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        熒光PCR技術(shù)與直接涂片法對(duì)淋球菌檢測(cè)的臨床應(yīng)用分析

        2014-03-28 02:11:02李新善胡燕玲羅明
        關(guān)鍵詞:淋病涂片標(biāo)本

        李新善,胡燕玲,羅明

        (1、江西省臨床檢驗(yàn)中心,江西 南昌 330006;2、南昌市男科醫(yī)院,江西 南昌 330008)

        性傳播疾病是當(dāng)今社會(huì)上廣泛流行的傳染病,其中以淋病居多,其病原菌為淋病奈瑟菌(簡稱淋球菌),也是我國最常見的性傳播疾病之一。淋病的診斷主要是病史、臨床癥狀及實(shí)驗(yàn)室檢查,在此環(huán)節(jié)中,實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)對(duì)疾病的診斷、治療和有效控制等具有十分重要的作用。目前,實(shí)驗(yàn)室檢查主要有直接涂片革蘭染色、聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)、分離培養(yǎng)和細(xì)菌學(xué)鑒定等。上述幾種方法各有優(yōu)缺點(diǎn),本資料采用直接涂片革蘭染色、熒光PCR二種方法,對(duì)2012年臨床疑似淋病的116例患者進(jìn)行比較分析,重點(diǎn)對(duì)不同臨床癥狀及男、女標(biāo)本分別采用直接涂片染色和熒光PCR法做檢測(cè)對(duì)比,現(xiàn)將結(jié)果總結(jié)如下。

        1 材料與方法

        1.1 標(biāo)本來源 68例男性和48例女性病人均來自南昌市男科醫(yī)院的門診和住院病例,男性年齡19~70歲,平均年齡39.5歲,女性年齡18~45歲,平均年齡26.8歲。所有病例基本具有以下特征:(1)婚外性交史或其配偶有婚外性交史;(2)不同程度的生殖道癥狀;(3)符合上述二點(diǎn),有尿道口紅腫、明顯分泌物增多、膿性白帶的判為重癥,僅有尿頻尿急、尿道灼熱刺痛、紅腫程度小、分泌物少的判為輕度。絕大多數(shù)病例近期內(nèi)未使用任何抗生素。

        1.2 標(biāo)本采集 取材由臨床醫(yī)生按常規(guī)方法操作[1],男性取尿道分泌物、前列腺液,女性取陰道分泌物、宮頸粘液。立即裝入無菌試管送實(shí)驗(yàn)室,分別進(jìn)行直接涂片和PCR檢測(cè)。

        1.3 直接涂片法 將標(biāo)本拭子在消毒好的玻片上輕輕滾動(dòng),待干燥固定后行革蘭染色、鏡檢。以鏡檢中性粒細(xì)胞內(nèi)有革蘭陰性雙球菌為陽性。

        1.4 熒光PCR法 試劑盒由上??迫A生物技術(shù)有限公司提供。擴(kuò)增儀為上海宏石SLAN全自動(dòng)擴(kuò)增儀。PCR檢測(cè)方法嚴(yán)格按試劑盒操作說明書和實(shí)驗(yàn)室SOP要求進(jìn)行。淋球菌標(biāo)準(zhǔn)株來源于江西省疾病控制中心,為熒光PCR陽性對(duì)照用。

        1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0軟件,數(shù)據(jù)分析采用χ2檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        用二種不同方法對(duì)116例臨床疑似病例進(jìn)行檢測(cè),按不同癥狀和男、女分組作對(duì)比分析,結(jié)果見表1和表2。

        表1 不同癥狀二種檢測(cè)方法的結(jié)果

        表2 不同性別二種檢測(cè)方法的結(jié)果

        3 討論

        本資料表1和表2結(jié)果顯示,熒光PCR法對(duì)癥狀輕微患者、女性標(biāo)本的檢出率高于直接法(P<0.01)。對(duì)于癥狀較重患者、男性標(biāo)本,二種方法則差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。直接涂片法對(duì)于癥狀較重患者、男性標(biāo)本具有較高的陽性檢出率,明顯高于女性標(biāo)本(P<0.01)。

        從方法學(xué)角度,淋病的實(shí)驗(yàn)室診斷由于實(shí)驗(yàn)方法的選擇不同,造成了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的靈敏度,準(zhǔn)確度有所不同[2]。直接涂片法:能快速檢出結(jié)果,結(jié)果直觀可靠,可使患者節(jié)省費(fèi)用、縮短候診時(shí)間、盡早得到治療,但是其陽性檢出率較低,尤其是輕微的女性病例標(biāo)本受多種主觀和客觀因素的影響,結(jié)果判讀非常困難,常會(huì)出現(xiàn)假性結(jié)果,對(duì)檢測(cè)者的技術(shù)和經(jīng)驗(yàn)要求很高[3]。熒光PCR法:具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確和快速[4]的特點(diǎn),但是此方法容易出現(xiàn)假陽性結(jié)果,對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境要求高,操作過程中一定要特別仔細(xì)認(rèn)真,嚴(yán)格按照PCR標(biāo)準(zhǔn)操作程序操作,應(yīng)建立有效的防污措施,杜絕殘留污染和樣品間擴(kuò)增序列交叉污染,實(shí)驗(yàn)全過程必須設(shè)立陰陽性對(duì)照,嚴(yán)防假陽性、假陰性。細(xì)菌培養(yǎng)法:淋球菌分離培養(yǎng)和藥敏鑒定是WHO和我國推薦的金標(biāo)準(zhǔn)之一,由于分離培養(yǎng)和細(xì)菌學(xué)鑒定對(duì)標(biāo)本要求相對(duì)高,培養(yǎng)條件苛刻,操做繁瑣,報(bào)告時(shí)間長難以被患者接受等缺點(diǎn)[5],該方法的臨床推廣應(yīng)用受到制約。

        綜上所述,目前,淋病的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法各自有優(yōu)缺點(diǎn),單一某種檢測(cè)方法無法得到滿意的結(jié)果。從116例臨床疑似病例采用直接涂片染色法和熒光PCR[6]法所做的結(jié)果表明,同一種方法對(duì)不同癥狀、不同性別的陽性率不同,經(jīng)比較分析得出直接涂片法具有簡便、快捷、直觀的優(yōu)點(diǎn),但對(duì)女性檢出率較低。熒光PCR法敏感高、特異特異強(qiáng),能提高檢出率,對(duì)女性疑似病例具有較好的補(bǔ)充效果。本文認(rèn)為,實(shí)驗(yàn)室對(duì)疑似病例先后采用直接涂片染色法和熒光PCR法檢測(cè),基本能滿足臨床需要。

        [1]張學(xué)軍.皮膚性病學(xué)[M].第6版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2005:215.

        [2]葉應(yīng)嫵,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M].第3版.南京:東南大學(xué)出版社,2006:778-780.

        [3]葉章順.性傳播疾病的實(shí)驗(yàn)室診斷[M].北京:科學(xué)出版社,2001:41-44.

        [4]熊國亮.臨床聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)測(cè)定的質(zhì)量控制[J].江西醫(yī)學(xué)檢驗(yàn),2002,20(4):241-244.

        [5]徐新蓉,馬萍,龔國富.不同癥狀淋球菌感染患者實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法選擇與比較[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2012,33(21):2637-2638.

        [6]江梅,萬臘根,簡正偉.檢測(cè)PML RARα基因的雙重?zé)晒舛縋CR方法的建立[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2012,30(5):433-436.

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