張 婭,項(xiàng)朋志,溫 敏

(1.云南省中醫(yī)中藥研究院中心實(shí)驗(yàn)室，云南 昆明 650223；2.云南開(kāi)放大學(xué)化學(xué)工程學(xué)院，云南 昆明 650222)

中藥黃精是百合科黃精屬多種植物根莖的總稱，我國(guó)有30多種[1]。中國(guó)藥典收載了黃精(PolygonatumsibiricumRed.)、多花黃精(PolygonatumcyrtonemaHua.)和滇黃精(PolygonatumkingianumColl.et Hemsl.)3種植物為原生藥[2]。我國(guó)各省市均有分布，主要集中在貴州、云南、四川、內(nèi)蒙古、遼寧、吉林、黑龍江、河北、安徽、湖北等省。黃精性平、味甘，入脾、腎、肺經(jīng)，具有提高免疫力、降血糖、降血脂、抗菌、抗病毒、抗腫瘤等藥理作用[3-4]。黃精在臨床上主要用于治療糖尿病、冠心病、高脂血癥、白細(xì)胞減少癥和艾滋病等。研究表明，黃精主要含多糖、低聚糖、黃精皂苷、氨基酸、黃酮及微量元素等活性成分。現(xiàn)代藥理研究表明，黃精多糖對(duì)老齡大鼠淋巴細(xì)胞百分率、紅細(xì)胞、晶體核、晶體皮質(zhì)超氧化物歧化酶(SOD) 活性、肝臟和腎臟脂褐質(zhì)含量、心臟脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物含量、腦中β型單胺氧化酶活性均有明顯的改善作用[5]。

將野生滇黃精引種到云南山地仿野生撫育，一年后將其塊根進(jìn)行無(wú)性繁殖，得到一年后子代植株；又將一年后子代塊根進(jìn)行無(wú)性繁殖，得到二年后子代植株。對(duì)引種的野生黃精、一年后子代、二年后子代植株的塊根進(jìn)行主要有效成分——黃精多糖的含量測(cè)定及比較，擬為進(jìn)一步評(píng)價(jià)黃精仿野生撫育后藥材品質(zhì)及安全性提供依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 材料、試劑與儀器

新鮮的黃精地下塊根(引種野生黃精、一年后子代、二年后子代),采自云南省文山地區(qū)西疇縣中藥材仿野生種植基地。

葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品，中國(guó)藥品生物制品檢定所；蒽酮、硫酸、乙醇，分析純，廣東華光科技股份有限公司；實(shí)驗(yàn)用水均為超純水。

Sartorius BT 224S型分析天平；DFT-200型手提式高速萬(wàn)能粉碎機(jī)，溫嶺林大機(jī)械有限公司；DZF-6020型真空干燥箱，上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠；KQ-350M型超聲清洗儀，東莞科橋超聲設(shè)備有限公司；XMTD-4000型電熱恒溫水浴鍋，北京永光明醫(yī)療儀器廠；ELGA Classic UF型超純水系統(tǒng)；TU-1900型雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密稱取干燥至恒質(zhì)量的無(wú)水葡萄糖對(duì)照品33 mg置于100 mL容量瓶中,加水溶解并稀釋至刻度，搖勻即得對(duì)照品溶液。分別精確吸取葡萄糖對(duì)照品溶液0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL、0.6 mL置于標(biāo)號(hào)具塞試管中,再分別補(bǔ)水至2 mL，搖勻；在冰水浴中緩緩精密滴加8 mL 0.2%蒽酮-硫酸溶液，混勻,放冷后置水浴中保溫10 min，取出，立即置冰水浴中冷卻10 min，取出；以同樣方法處理的蒸餾水樣為空白，在582 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度(A)。以吸光度為縱坐標(biāo)、葡萄糖濃度(c)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.2 供試品溶液的制備

將黃精(引種野生黃精、一年后子代、二年后子代)植株的取樣塊根切片后置真空干燥箱中，60 ℃干燥至恒質(zhì)量。精密稱取約0.25 g，置具塞錐形瓶中，加80%乙醇150 mL，超聲處理20 min，趁熱過(guò)濾，殘?jiān)?0%熱乙醇洗滌3次，每次10 mL；將殘?jiān)盀V紙置錐形瓶中，加水150 mL，超聲處理20 min，趁熱過(guò)濾，殘?jiān)板F形瓶用熱水洗滌4次，每次10 mL；合并濾液與洗液，放冷，轉(zhuǎn)移至250 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得供試品溶液。精密量取供試品溶液1 mL，置10 mL具塞干燥試管中，再精密量取1 mL水加至試管中，搖勻，按1.2.1方法測(cè)定吸光度，由回歸方程得多糖溶液的濃度，計(jì)算黃精多糖的含量。

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖1)

圖1 對(duì)照品的標(biāo)準(zhǔn)曲線

由圖1可知，在3.3～19.8 μg·mL-1范圍內(nèi)，葡萄糖濃度與吸光度呈良好的線性關(guān)系。擬合回歸方程為：A=0.01507c+0.06107，R=0.9992。

2.2 引種野生黃精、一年后子代藥材、二年后子代藥材中多糖含量的測(cè)定結(jié)果(表1)及比較

由表1可知，引種野生黃精經(jīng)過(guò)仿野生撫育后，其子代藥材中多糖含量均高于原引種藥材，且一年后子代藥材中的多糖含量明顯高于二年后子代藥材。該結(jié)果將為今后黃精的仿野生撫育后不同繁殖代中多糖含量變化趨勢(shì)的判斷提供參考，為確定最佳采收年限提供依據(jù)。

表1仿野生撫育后不同繁殖代藥材中的多糖含量

Tab.1The contents of polysaccharide of seedlingsand different breeding generations

2.3 討論

由于人工栽培的黃精量一直較小，因此其來(lái)源以野生藥材為主，但是隨著黃精需求量的日益增加，黃精的生態(tài)環(huán)境遭到破壞，導(dǎo)致野生資源急劇減少，由此人們逐漸開(kāi)始對(duì)黃精的野生變家種栽培技術(shù)、高產(chǎn)栽培技術(shù)等進(jìn)行研究，并做了許多開(kāi)創(chuàng)性的工作[6-9]?；谶@樣的現(xiàn)狀，作者將野生黃精引種到山地進(jìn)行仿野生撫育，在其生長(zhǎng)過(guò)程中除了每年采挖塊根進(jìn)行子代繁殖外，讓其在自然環(huán)境中生長(zhǎng)，不再進(jìn)行任何人為的干預(yù)，這是黃精的栽培研究的首次嘗試， 以期能成為緩解野生黃精資源枯竭的有效而可行的途徑。

黃精經(jīng)過(guò)仿野生撫育后，其有效成分多糖總體呈上升趨勢(shì)，這與潘德芳等[10]報(bào)道的九華山地區(qū)的不同育成年份的黃精中多糖的含量變化基本相同。但作者創(chuàng)新性地考察子代與母代之間含量變化趨勢(shì)，并不是單一考察生長(zhǎng)年限對(duì)含量的影響。

幾年來(lái)，通過(guò)對(duì)黃精進(jìn)行山地仿野生撫育，初步發(fā)掘到了仿野生撫育的優(yōu)勢(shì)：既能夠保證產(chǎn)出藥材的安全(減少重金屬、農(nóng)藥殘留等)，也能夠保證產(chǎn)出藥材的有效成分含量，這是解決黃精野生種群退化、野生資源日益枯竭的有效途徑，相關(guān)研究將繼續(xù)深入。

3 結(jié)論

將野生黃精進(jìn)行山地仿野生撫育，為初步評(píng)價(jià)其撫育后子代藥材的質(zhì)量，采用紫外分光光度法對(duì)引種種苗藥材、一年后子代藥材、二年后子代藥材中的有效成分黃精多糖進(jìn)行含量測(cè)定和比較。結(jié)果表明：子代藥材中的有效成分含量比種苗藥材中的明顯上升，一年后子代的有效成分含量明顯高于二年后子代，其有效成分代謝積累機(jī)制有待進(jìn)一步的研究。

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