.63 ±28.03▲▲★丹低組 8 49.71±20.48 106.17±29.04▲▲ 108.17±28.74▲▲肝素組 9 44.73±24.93 80.77±12.88▲▲ 89.69±32.19▲▲★

表2 ECM陽(yáng)性面積比值及GMC計(jì)數(shù)比較 ()

表2 ECM陽(yáng)性面積比值及GMC計(jì)數(shù)比較 ()

注:與空白組相比，▲▲P＜0.01;與模型組相比，★★P＜0.01

腎小球總面積空白組 9 45.44±8.29★★ 0.12±0.01組別 例數(shù)/n 腎小球系膜細(xì)胞數(shù)/個(gè) ECM/★★模型組 9 88.67±13.17▲▲ 0.26±0.02▲▲丹高組 9 68.44±16.96▲▲★★ 0.16±0.01▲▲★★丹低組 8 82.38±17.58▲▲ 0.24±0.03▲▲肝素組 9 66.00±10.54▲▲★★ 0.15±0.01▲▲★★

丹參注射液是在腎臟疾病中廣泛應(yīng)用的活血化瘀藥，且無(wú)明顯毒副作用，并取得了一定的臨床療效［8］?，F(xiàn)代藥理研究證實(shí)丹參具有抑制凝血及血小板凝聚、激活纖溶、減少血栓形成、改善微循環(huán)等作用［9］，修復(fù)損傷的血管內(nèi)膜，從而改善腎臟血供，保護(hù)腎臟功能和促進(jìn)腎臟功能，起到防治并發(fā)癥的作用［10］。既往研究多側(cè)重于丹參對(duì)血液流變學(xué)、血小板功能的影響，而從分子生物學(xué)和腎臟病理改變角度探討其對(duì)MsPGN影響的報(bào)道較少。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，丹參注射液用藥一周并不能降低尿IV-C水平，用藥兩周后高劑量丹參注射液可明顯降低尿IV-C水平。丹參注射液可降低尿IV-C水平，明顯改善腎臟病理?yè)p害，這一結(jié)果與相關(guān)報(bào)道［11-13］一致。以上結(jié)果提示丹參注射液防治MsPGN的療程應(yīng)不少于兩周。丹參注射液的活血化瘀作用除改善血液高凝指標(biāo)外，尚可通過(guò)抑制IV-C的產(chǎn)生，有抑制GMC增生、減少ECM積聚的作用，為丹參注射液治療MsPGN拓寬了應(yīng)用范圍，有助于指導(dǎo)臨床。

肝素雖可減少多種ECM成分的堆積 (如 IV-C、FN等)，抑制糖尿病腎病大鼠的ECM蓄積，減輕腎臟病變［14］，但肝素治療腎小球疾病在臨床中有一定的副作用。有研究發(fā)現(xiàn)肝素能夠抑制GMC增生，但因其易導(dǎo)致出血，使臨床應(yīng)用受到限制［15］。丹參注射液為純中藥制劑，尚未發(fā)現(xiàn)有明顯不良反應(yīng)，且價(jià)格低廉，在無(wú)檢測(cè)出凝血指標(biāo)的情況下使用，具有一定的優(yōu)勢(shì)。

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