史永儉 劉園園 劉 瑛 張春敏

NB－UVB照射對白癜風皮損區(qū)IL－6、IL－18、TNF－α以及slCAM－1水平的影響

史永儉 劉園園 劉 瑛 張春敏

目的: 確定NB－UVB照射對白癜風局部皮損組織液細胞因子IL－6、IL－18、TNF－α以及sl-CAM－1水平的影響。方法: NB－UVB照射白癜風皮損區(qū)30次,采用ELISA法檢測白癜風患者NBUVB照射前后局部皮損組織液中IL－6、IL－18、TNF－α以及slCAM－1水平。結果: 皮損區(qū)組織液中IL－6為0.316±0.237 ng/mL,低于健康人群,IL－18為0.925±0.419 ng/mL、TNF－α為1.012±0.473 ng/ mL、slCAM－1為1.162±0.386 ng/mL,均高于健康人群。經NB－UVB照射后,復色區(qū)各細胞因子水平基本恢復正常。結論: NB－UVB可能通過對細胞因子的調節(jié)起到治療白癜風的作用。

白癜風； 細胞因子； 窄譜中波紫外線

越來越多的研究表明白癜風患者皮損處存在局部免疫狀態(tài)的改變,病灶局部微環(huán)境中細胞免疫狀態(tài)與其發(fā)生發(fā)展密切相關,1皮損部位活化的各種T細胞浸潤、抗MC抗體以及CD8＋的CTL介導的細胞免疫反應等均能影響白癜風的發(fā)生。2,3另外機體的免疫效應大部分通過細胞因子介導,是近年來研究的熱點之一。B－淋巴細胞激活因子4、IL－175、IFN－γ6、TNF－α6、slCAM－17等多個細胞因子可能參與了白癜風的發(fā)病。目前,國內外對白癜風患者血清相關細胞因子水平變化的研究較多,發(fā)現(xiàn)多種細胞因子參與了白癜風的發(fā)生過程,但對局部皮損處的研究較少。我們試圖通過研究皮損處幾種相關細胞因子水平的變化從一個側面證實白癜風患者存在局部免疫狀態(tài)異常,希望對揭示白癜風的發(fā)病機制有所幫助。國內研究8發(fā)現(xiàn)窄譜中波紫外線照射能降低白癜風患者局部皮損處IL－4、IFN－γ的水平,但其研究的細胞因子較少,照射時間較短,不能全面反映窄譜中波紫外線對局部皮損處細胞因子網絡的影響。我們的研究期望能進一步了解窄譜中波紫外線照射能否通過調節(jié)多種細胞因子水平,恢復白癜風患者局部免疫狀態(tài)平衡,從而進一步為窄譜中波紫外線治療白癜風提供免疫學依據。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 所有患者均為2011年9月至2013年6月在我科就診的進展期白癜風患者。其中男15例,女9例；年齡19～45歲,平均26.50±9.36歲；病程2個月～5年,平均2.25±1.68年。其中尋常型18例,局限型11例,泛發(fā)型7例,節(jié)段型6例。所有患者未進行紫外線治療,皮損處1個月內未使用外用藥物,3個月內未應用系統(tǒng)藥物治療。皮膚無炎癥,無系統(tǒng)疾病及光敏性皮膚病。另選15名正常人為健康對照組,男9名,女6名,年齡20～42歲,平均28.42±8.78歲。所有患者均知情同意,治療方案經本院倫理委員會討論通過。

1.2 主要儀器與試劑 UV100L系統(tǒng)光療儀(德國Waldmann公司),SUV－1000日光紫外線模擬器(上海Sigma公司),BY－II型白癜風表皮分離儀(山東神思醫(yī)療設備有限公司),酶標儀(奧地利產anthos 2010型),高速離心機(美國索福公司),IL－6、IL－18、TNF－α、slCAM－1試劑盒(美國派普泰克公司)。

1.3 方法

1.3.1 對白癜風患者白斑區(qū)與健康人正常皮膚用BY－II型白癜風治療儀進行負壓吸皰,負壓45 kPa,溫度43℃。抽取皰液1～2 mL(含血性皰液及纖維組織棄去不用),離心20 min左右(2000～3000 r/min),收集上清。應用ELISA法檢測IL－6、IL－18、TNF－α以及slCAM－1水平。

1.3.2 對白癜風患者進行NB－UVB照射前測定最小紅斑量(MED),初始劑量為最小紅斑量的50%,即0.3～0.5 J/cm2,每周照射3次。如照射皮膚無紅斑反應,以后每次增加劑量0.1～0.2 J/cm2,共照射30次。若出現(xiàn)疼痛性紅斑則暫停照射,在紅斑消退后恢復照射,劑量減少50%。照射中遮蓋保護患者的眼部及外生殖器部位,除部分患者因不良反應外用潤膚乳膏外,未使用其他藥物。

1.3.3 治療3個月后進行療效評價 皮損區(qū)完全復色或單皮片復色面積大于80%為成功區(qū)；皮損區(qū)面積無變化,進一步擴大或單皮片復色面積小于20%視為失敗區(qū)。在治療組16例配合檢測的患者成功與失敗的區(qū)域分別再次進行1～2個單位的負壓吸皰,抽取皰液,檢測前述細胞因子水平。

1.3.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 13.0軟件系統(tǒng)分析白癜風患者白斑區(qū)IL－6、IL－18、TNF－α以及slCAM－1水平；光療前后成功與失敗區(qū)IL－6、IL－18、TNF－α、slCAM－1水平差異。實驗數據用ˉx±s表示,兩組間比較用t檢驗。

2 結果

2.1 白癜風患者局部白斑區(qū)IL－6水平與健康人比較明顯降低(P＜0.05),TNF－α水平偏高(P＜0.05),IL－18、slCAM－1水平則明顯升高(P＜0.01)。見表1。2.2 經NB－UVB照射后,復色部位IL－6水平升高, IL－18、TNF－α以及slCAM－1水平降低,與健康人比較無顯著性差異(P＞0.05)。復色失敗區(qū)治療后各細胞因子水平與對照組比較有顯著差異。見表2。

表1 白癜風患者局部白斑區(qū)與健康對照組相關細胞因子水平比較

表2 NB－UVB照射后,復色與未復色皮損各細胞因子水平變化

3 討論

白癜風是一種由于黑素細胞受損致色素脫失的獲得性皮膚病,其病因及發(fā)病機制迄今尚未完全闡明。角質形成細胞對黑素細胞的各種功能有重要的調控作用,其主要通過分泌各種細胞因子來維持黑素細胞的功能。IL－6是皮膚角質形成細胞分泌的重要細胞因子,角質形成細胞的損傷及功能減弱可引發(fā)白癜風。我們研究發(fā)現(xiàn)白癜風皮損區(qū)組織液中IL－6明顯降低,提示其可能有角質形成細胞功能受損,與Moretti等9研究結果不符。Moretti等研究了15例處于活動期的白種人,穿孔活檢取皮損和病灶周圍的皮膚,采用免疫組化的方法研究發(fā)現(xiàn)IL－6在白癜風皮損區(qū)高表達。我們的研究與國內學者10研究結果吻合,均采用了ELISA法檢測局部皰液中的細胞因子。兩者結果不同是否與取材深度、檢測方法及人種差異有關需進一步證實。TNF－α主要由活化的單核－巨噬細胞產生,具有多種生物效應,可激活誘導型一氧化氮合酶,產生大量一氧化氮對黑素細胞產生細胞毒性作用,從而抑制黑素細胞增殖和色素生成。slCAM－1是中性粒細胞與黑素細胞黏附的必需因子,其可促進淋巴細胞與黑素細胞黏附,在淋巴細胞攻擊破壞黑素細胞中發(fā)揮重要的連接作用,進而導致黑素細胞破壞。IL－18主要由單核巨噬細胞產生,同時也可由表皮角質形成細胞合成表達。已有大量資料證明IL－18能誘導Th1細胞、自然殺傷細胞分泌IFN－γ、粒－巨嗜細胞集落刺激因子,IL－2等多種細胞因子。11,12誘導IFN－γ是IL－18的主要功能之一,IFN－γ可加強slCAM－1的表達促進白細胞與黑素細胞的黏附,引起黑素細胞的破壞。同時IFN－γ還是誘導型一氧化氮合酶的誘導因子,可以產生大量一氧化氮引起黑素細胞自身破壞。因此IL－18可能通過刺激Th1細胞和NK細胞產生相關細胞因子而參與了白癜風的發(fā)病過程。我們研究發(fā)現(xiàn)以上三種細胞因子在白癜風局部皮損中均顯著升高,其中TNF－α、slCAM－1檢測結果與Grimes等6、宋秀祖等7的研究結果相符合,提示白癜風局部皮損處存在明顯免疫異常,表皮微環(huán)境細胞因子的變化、局部細胞因子表達不平衡可能與白癜風的發(fā)病有關。

NB－UVB照射能促進角質形成細胞分泌相關細胞因子,同時誘導T細胞凋亡13及抑制前炎癥因子的釋放,影響細胞因子調節(jié)網絡,進而通過細胞因子相互作用維持或增加表皮黑素細胞的數量功能,促進黑素生成。本研究表明,經NB－UVB照射后白癜風皮損復色區(qū)組織液中IL－6含量增高,IL－18、TNF－α、sl-CAM－1均降低,而復色失敗區(qū)各細胞因子變化不顯著。可部分解釋NB－UVB治療白癜風的作用機制。但NB－UVB治療白癜風的作用機制較為復雜,我們的研究還不能全面反映NB－UVB照射對白癜風局部免疫狀態(tài)的影響。

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(收稿:2014－04－28 修回:2014－08－04)

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Effects of NB－UVB on the levels of IL－6、IL－18、TNF－α and slCAM－1 in the lesions of vitiligo

SHI Yong-jian,LIU Yuan-yuan,LIU Ying,et al.The Second Hospital of Shandong University,Jinan,250033

Objective:To determine the effects of NB－UVB on the levels of IL－6,IL－18,TNF－α and sl-CAM－1 in the lesions of vitiligo.Methods:The lesional levels of IL－6,IL－18,TNF－α and slCAM－1 were detected by ELISA before and after irradiation by NB－UVB for 30 times.Results:Before the irradiation of NB－UVB,the level of IL－6 was 0.316±0.237 ng/mL,which was lower than that in healthy people；the levels of IL－18,TNF－α,slCAM－1 were 0.925±0.419 ng/mL,1.012±0.473 ng/mL and 1.162±0.386 ng/mL,which were higher than those of the healthy people.After the irradiation of NB－UVB,all the cytokine levels in the improved lesions were basically restored to normal.Conclusion:The efficacy of NB－UVB on vitiligo may be through regulating the levels of cytokines.

vitiligo；cytokine；NB－UVB

山東大學第二醫(yī)院皮膚科,濟南,250033