栗艷松

乳腺癌是當(dāng)今世界上嚴(yán)重危害女性健康的惡性腫瘤之一，全世界每年新發(fā)現(xiàn)的病例超過100萬，在我國(guó)乳腺癌發(fā)病率呈逐步上升趨勢(shì)。其中三陰性乳腺癌(triple negative breast cancer，TNBC)是指雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)和人表皮生長(zhǎng)因子受體2(Her-2)均為陰性的乳腺癌，約占全部腺癌的10%～20.8%［1］。三陰性乳腺癌與其他類型乳腺癌相比較，具有侵襲性強(qiáng)、預(yù)后差的特點(diǎn)［2，3］，并且缺乏內(nèi)分泌及特異性靶向治療靶點(diǎn)［4，5］。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)是腫瘤血管生成的主要因子，很多研究已經(jīng)證實(shí)高表達(dá)VEGF的乳腺癌患者生存期往往較短［6］。P53基因是目前腫瘤界研究最活躍的基因之一，它對(duì)于細(xì)胞周期以及細(xì)胞程序化死亡的調(diào)控起重要作用。P53基因突變與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。據(jù)報(bào)道在人類乳腺癌中P53基因的突變率為15%～60%［7］。本研究通過免疫組織化學(xué)的方法分析VEGF、P53在三陰性乳腺癌中的表達(dá)，了解它們與病理特征和預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集我院病理科2008年1月至2013年12月有完整標(biāo)本檔案的TNBC 67例和NTNBC 125例臨床資料。所有病例未接受術(shù)前輔助化療，患者均為女性。

1.2 檢測(cè)方法 采用免疫組化SP法，第一抗體VEGF、P53及SP通用試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司，操作步驟按試劑盒說明書進(jìn)行。用已知陽性切片作陽性對(duì)照，PBS緩沖液代替一抗作陰性對(duì)照。

1.3 陽性判定標(biāo)準(zhǔn) 陽性物質(zhì)為棕黃色，ER、PR、P53陽性信號(hào)位于細(xì)胞核;Her-2按照乳腺癌Her-2檢測(cè)指南(2009版)標(biāo)準(zhǔn)判定［8］，細(xì)胞膜陽性(+++)視為陽性。VEGF蛋白陽性染色主要位于細(xì)胞漿，胞漿棕黃色顆粒沉著為陽性細(xì)胞。陽性細(xì)胞＜30%為表達(dá)陰性，≥30%為表達(dá)陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 VEGF、P53在乳腺癌中的表達(dá)比較VEGF、P53在TNBC及NTNBC中陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 VEGF、P53在乳腺癌中的表達(dá)比較 例(%)

2.2 VEGF、P53的表達(dá)與TNBC臨床病理參數(shù)的關(guān)系VEGF、P53在TNBC中的表達(dá)與年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理類型及病理學(xué)分級(jí)無關(guān)。見表2。

表2 VEGF、P53表達(dá)與TNBC臨床病理參數(shù)的關(guān)系例(%)

2.3 VEGF、P53在TNBC中的表達(dá)P53陽性表達(dá)定位于細(xì)胞核，VEGF陽性表達(dá)定位于細(xì)胞漿。見圖1。

圖1 VEGF和P53在TNBC中的表達(dá)

3 討論

腫瘤血管的形成受到多種細(xì)胞因子的調(diào)控，1989年發(fā)現(xiàn)的VEGF是最重要的促進(jìn)腫瘤血管形成的因子［9］。VEGF是一種高度特異性有絲分裂原，能直接刺激新生血管的形成，被認(rèn)為是最重要和最強(qiáng)的促血管生成因子，在腫瘤血管形成過程中發(fā)揮重要作用，也是重要的促淋巴管生成因子，促進(jìn)腫瘤組織淋巴管的生成［10］。VEGF具有雙重功能:一方面通過其受體直接刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，并誘導(dǎo)產(chǎn)生蛋白水解酶、間質(zhì)膠原酶和組織因子促進(jìn)血管形成;另一方面提高血管通透性，促進(jìn)血漿蛋白、纖維蛋白原外滲導(dǎo)致腫瘤間水腫，引起細(xì)胞外基質(zhì)改變，從而為腫瘤的浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移提供合適的基礎(chǔ)。大量研究表明VEGF在正常組織呈低水平表達(dá)，在多種惡性腫瘤中過度表達(dá)，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過程中起重要作用［11］。本研究顯示乳腺癌總體VEGF的陽性表達(dá)率為45.8%，其中TNBC的陽性表達(dá)率為70.1%，非三陰性乳腺癌的陽性表達(dá)率為32.8%，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與Linderholm等［12］的研究一結(jié)果一致。

P53基因位于17號(hào)染色體短臂上，由11個(gè)外顯子和10個(gè)內(nèi)含子組成，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生2.5kb mRNA，翻譯生成的蛋白質(zhì)由393個(gè)氨基酸殘基組成，相對(duì)分子質(zhì)量為53KD，故名P53。P53基因分為野生型P53基因和突變型P53基因。野生型P53基因是腫瘤抑制基因，它能保護(hù)細(xì)胞DNA免受射線和藥物的襲擊，并通過協(xié)同作用阻止細(xì)胞增殖、刺激DNA修復(fù)和促進(jìn)凋亡細(xì)胞的死亡以起到保護(hù)作用。野生型P53蛋白的半衰期很短，濃度很低，難以測(cè)出。突變型P53蛋白則半衰期延長(zhǎng)，濃度增加，可用免疫組織化學(xué)方法測(cè)出。因此，一般測(cè)出的P53是突變型P53，P53陽性者預(yù)后較差［13］。研究顯示50%～70%的乳腺癌患者有突變型P53蛋白的表達(dá)［14］。本研究結(jié)果顯示，P53在TNBC組中的陽性率為67.2%，在NTNBC組中的陽性率為47.2%，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示TNBC具有更強(qiáng)的增殖活性，分化更差，侵襲性更強(qiáng)。

總之，本研究顯示VEGF、P53在TNBC中過表達(dá)，聯(lián)合檢測(cè)VEGF、P53免疫組化情況對(duì)乳腺癌的惡性程度、腫瘤的增殖能力具有重要意義，可以做為判斷TNBC預(yù)后的重要指標(biāo)。

1 Bauer KR，Brown M，Gress RD，et al.Descriptive analysis of estrogen receptor(ER)-negative，progesterone receptor(PR)-negative，and HER2-negative invasive breast cancer，the so-called triple-negative phenotype:a population-based syudy from the California cancer Registry.Canaer，2007，109:1721-1728.

2 張曉娟，栗紅蕊，崔巖，等.重組人生長(zhǎng)激素對(duì)人乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響及機(jī)制的研究.中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2013，16:2012-2014，2018.

3 Dent R，Trudeau M，Pritchard KI，et al.Triple-negative breast cancer:clinical features and patterns of recurrence.Clin Cancer Res，2007，13:4 429-4 434.

4 Cleator S，Heller W，Coombes RC.Triple-negative breast cancer:therapeutic options.Lancet Oncol，2007，8:235-244.

5 Rakaha EA，El-Sayed ME，Gteen AR，et al.Prognostic markers in Triplenegative breast cancer.Lancet Oncol，2007，109:25-32.

6 Shivakumar S，Prabhakar BT，Jayashree K，et al.Evaluation of serum vascular endothelial growth factor(VEGF)and microvessel density(MVD)as prognostic indicators in carcinoma brest.J Cancer Res Clin Oncol，2009，135:627-636.

7 肖曉光，王晶，劉新元.應(yīng)用PCR-SSCP法檢測(cè)乳腺癌患者血中P53基因突變.大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，28:414-416.

8 乳腺癌Her-2檢測(cè)脂南(2009版)編寫組.乳腺癌Her-2檢測(cè)脂南(2009版).中華病理學(xué)雜志，2009，38:836-840.

9 Hicklin DJ，Ellis LM.Role of the vascular endothelial growth factor pathway in tumor growth and angiogenesis.J Clin Oncol，2005，23:1011-1027.

10 Hirakawa S，Brown LF，Kodama S，et al.VEGF-C-induced lymphangiogenes is in sentinel lymph nodes promotes tumor metastasis to dist ant sites.Blood，2007，109:1010-1017.

11 Sharma G，Mirza S，Parshad R，et al.Clinical significance of Maspin promoter methylation and loss of its protein expression in invasive ductal breast carcinoma:correlation with VEGF-A and MTAL expression.Tumour Biol，2011，32:23-32.

12 Linderholm BK，Hellborg H，Johansson U，et al.Significantly higher levels of vascular endothelial growth factor(VEGF)and shorter survival times for patients with primary operable triple-negative breast cancer.Ann Oncol，2009，20:1639-1646.

13 王玉，王晉芬.ER、PR、Ki-67、P53在乳腺癌中表達(dá)的相關(guān)分析及臨術(shù)意義.山西醫(yī)藥雜志，2008，37:320-321.

14 張雁瑞，黃犁，姜輝，等.P53在三陰性乳腺癌中的表達(dá)及其意義.中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2012，9:24-25.