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        肺炎患兒外周血T淋巴細胞表型分析

        2014-08-25 01:14:21張文杰馮巖王智華張哲馮志山
        河北醫(yī)藥 2014年19期
        關(guān)鍵詞:調(diào)節(jié)性表型外周血

        張文杰 馮巖 王智華 張哲 馮志山

        ·論著·

        肺炎患兒外周血T淋巴細胞表型分析

        張文杰 馮巖 王智華 張哲 馮志山

        目的探討肺炎患兒外周血淋巴細胞膜上CD+3, CD+3CD+4,CD+3CD+8及CD+4CD+25(調(diào)節(jié)性T細胞,regulatory T,Treg)的分布情況,了解患兒的機體免疫功能與肺炎的關(guān)系及調(diào)節(jié)性T細胞在肺炎患兒中的表達情況。方法采用流式細胞術(shù)分析75例肺炎患兒(試驗組)外周血淋巴細胞中CD+3, CD+3CD+4,CD+3CD+8及CD+4CD+25表達情況并與30例健康對照進行比較。結(jié)果試驗組CD+3,CD+3CD+8細胞均低于健康對照組,但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);試驗組CD+3CD+4, CD4/CD8均低于對照組,試驗組與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);試驗組CD+4CD+25表達大于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結(jié)論肺炎患兒CD+3,CD+3CD+4,CD+3CD+8細胞表達均低于對照組,CD4/CD8比值降低,調(diào)節(jié)性T細胞在肺炎患者外周血細胞中的表達均高于正常對照,肺炎患兒存在免疫功能異常。

        肺炎;CD3+;CD3+CD4+;CD3+CD8+; CD4+CD25+;流式細胞術(shù)

        肺炎是小兒所患疾病中的常見病、多發(fā)病,由于兒童期機體各項機制發(fā)育還不完善,尤其是在冬春季節(jié),由于空氣氣溫、濕度變化較大,空氣污染等原因,兒童非常容易發(fā)生肺炎,嚴重影響兒童的身體健康,它是一類感染性疾病,主要病因是由病毒或細菌及支原體感染[1],若治療不及時可能會給患兒帶來終生傷害,而現(xiàn)階段治療小兒肺炎的主要方法為經(jīng)靜脈滴注治療藥物,本文利用流式細胞術(shù)分析了肺炎患者及健康人外周血T淋巴細胞的表型分類,以探討各型T淋巴細胞在炎癥發(fā)生時機體內(nèi)的變化及可能發(fā)揮的作用。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料 收集2012年6月至2013年12月我院收治的肺炎患者75例,均為初診患者,其中男40例,女35例;年齡1~7歲,平均年齡(4.6±3.1)歲;設為試驗組;健康對照(均為兒保體檢者)30例,男17例,女13例;年齡1~6.5歲,平均年齡(3.9±2.2)歲;設為對照組。2組性別比及年齡均匹配,2組資料中的個體均無免疫功能缺陷及過敏性疾病史,近期未使用影響免疫功能的藥物或制劑。

        1.2 方法

        1.2.1 主要儀器設備: 流式細胞儀為美國貝克曼庫爾特公司生產(chǎn)的Epics XL型;移液器為DRAGEN,刻度分別為5~20 μl和21~100 μl,101~1 000 μl三種可調(diào)式加樣器;離心機為白洋離心機廠生產(chǎn)的醫(yī)用低速離心機;混旋器為XK 96-A快速混勻器,由姜堰市新康醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn);冰箱為日本東芝公司生產(chǎn)。用于分析T淋巴細胞表型的試劑分別為CD45FITC-CD4PE-CD8ECD-CD3PC5、CD4 FITC、CD25 PE標記,這些均為鼠抗人抗體,溶血素為OPTILYSE-C,它們均為美國貝克曼庫爾特公司生產(chǎn)。

        1.2.2 試驗方法:均空腹采集健康體檢者與肺炎患者外周血液2ml,EDTA-K2抗凝,首先對每例外周血標本白細胞進行計數(shù),確保符合要求[白細胞計數(shù)范圍(4.0~10)×109個/L],對于不能滿足此條件的標本用0.9%氯化鈉溶液進行稀釋或加大標本與抗體用量,取4支試管分別加入CD45FITC-CD4PE-CD8ECD-CD3PC5四色抗體及同型對照20 μl及CD25PE 20 μl-CD4FITC 20 μl,IGG1FITC-IGG2PE 20 μl(所有試劑均應在4℃冰箱保存,使用前取出,放至室溫后再進行細胞標記),每管加入抗凝全血100 μl,渦旋震蕩器充分混勻,室溫(20~25℃)避光孵育15~20 min,然后每管加入500 μl OPTILYSE-C溶血素,震蕩混勻,室溫避光孵育10 min,每管加入0.9%氯化鈉溶液500 μl,混勻,室溫避光放置10 min,以1 500 r/min離心5 min,吸棄上清液,加入1 ml緩沖液重懸細胞,用于流式細胞儀計數(shù)分析,所有樣本均在采集后2 h內(nèi)標記完畢,24 h內(nèi)上機獲取分析,以同型對照設定獲取條件,所有實驗均在相同條件下進行,至少獲取10 000個細胞。

        2 結(jié)果

        表1 2組,數(shù)據(jù)變化比較

        3 討論

        1 Naheed A,Saha SK,Breiman RF,et al.Multihospital surveillance of pneumonia burden among children aged <5 years hospitalized for pneumonia in Bangladesh.Clin Infect Dis,2009,48:82-89.

        2 Jacalyn I.Risk factors and interventions for ventilator associated pneumonia among ventilated pediatric intensive care unit patients.J Pediatr Nursing,2010,25:17.

        3 Roe MF,Bloxham DM,White DK,et al.Lymphocyte apoptosis in acute respiratory syneytial virus bronchiolitis.Clin Exp Immunol,2004,137:139-145.

        4 Hayakawa M,Taguchi H,Kamiya S,et al.Animal model of mycoplasma pneumoniae infection using germ-free mice.Clin Diagn Lab Immuno,2002,9:669-676.

        5 Itoh M,Takahashi T,Sakaguchi N,et al.Thymus and autoimmuni-ty:production of CD25+CD4+ naturally anergic and suppressive Tcells as a key function of the thymus in maintaining immunologic self-toleranceCD4+CD25+T.J Immunol,1999,162:5317-5326.

        6 Fontenot JD,Rasmussen JP,Gavin MA,et al.A function for interleukin2 in Foxp3-expressing regulatory T cells.Nat Immunol,2005,6:1142-1151.

        7 De la Rosa M,Rutz S,Dominger H, et al.Interleukin-2 is essential for CD4+CD25+ regulatory T cell function .Eur J Immunol,2004,34:2480-2488.

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        11 Yasutomo K.The cellular and molecular mechanism of CD4+/CD8+ lineage commitment J.Med Invest,2002,49:121.

        10.3969/j.issn.1002-7386.2014.19.037

        050051 石家莊市,河北省人民醫(yī)院老年醫(yī)學重點實驗室(張文杰、王智華、張哲);河北聯(lián)合大學(馮巖);河北省兒童醫(yī)院(馮志山)

        馮志山,050031 河北省兒童醫(yī)院;

        E-mail:fzshan@139.com

        R 725.6

        A

        1002-7386(2014)19-2967-03

        2014-06-20)

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