楊 邱，李 亞

(深圳市人民醫(yī)院內(nèi)科,廣東 深圳 518000)

隨著老齡化社會(huì)的到來以及人們生活、飲食習(xí)慣的改變，糖尿病發(fā)生率越來越高。糖尿病本身并不導(dǎo)致患者死亡，但是如果血糖控制不理想，引起微小血管病變，則對(duì)患者的健康和生命造成嚴(yán)重威脅。其中糖尿病腎病就是十分常見且嚴(yán)重的并發(fā)癥之一[1]。本研究通過對(duì)糖尿病腎病患者足細(xì)胞標(biāo)記蛋白(podocalyxin,PCX)及其他指標(biāo)表達(dá)情況進(jìn)行分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選取2012年1月至2012年10月期間深圳市人民醫(yī)院腎內(nèi)科行腎活檢的糖尿病腎病患者100例，其中男53例、女47例，年齡22～68(49.2±5.6)歲。所有患者均符合《1999年WHO對(duì)糖尿病腎病的診斷標(biāo)準(zhǔn)》[2]，且排除其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾病，排除原發(fā)腎病，感染性疾病。所有患者近期均無酮癥酸中毒發(fā)生。測(cè)定所有患者的24 h尿白蛋白排泄率(urinary albumin excretion rates，UAER)和血清肌酐(serum creatinine，SCr)水平并據(jù)此將患者分為4組。A組28例，男16例、女12例，年齡22～67(49.2±5.3)歲；UAER<30 g/24 h，SCr≤135 μmol/L。B組30例，男15例、女15例，年齡23～68(49.2±5.2)歲；UAER(30～299) mg/24 h，SCr≤135 μmol/L。C組22例，男12例、，女10例，年齡22～68(49.2±5.7)歲；UAER≥300 mg/24 h，SCr≤135 μmol/L。D組20例，男10例、女10例，年齡23～68(49.1±5.3)歲；UAER≥300 mg/24 h，SCr>135 μmol/L。另外，選取同期健康體檢者20例作為對(duì)照組，男10例、女10例，年齡22～68(49.2±5.2)歲。5組人群在性別、年齡等方面均差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本采集 搜集5組人群清晨第一次排尿的中段尿液10 mL，以5 cm離心半徑，轉(zhuǎn)速2000 r/min離心10 min(離心機(jī)選擇北京時(shí)代北利離心機(jī)有限公司生產(chǎn)的GT10-1)，拋棄上清，留取200 μL尿沉渣，保存于-20 ℃環(huán)境，以備測(cè)定尿液PCX。在同一日留取24 h尿液，進(jìn)行UAER和尿蛋白定量測(cè)定。取清晨空腹肘靜脈血2 mL，待測(cè)定糖化血紅蛋白(hemoglobin A1c，HbA1c)水平和血清可溶性E-鈣黏素水平。

1.2.2PCX檢測(cè) 采用PCX單抗包被在酶標(biāo)板上，標(biāo)準(zhǔn)品與樣品中的PCX與單抗結(jié)合，在加入酶標(biāo)抗體后可以在板上形成免疫復(fù)合物，隨后加入酶底物四甲基聯(lián)苯胺，出現(xiàn)藍(lán)色后再加入終止液，顏色轉(zhuǎn)為黃色。使用上海精科儀器公司生產(chǎn)UV765紫外可見分光光度計(jì)吸光度進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算得到蛋白濃度。

1.2.3其他指標(biāo) 采用免疫分析法測(cè)定所有受試者HbA1c水平；采用酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定法測(cè)定所有受試者血清可溶性上皮鈣黏素水平。

2 結(jié) 果

2.1糖尿病腎病患者與對(duì)照組病程、HbA1c水平的比較 B組患者病程顯著長于A組，C、D兩組患者病程顯著長于A、B兩組(P<0.05)，C、D兩組病程之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；A、B、C、D組患者HbA1c水平均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，但此四組患者之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表1-1、表1-2)。

表1-1 糖尿病腎病患者與對(duì)照組病程、HbA1c水平的比較

表1-2 糖尿病腎病患者與對(duì)照組病程、HbA1c水平多重比較結(jié)果

2.2糖尿病腎病患者與對(duì)照組SCr、UAER、尿蛋白水平的比較 B、C、D三組SCr均顯著高于A組及對(duì)照組，且D組顯著高于B、C兩組(P<0.05)，而A組與對(duì)照組之間以及B、C兩組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；糖尿病腎病患者UAER水平顯著高于對(duì)照組，且B、C、D組顯著高于A組，C、D組顯著高于B組(P<0.05)，而C、D兩組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；尿蛋白定量分析，B、C、D組顯著高于A組和對(duì)照組，且C、D組顯著顯著高于B組(P<0.05)，而A組和對(duì)照組之間以及C、D組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表2-1、表2-2)。

2.3糖尿病腎病患者與對(duì)照組PCX、上皮鈣黏素水平的比較 糖尿病腎病患者PCX、上皮鈣黏素水平均顯著高于對(duì)照組，且B、C、D組顯著高于A組，C、D組顯著高于B組(P<0.05)，C、D兩組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表3-1、表3-2)。

表2-1 糖尿病腎病患者與對(duì)照組SCr、UAER、尿蛋白水平的比較

表2-2 糖尿病腎病患者與對(duì)照組SCr、UAER、尿蛋白水平多重比較結(jié)果

表3-1 糖尿病腎病患者與對(duì)照組PCX、上皮鈣黏素水平的比較

表3-2 糖尿病腎病患者與對(duì)照組PCX、上皮鈣黏素水平多重比較結(jié)果

3 討 論

糖尿病腎病是臨床常見的糖尿病并發(fā)癥。在病變?cè)缙?，主要表現(xiàn)為腎小球內(nèi)壓力升高，灌注壓和濾過率提高，逐漸出現(xiàn)腎小球毛細(xì)血管基膜增厚以及系膜基質(zhì)增多，直至最終發(fā)展成為腎小球硬化[3]。在臨床上對(duì)糖尿病腎病患者進(jìn)行干預(yù)的關(guān)鍵在于早期發(fā)現(xiàn)，早期治療。但是臨床中，傳統(tǒng)用來評(píng)價(jià)腎臟損害的指標(biāo)往往受到生理狀態(tài)、病理狀態(tài)以及藥物等因素的干預(yù)而缺乏準(zhǔn)確性。

足細(xì)胞是高度分化的，緊貼于腎小球基膜外的一層疏松細(xì)胞，也是腎小球基膜濾過屏障的重要構(gòu)成組織，同時(shí)也是腎小球各種損傷的靶器官[4]。隨著研究的深入以及人們關(guān)注度的增加，足細(xì)胞損傷在糖尿病腎病病程中的作用越來越受到關(guān)注。因此，有學(xué)者提出通過PCX對(duì)糖尿病腎病患者腎小球損害情況進(jìn)行判斷[5]。作為最早發(fā)現(xiàn)的足細(xì)胞分化成熟的標(biāo)志性蛋白，PCX由腎小球內(nèi)皮細(xì)胞以及足細(xì)胞合成，并在足細(xì)胞分化成熟的過程中始終固定于足細(xì)胞頂膜，對(duì)足細(xì)胞骨架的形成和維持均具有重要的作用[6]。而且PCX帶有少量負(fù)電荷，可以作為腎小球基膜的電荷屏障，通過電荷之間的排斥作用，維持足突間的結(jié)構(gòu)。當(dāng)腎臟受損早期，足細(xì)胞頂膜區(qū)的PCX可脫落進(jìn)入尿液中，從而使尿液中PCX水平增加，即PCX升高可早于足細(xì)胞從基膜脫落；隨著腎臟損傷的進(jìn)一步增加，脫落的足細(xì)胞碎片中的PCX也會(huì)進(jìn)入尿液，尿液中PCX水平會(huì)進(jìn)一步升高。因此，通過尿液PCX檢測(cè)，可以在早期發(fā)現(xiàn)糖尿病腎病，并對(duì)其嚴(yán)重程度有所判斷[7]。

血管內(nèi)皮是機(jī)體最大也是最重要的內(nèi)分泌器官，鈣黏素可以在細(xì)胞間正常連接中發(fā)揮重要的維護(hù)作用。上皮鈣黏素對(duì)于維持內(nèi)皮細(xì)胞的特異性、完整性以及極性都有重要的意義，僅在血管內(nèi)皮細(xì)胞表面表達(dá)，同時(shí)也是導(dǎo)致內(nèi)皮損傷和血管通透性增高的各因素作用的靶位。因此當(dāng)上皮鈣黏素水平增高時(shí)，往往可以間接判斷微血管內(nèi)皮細(xì)胞的受損情況[8]。

在本研究中A、B、C、D 4組腎功能損害程度逐漸加重，其PCX、上皮鈣黏素水平與健康體檢者相比均顯著升高，且B、C、D組顯著高于A組，C、D組顯著高于B組，說明在UAER和SCr出現(xiàn)異常之前，患者的PCX、上皮鈣黏素水平已經(jīng)發(fā)生了改變，且隨著腎臟損害程度的加重，這種改變?cè)桨l(fā)顯著。

因此，可以認(rèn)為PCX、上皮鈣黏素表達(dá)水平可以在糖尿病腎病早期反映腎臟損害程度，其敏感性優(yōu)于UAER和SCr。

[1] 錢曉玲,閆彩鳳,張蕊,等.初診2型糖尿病患者尿PCX和Nephrin及單核細(xì)胞趨化蛋白-1聯(lián)合檢測(cè)對(duì)早期糖尿病腎病的預(yù)測(cè)價(jià)值[J].臨床醫(yī)藥實(shí)踐,2012,21(12):933-938.

[2] Hanley AJ,Karter AJ,Williams K,etal.Prediction of type 2 diabetes mellitus with alternative definitions of the metabolic syndrome:the Insulin Resistance Atherosclerosis Study[J].Circulation,2005,112(24):3713-3721.

[3] Lin MH,Chen HY,Liao TH,etal.Determination of time-dependent accumulation of d-lactate in the streptozotocin-induced diabetic rat kidney by column-switching HPLC with fluorescence detection[J].J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci,2011,879(29):3214-3219.

[4] 董婷,袁偉杰.腎素-血管緊張素系統(tǒng)活性亢進(jìn)參與糖尿病腎病足細(xì)胞的損傷[J].中華腎臟病雜志,2012,28(4):341-345.

[5] 羅長青,張春.糖尿病腎病足細(xì)胞損傷機(jī)制研究進(jìn)展[J].臨床腎臟病雜志,2012,12(5):199-201.

[6] 龍香菊.糖尿病腎病足細(xì)胞損傷機(jī)制研究進(jìn)展[J].內(nèi)科,2009,4(4):629-632.

[7] 劉志紅,李世軍,陳朝紅,等.糖尿病腎病患者足細(xì)胞病變的臨床病理特征[J].腎臟病與透析腎移植雜志,2003,12(2):144-148.

[8] 陳立平,周巧玲,彭衛(wèi)生,等.足細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)及其相關(guān)分子表達(dá)變化在糖尿病腎病發(fā)病中的作用[J].中南大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版,2007,32(4):620-625.