黃朝衛(wèi) 楊 洋 劉新庭

瘦素及瘦素受體在銀屑病皮損中的表達

黃朝衛(wèi) 楊 洋 劉新庭

目的: 檢測銀屑病皮損中瘦素及其受體的表達。方法: 40例銀屑病患者皮損和18名正常人皮膚標(biāo)本，采用SP免疫組化法檢測皮膚石蠟標(biāo)本中瘦素的表達，ELISA法檢測瘦素受體的表達。結(jié)果: 銀屑病患者皮損中瘦素表達明顯高于正常皮膚(P＜0.01)，主要分布在表皮的胞漿和胞核。患者皮損中瘦素受體含量為103.4±18.7 pg/mL高于正常對照組的76.9±13.5 pg/mL(P＜0.05)。結(jié)論:瘦素及其受體可能參與了銀屑病的發(fā)病。

銀屑?。?瘦素； 瘦素受體

瘦素(eptin)是一種脂肪源蛋白激素，具有廣泛的生物學(xué)效應(yīng)，介入了多種疾病的發(fā)生發(fā)展過程，它可誘導(dǎo)人Th1型細胞因子的產(chǎn)生，增強Th1促炎癥免疫應(yīng)答，抑制Th2亞群的細胞活性，通過調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)，參與免疫功能的發(fā)揮。1目前國內(nèi)外多數(shù)文獻研究的是血清瘦素水平與尋常型銀屑病的相關(guān)性。2我們研究了瘦素及其受體在銀屑病患者皮損中的表達，探討它們在銀屑病發(fā)病中的作用及其意義，為銀屑病的治療提供新思路。

1 材料與方法

1.1 對象 我院2011年10月至2012年7月間臨床資料完整的門診或住院患者40例，均符合《臨床皮膚病學(xué)》進行期尋常型銀屑病診斷標(biāo)準(zhǔn)。入選標(biāo)準(zhǔn):具有典型的皮損并經(jīng)病理確診，除銀屑病外，受試者身體健康，至少4周內(nèi)未使用糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑、維A酸類藥物及其他系統(tǒng)治療藥物，4周內(nèi)無外用治療銀屑病的藥物，不伴有其他類型皮膚病，無自身免疫性疾病、糖尿病、慢性腎衰、腫瘤或其他嚴(yán)重疾患。排除體質(zhì)肥胖和過度消瘦者。其中男23例、女17例；年齡14～75歲，平均33.18±16.68歲；體重45.5～68.2 kg，平均58.4±10.3 kg；病程3月～21年，平均3.18±4.73年。18名正常對照，取自外科手術(shù)者，無皮膚疾病、無腫瘤、無肥胖或過度消瘦者的皮膚，男10名、女8名；年齡10～65歲，平均29.6±8.7歲；體重35.6～71.4 kg，平均55.6±15.1 kg。對符合上述入選標(biāo)準(zhǔn)者詳細記錄病史資料，PASI評分為1.50～25.5。

1.2 實驗方法

1.2.1 材料 瘦素抗體(晶美生物工程有限公司)；免疫組化SP試劑盒，DAB試劑盒(北京中山生物技術(shù)有限公司)。

1.2.2 方法 取軀干或四肢典型皮損10%甲醛固定24 h常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片5μm厚。同時取綠豆大皮損勻漿器研磨成勻漿，置與液氮罐內(nèi)保存?zhèn)溆?。常?guī)脫水，石蠟包埋、切片，脫蠟至水；3%H2O2孵育10 min，阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性；枸櫞酸緩沖液中92℃熱抗原修復(fù)15 min，室溫自然冷卻30 min；抗原修復(fù)液修復(fù)抗原，滴加山羊血清封閉液10 min，滴加瘦素抗體4℃冰箱過夜；滴加生物素標(biāo)記二抗，37℃孵育30 min；滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉親和素，37℃孵育30 min；DAB顯色20 min左右，蘇木素復(fù)染、脫水、透明、封片，鏡檢。陰性對照用枸櫞酸緩沖液替代一抗和二抗。

銀屑病皮損勻漿瘦素受體含量的測定采用雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗法，嚴(yán)格依照試劑盒說明書進行。

1.2.3 結(jié)果判定 組織切片在光鏡下觀察細胞中有黃色、棕黃色或褐色顆粒沉著為陽性細胞。按染色強度及陽性細胞數(shù)來計算評分:染色強度將無、弱、中、強分別計0～3分；根據(jù)陽性細胞數(shù)量在觀察的同類細胞所占比例，分為4類:0分為陽性細胞≤2%，1分為陽性細胞3%～20%，2分為陽性細胞數(shù)21%～60%，3分為陽性細胞數(shù)＞60%。綜合評價值由兩類計分分值的乘積表示，0～3分為(－)，4分為(＋)，6分為(＋＋)，9分為(＋＋＋)。

1.2.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 11.0軟件進行分析。瘦素在銀屑病患者與正常皮膚之間的表達差異采用Fisher精確概率法計算，瘦素受體值與正常對照組間的表達采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)果見表1，圖1，2，3。

表1 瘦素在銀屑病組及對照組的表達

銀屑病皮損中瘦素受體含量103.4±18.7 pg/mL，正常皮膚76.9±13.5 pg/mL，主要分布在表皮的胞漿和胞核。兩組比較t＝6.38，P＜0.01。

2 結(jié)果

圖1 正常皮膚中瘦素的表達(SP，×400)圖2 銀屑病皮損中瘦素的表達(SP，×100)圖3 銀屑病皮損中瘦素的表達(SP，×400)

3 討論

瘦素是肥胖基因編碼的一種蛋白激素，Zhang等3于1994年首先從人和小鼠的脂肪組織中分離并克隆出來。現(xiàn)在對瘦素作用的認(rèn)識早已超越肥胖與消瘦的范疇，它與能量平衡、發(fā)育和生殖以及免疫功能、糖尿病、白血病、慢性腎衰竭都有密切關(guān)系。瘦素除了由脂肪組織表達外，在許多脂肪外組織如胃黏膜、骨骼肌、胎盤、乳腺上皮、子宮內(nèi)膜均可發(fā)現(xiàn)瘦素的存在。用分子生物學(xué)方法檢測，發(fā)現(xiàn)在骨、間葉細胞、肝、腦、心、胎盤、腎、肌肉、睪丸、卵巢、腸、腎上腺中均有瘦素受體表達。4

在本研究中，我們對瘦素在正常人皮膚和銀屑病皮損的表達進行了初步研究，實驗結(jié)果顯示，瘦素在銀屑病皮損有不同程度的表達。正常人皮膚中瘦素少量表達，銀屑病皮損中瘦素表達強于正常皮膚(P＜0.01)，主要表達于顆粒層、棘層角質(zhì)形成細胞胞質(zhì)和胞核中，在角質(zhì)層角化不全的細胞中表達非常微弱。銀屑病皮損中瘦素受體含量與正常皮膚有明顯差異(P＜0.05)。說明瘦素受體在皮膚中也是存在的，在銀屑病皮損中的含量較正常皮膚高。

銀屑病發(fā)病機制仍然不十分清楚，但90年代初確立的T細胞在銀屑病發(fā)病中的核心作用已得到公認(rèn)。5Th1/Th17共同介導(dǎo)的免疫紊亂在銀屑病的發(fā)病中起重要作用。6拮抗Th1/Th17細胞因子的生物制劑對銀屑病具有肯定的臨床療效，支持上述理論。7Th2細胞具有拮抗Th1細胞的作用，Th2細胞分泌的細胞因子IL－4和IL－6具有抑制Th1細胞分化的作用，同樣Th1細胞分泌的細胞因子IL－2和IFN－γ具有抑制Th2細胞分化的作用，因此Th1/Th2細胞失衡被認(rèn)為是導(dǎo)致銀屑病發(fā)病的重要基礎(chǔ)。

瘦素及受體影響銀屑病的機制尚不清楚，研究顯示瘦素在調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答方面扮演重要的角色，瘦素調(diào)節(jié)T細胞、B細胞、單核－巨噬細胞的功能，對NK細胞的功能和活性也同樣重要。8瘦素是類似于IL－2功能的細胞因子，可促進天然T細胞和記憶T的增殖，促進Th1型細胞的細胞活性及產(chǎn)生的細胞因子、抑制Th2亞群的細胞活性及產(chǎn)生的細胞因子、誘導(dǎo)CD4＋T細胞高表達細胞間黏附分子和緩慢抗原，通過調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)，參與免疫功能的發(fā)揮，9導(dǎo)致Th1/Th2細胞失衡，這可能是瘦素影響銀屑病發(fā)病的機制。減少TNF－α和瘦素，有利于銀屑病的改善，10從側(cè)面反映了瘦素與銀屑病的關(guān)系。瘦素及受體是否還有其他機制影響銀屑病發(fā)生發(fā)展還需作進一步研究。

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5王剛.銀屑病研究熱點.中華皮膚科雜志，2013，46(3):153－156.

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8 Tian Z，Sun R，Wei H，et al.Impaired natural killer(NK)cell activityin leptin receptor deficientmice:leptin as a critical regulator inNK cell development and ctivation.Biochem Biophys Res Commun，2002，298(3):297－302.

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(收稿:2013－05－21 修回:2013－09－11)

The expression of lep tin and its receptor in the lesions of psoriasis

HUANG Chao-wei，YANG Yang，LIU Xin-ting.Department ofDermatology，the Central Hospital of Huang Shi City(Puai District)，435001

Objective:To detect the expression of leptin and its receptor in psoriastic lesions.Methods: The expression of leptin and its receptor in paraffin－embedded tissues from 40 patientswith progressive psoriasis and 18 healthy controlswere detected using streptavidin－peroxidase immunohistochemistrymethods and enzyme－linked immunosorbentassay(ELISA).Results:Theexpressions of leptin was significantly higher in patientswith psoriasis than that in controls(P＜0.01).Leptin receptor levelwas significantly higher in patients with psoriasis than that in controls(P＜0.05).Conclusion:Leptin and its receptormay be involved in the pathogenesis of psoriasis.

psoriasis；leptin；leptin receptor

黃石市中心醫(yī)院普愛院區(qū)，435001